Лабораторная работа 5. Количественное определение концентрации пировиноградной кислоты в моче колориметрическим методом

⇐ ПредыдущаяСтр 23 из 52Следующая ⇒

Пировиноградная кислота – один из центральных метаболитов углеводного обмена. Определение ее количества в плазме крови и моче широко используют с диагностической целью в клинической практике.

Принцип метода. Пировиноградная кислота с 2,4-динитрофенилгидразином (2,4-ДНФГ) в щелочной среде образует 2,4-динитрофенилгидразон пировиноградной кислоты коричнево-красной окраски, интенсивность которой пропорциональна концентрации пировиноградной кислоты и определяется колориметрически.

Материалы и реактивы: моча, стандартный раствор пирувата (пировиноградная кислота) – 625 мг в 100 мл воды, 0,1 % раствор 2,4-ДНФГ в 2н растворе соляной кислоты, 12 % раствор гидроксида натрия, дистиллированная вода.

Ход работы. Взять 2 пробирки, в одну налить 0,1 мл мочи, во вторую – 0,1 мл пировиноградной кислоты, затем в обе пробирки добавить по 0,9 мл дистиллированной воды. После этого долить по 0,5 мл 0,1% раствора 2,4-ДНФГ, смешать и на 20 мин поставить в темное место. Затем добавитьпо 1 мл 12 % раствора гидроксида натрия и через 10 мин колориметрировать на ФЭК против контроля (воды) при синем светофильтре (λ=490 нм).

Концентрацию пировиноградной кислоты вычислить по формуле:

где С_ст. – концентрация стандартного раствора пировиноградной кислоты;

С_опыт. – концентрация пировиноградной кислоты в моче, мг/сутки;

Е_опыт. – оптическая плотность исследуемой пробы;

Е_ст. – оптическая плотность стандарта;

V – суточное количество мочи; а – 0,1 мл мочи, взятой для анализа.

Клинико-диагностическое значение. В крови здорового человека концентрация пировиноградной кислоты составляет 45-115 мкМ. С мочой за сутки выделяется 15-25 мг пировиноградной кислоты. Содержание пировиноградной кислоты в крови (вместе с молочной кислотой) повышается во время усиленной мышечной работы, а также при некоторых патологических состояниях, сопровождающихся нарушением окислительного декарбоксилирования; в результате возникают судороги (тетания, эпилепсия, столбняк). Выделение пировиноградной кислоты с мочой увеличивается при недостаточности витамина В₁, сердечной недостаточности, токсикозах, заболеваниях печени, инсулинозависимом сахарном диабете, а также после введения препаратов, нарушающих работу сердечной мышцы - камфары, стрихнина, адреналина.

Содержание пировиноградной кислоты резко повышается в спинномозговой жидкости при травматических и воспалительных заболеваниях ЦНС (менингит, абсцесс мозга). Под влиянием наркоза уровень пировиноградной кислоты в крови снижается.

Таким образом, основной причиной накопления в крови пировиноградной и молочной кислот является нарушение их дальнейшего взаимопревращения в окислительно-восстановительных процессах.

Контрольные вопросы по теме ”Метаболизм углеводов и его регуляция”:

1. Аэробное и анаэробное окисление глюкозы, общая характеристика процессов.

2. Анаэробное окисление глюкозы. Последовательность реакций и ферменты гликолиза.

3. Аэробное окисление глюкозы. Этапы преобразования глюкозы до СО₂ и Н₂О.

4. Окислительное декарбоксилирование пирувата. Ферменты, коферменты и последовательность реакций в мультиферментном комплексе.

5. Образование АТФ в ходе гликолиза: субстратное фосфорилирование и челночные механизмы окисления гликолитического НАДН.

6. Сравнительная характеристика биоэнергетики аэробного и анаэробного окисления глюкозы, эффект Пастера.

7. Фосфоролитический путь расщепления гликогена в печени и мышцах. Регуляция активности гликогенфосфорилазы.

8. Биосинтез гликогена: ферментативные реакции, физиологическое значение. Регуляция активности гликогенсинтазы.

9. Механизмы регуляции гликогенолиза и гликогенеза за счет каскадного цАМФ-зависимого фосфорилирования ферментных белков.

10. Генетические нарушения метаболизма гликогена (гликогенозы, агликогенозы).

11. Глюконеогенез: субстраты, ферменты и физиологическое значение процесса.

12. Глюкозо-лактатный цикл (цикл Кори) и глюкозо-аланиновый циклы.

13. Глюкоза крови (глюкоземия): нормогликемия, гипо- и гипергликемия, глюкозурия. Сахарный диабет – патология обмена глюкозы, его типы.

14. Гормональная регуляция концентрации и обмена глюкозы крови.

15. Пентозофосфатный путь окисления глюкозы: схема процесса и биологическое значение.

16. Метаболические пути преобразования фруктозы и галактозы; наследственные энзимопатии их обмена.

Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 55; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 18 19 20 21 222324 25 26 27 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!