Лабораторная работа 9. Исследование цитохромоксидазы мышц
Цитохромоксидаза – фермент, относящийся к оксидоредуктазам. Она завершает дыхательную цепь, окисляя цитохром с путем переноса электронов на кислород воздуха. По химической природе цитохромоксидаза – это медьгемопротеин, то есть в простетической его части содержится гем, а в нём медь.
Выявление цитохромоксидазы основана на ее способности окислять при участии кислорода воздуха не только цитохромы, но и некоторые органические соединения, в частности, парафенилендиамин и a-нафтол (реактив НАДИ). При окислении двух последних соединений образуется окрашенный продукт – индофенол синий.
Материалы и реактивы:мышечная ткань, 1 % водный раствор n-фенилендиамина, 1 % спиртовой раствор a-нафтола.
Ход работы. 1. Взять 0,5-0,7 г свежей мышечной ткани, измельчить ножницами, поместить в ступку с 20-кратным объемом дистиллированной воды и растереть в течение 10 мин. Воду осторожно слить, а твердый остаток фильтровать через двойной слой марли. Мышечный гомогенат промывать водой, пока она не будет прозрачной.
2. Отмытый от водорастворимых ферментов гомогенат из мышечной ткани делить на две части. Одну часть поместить на фильтровальную бумагу, а вторую – в пробирку, куда добавить 1 мл дистиллированной воды и кипятить 1 мин. После охлаждения жидкость осторожно слить в пробирку, оставшийся мышечный гомогенат перенести стеклянной палочкой на фильтровальную бумагу.
3. На оба кусочка мышц нанести по 1-2 капли индофенольного реактива "НАДИ". Через 5-10 мин на кусочке, который не кипятили, появляется сине-фиолетовая окраска как результат реакции окисления и конденсации a-нафтола и парафенилендиамина. Эта реакция катализируется цитохромоксидазой мышц. На прокипяченном кусочке мышц реакция отрицательная из-за тепловой денатурации фермента.
|
|
|
Контрольные вопросы по теме ”Основные закономерности обмена веществ. Цикл трикарбоновых кислот”:
1. Обмен веществ (метаболизм)– общие закономерности протекания катаболических и анаболических процессов.
2. Общие стадии внутриклеточного катаболизма биомолекул: белков, углеводов, липидов.
3. Цикл трикарбоновых кислот. Локализация, последовательность ферментативных реакций, значение в обмене веществ.
4. Энергетический баланс цикла трикарбоновых кислот. Физиологическое значение реакций ЦТК.
Контрольные вопросы по теме ”Молекулярные основы биоэнергетики”:
1. Реакции биологического окисления, типы реакций (дегидрогеназные, оксидазные, оксигеназные) и их биологическое значение. Тканевое дыхание.
2. Ферменты биологического окисления в митохондриях: пиридин-, флавинзависимые дегидрогеназы, цитохромы.
|
|
|
3. Последовательность компонентов дыхательной цепи митохондрий. Молекулярные комплексы внутренних мембран митохондрий.
4. Окислительное фосфорилирование: пункты сопряжения транспорта электронов и фосфорилирования, коэффициент окислительного фосфорилирования.
5. Хемиосмотическая теория окислительного фосфорилирования, АТФ-синтетаза митохондрий.
6. Ингибиторы транспорта электронов и разобщители окислительного фосфорилирования.
Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 33; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!