Лабораторная работа 6. Определение содержания общих липидов в сыворотке крови

⇐ ПредыдущаяСтр 25 из 52Следующая ⇒

Содержание общих липидов в сыворотке крови является одним из показателей липидного обмена и часто используется для целей лабораторной диагностики.

Принцип метода: продукты распада ненасыщенных липидов образуют с ванилиновым реактивом окрашенные соединения. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации липидов в пробе и определяется колориметрически.

Материалы и реактивы:

1. Экстрагирующая смесь (95% этиловый спирт и этиловый эфир 3:1 по объему).

2. Концентрированная серная кислота (уд.вес 1,84).

3. Ванилиновый реактив: смесь 0,6% раствора ванилина и концентрированной ортофосфорной кислоты (уд. вес 1,7) в соотношении 1:4 по объему.

4.Холестериновый эталон. Готовится разведением стандартного раствора холестерина (50 г/л) в этиловом спирте в 10 раз хлороформом. Конечная концентрация 5 г/л.

Ход работы:

1-й этап: подготовка опытной пробы. Налить в пробирку 2 мл экстрагирующей смеси. Добавить 0,1 мл сыворотки крови. Закрыть пробкой. В течение 30 мин периодически встряхивать. Дать смеси отстояться. Отобрать 0,2 мл экстракта в сухую пробирку и выпарить.

2-й этап: подготовка стандартной пробы. 1 мл холестеринового эталона налить в сухую пробирку и выпарить.

3-й этап: кипячение на водяной бане. К опытной пробе, выпаренному холестериновому эталону и в пустую сухую пробирку (холостая проба) добавить по 0,4 мл концентрированной серной кислоты, пробирки закрыть пробками и поставить пробы в кипящую водяную баню на 10 мин. Пробирки при этом должны быть заткнуты пробками.

4-й этап: окрашивание. В каждую из 3-х пробирок добавить 4 мл ванилинового реактива, перемешать. Окраска развивается в течение 30 мин.

5-й этап: измерения и расчет. Колориметрировать опытную и стандартную пробы при 530 нм (желто-зеленый светофильтр) и длине оптического пути 0,5 или 1 см против холостой пробы. Сравнить оптическую плотность и определить концентрацию липидов в сыворотке крови. Выразить ее в г/л.

С = С _станд ´ Е _опыт /Е _станд,

где С – концентрация холестерина в стандартной пробе (5 г/л),

Е_опы_т и Е_станд – оптическая плотность опытной и стандартной пробы, соответственно.

Клинико-диагностическое значение. Содержание общих липидов в сыворотке крови здоровых людей составляет от 4 до 8 г/л. Физиологическая (алиментарная) гиперлипемия развивается через 2-3 ч после приема пищи богатой жирами и максимальных значений достигает через 4-6 ч.

Повышение содержания общих липидов в сыворотке крови наблюдается при ряде заболеваний: диабете (снимается введением инсулина), липоидном нефрозе, токсикозах, циррозе, остром гепатите, ожирении, атеросклерозе, ишемической болезни сердца, гипотериозе, панкреатите, злоупотреблении алкоголем, а также при голодании. Снижение содержания липидов в сыворотке крови обнаруживается при гипертиреозе, гипотрофии и т.д.

Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 51; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 20 21 22 23 242526 27 28 29 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!