Лабораторная работа 3. Выявление сиаловых кислот в сыворотке крови
Принцип метода. Сиаловые кислоты – производные нейраминовой кислоты. При нагревании сиаловой кислоты с реактивом Гёсса, содержащим ТХУ (осаждает белки) и концентрированную H2SO4 (гидролизует олигосахариды и полисахариды и дегидратирует гексозы и пентозы и их производные). Продукты реакции окрашены в буровато-розовый цвет. Интенсивность окраски определяется колориметрически.
Материалы и реактивы: сыворотка крови, 10 % раствор ТХУ, реактив Гесса (94 объёма ледяной уксусной кислоты и 6 объёмов концентрированной H2SO4).
Ход работы. В сухую центрифужную пробирку налить 1 мл сыворотки крови, добавить 1 мл 10 % раствора ТХУ. Смесь перемешать, пробирку закрыть фольгой и поставить в кипящую водяную баню на 5 мин.
Вынуть пробирку из водяной бани и охладить. Это приводит к высвобождению нейраминовой кислоты из молекул гликопротеинов. Нейраминовая кислота переходит в раствор, в осадке остаются белки. Смесь центрифугировать 5 мин при 3000 об/мин. После центрифугирования к 0,4 мл надосадочной жидкости добавить 5 мл реактива Гесса и снова кипятить в водяной бане в течение 30 мин, закрыв пробирку фольгой. После охлаждения колориметрировать на ФЭК в кюветах толщиной 10 мл против воды при зеленом светофильтре (540 нм). Полученную величину экстинкции умножить на 1000. Результаты измерения выразить в условных единицах (у.е.). В норме эта величина колеблется от 100 до 195 у.е., что отвечает содержанию сиаловых кислот от 5,5 до 7,9 г/л ацетилнейраминовой кислоты.
|
|
|
Клинико-диагностическое значение. В норме у здорового человека с мочой за сутки выделяется до 0,02 % глюкозы, которые не определяют обычными методами. Появление глюкозы в моче в большом количестве, или глюкозурия, связано с различными причинами. Одной из них может быть гипергликемия, при которой уровень сахара в крови превышает почечный порог для глюкозы (8-10 мМ). Другой причиной могут быть заболевания почек, связанные с нарушением реабсорбции (обратного всасывания) глюкозы в почечных канальцах.
Исследования сиаловых кислот в крови и моче имеет важное диагностическое значение. Производные нейраминовой кислоты – сиаловые кислоты – появляются в повышенном количестве в крови (гиперсиалемия) вследствие деструктивных процессов в различных органах. Количество сиаловых кислот увеличивается при инфекционных заболеваниях, ревматизме, туберкулезе, злокачественных опухолях костной ткани, легких, коллагенозах, нефротическом синдроме, остеомиелите и др.
Снижение содержания сиаловых кислот в крове (гипосиалемия) наблюдают у больных анемией, болезнью Вильсона-Коновалова, а также дегенеративными процессами в ЦНС.
В моче сиаловые кислоты обнаруживают только при протеинурии.
Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 47; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!