Лабораторная работа 4. Количественное определение концентрации молочной кислоты в сыворотке крови по методу Бюхнера
Молочная кислота в организме является конечным продуктом гликолиза и гликогенолиза – анаэробных процессов окисления глюкозы и гликогена. Значительное количество молочной кислоты образуется в мышцах, поступает в кровь, переносится к сердечной мышце и в печень, где окисляется и используется как энергетический материал.
Принцип метода. Молочная кислота вследствие нагревания с концентрированной серной кислотой превращается в уксусный альдегид, который при взаимодействии с гидрохиноном образует соединение красно-коричневого цвета. Количество молочной кислоты определяют колориметрически на ФЭК при синем светофильтре (λ=490 нм).
Материалы и реактивы: сыворотка крови, 5% раствор метафосфорной кислоты, 10 % раствор сульфата меди, сухой гидроксид кальция, концентрированная серная кислота, 20% раствор гидрохинона, стандартный раствор молочной кислоты, дистиллированная вода.
Ход работы. В две сухие пробирки налить по 6 мл дистиллированной воды. Затем в первую добавить 1 мл стандартного раствора молочной кислоты, во вторую – 1 мл сыворотки крови. Для осаждения белков влить в каждую пробирку по 1 мл метафосфорной кислоты, встряхнуть и оставить на несколько минут, осадок отделить. К фильтратам прибавить по 1 мл 10 % раствора сульфата меди и по 0,5 г гидроксида кальция. Пробы перемешать, через 5 мин отфильтровывать. Отмерить по 1 мл фильтрата в пробирки с притертыми крышками, прибавить по 0,1 мл 10 % раствора сульфата меди и по 4 мл концентрированной серной кислоты. Поставить на кипящую водяную баню на 1,5 мин. Охладить, прибавить по 0,1 мл 20 % спиртового раствора гидрохинона, хорошо перемешать и кипятить в течение 15 мин. Пробирки охладить и колориметрировать при синем светофильтре.
|
|
|
Концентрацию молочной кислоты рассчитывают по формуле:
,
где С – концентрация молочной кислоты в сыворотке крови, мМ;
Сст. – концентрация молочной кислоты в стандартном растворе;
Ест.- оптическая плотность стандартного раствора молочной кислоты;
Еопыт. – оптическая плотность опытной пробы.
Клинико-диагностическое значение. В крови здорового человека концентрация молочной кислоты составляет 1-2 мМ. Её увеличение может быть связано с выполнением человеком интенсивной мышечной работы без достаточного поступления кислорода. При этом не происходит достаточное окислительное декарбоксилирование пирувата до ацетил-КоА, а увеличение концентрации восстановленого НАД приводит к образованию лактата. В случае достаточного поступления кислорода лактат превращается в пируват.
Наблюдается увеличение содержания молочной кислоты при остром гнойном воспалительном поражении тканей, тяжелой анемии, эпилепсии, тетании, столбняке, гипоксии, связанной с сердечной и легочной недостаточностью, злокачественными новообразованиями, заболеваниями печени (остром гепатите, циррозе), сахарном диабете, почечной недостаточности, полиомиелите, лейкозе, интенсивных и длительных мышечных нагрузках и др.
|
|
|
Любые патологические процессы, сопровождающиеся гипоксическими состояниями, вызывают лактатацидоз. Для них характерно увеличение соотношения лактат/пируват (порядка 10:1).
Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 75; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!