Лабораторная работа 7. Определение содержания холестерола в сыворотке крови методом Илька
Биохимические исследования содержания в крови холестерина и его эфиров имеют важное диагностическое значение. Наиболее распространенным заболеванием, связанным с нарушениями обмена холестерина, является атеросклероз. При атеросклерозе содержание холестерина в сыворотке крови увеличивается и происходит его отложение в стенках артерий.
Принцип метода. Холестерин в присутствии уксусного ангидрида и смеси концентрированных серной и уксусной кислот дает изумрудно-зеленое окрашивание (цветная реакция Либермана-Бурхард), интенсивность которого пропорциональна содержанию холестерина в пробе.
Материалы и реактивы:
1. Цветной реактив Либермана-Бурхард (представляет собой смесь ледяной уксусной кислоты, уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты в соотношении 1:5:1 по объему).
2. Стандартный раствор холестерина (2 г/л) в этиловом спирте
Ход работы.
Анализ опытной пробы. В сухую пробирку налить 2,0 мл цветного реактива, медленно и осторожно добавить по 0,1 мл негемолизированной сыворотки так, чтобы раствор стек по стенке пробирки. Пробирку энергично встряхнуть 10-12 раз. Термостатировать 20 мин в темноте при +37оС. Колориметрировать против реактива Либермана-Бурхард при красном светофильтре (630-690 им) и длине оптического пути 0,5 см. Количество холестерина в пробе (0,1 мл) определить с помощью калибровочного графика и выразить в г/л.
Построение калибровочного графика. Приготовить 5 пробирок с разведением стандартного раствора холестерина согласно таблице.
|
|
|
| Пробирка | |||||
| Стандартный р-р холестерина, мл | 0,2 | 0,4 | 0,6 | 0,8 | 1,0 |
| Реактив Либермана-Бурхард, мл | 0,8 | 0,6 | 0,4 | 0,2 | – |
| Количество холестерина в пробе, мг |
В 5 сухих пробирок налить по 2 мл цветного реактива и по 0,1 мл калибровочного раствора из каждой пробы (по таблице) соответственно. Обработать пробы аналогично опытной. Построить калибровочный график.
Клинико-диагностическое значение. Нормальное содержание холестерола в крови человека составляет 1,5–2,5 г/л. Увеличение содержания холестерола в крови – наиболее достоверный фактор риска развития коронарного атеросклероза, ишемической болезни сердца и инфаркта миокарда. Наиболее высокий уровень холестерина зафиксирован при генетических нарушениях в обмене липопротеинов. Вторичная гиперхолестеринемия наблюдается при заболеваниях печени, заболеваниях почек (гломерулонефрите, нефротическом синдроме с отёками, хронической почечной недостаточности), злокачественной опухоли поджелудочной железы, гипертонической болезни, эндокринных заболеваниях. Очень высокое содержание холестерина в крови (в 5 раз выше нормального) отмечено при сахарном диабете и липоидном нефрозе.
|
|
|
В качестве веществ гипохолестеринемического действия применяются некоторые ингибиторы биосинтеза холестерина.
Гипохолестеринемия наблюдают в период голодания, при гипотиреозе, острых инфекционных заболеваниях, пневмонии, бронхите, анемии, гемолитической желтухе, злокачественных опухолях печени, остром гепатите и др.
Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 39; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!