Шупик А. С., Колесникова Е. Н., Демьяненко Е. В.
ОЦЕНКА ЭФФЕКТИВНОСТИ ВЛИЯНИЯ КОСТНОМОЗГОВЫХ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК И ОЦЕНКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ ПОЧЕЧНОЙ ТКАНИ КРЫС ПОСЛЕ ОСТРОГО ИММОБИЛИЗАЦИОННОГО СТРЕССА Научный руководитель д-р мед. наук, проф. Бойченко П. К.
Кафедра медицинской химии
ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ЛУГАНСКОЙ НАРОДНОЙ ЕСПУБЛИКИ «ЛУГАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ СВЯТИТЕЛЯ ЛУКИ», г. Луганск
Актуальность. Известно, что почки крайне чувствительны почек к действию различных факторов среды, но в то же время в реализацию ответных компенсаторно-приспособительных механизмов вовлекаются все отделы нефрона. Известно, что действие стрессорных факторов различной природы приводит к гипоксии органов и тканей, которая в свою очередь вызывает активацию свободнорадикальных процессов, развитие оксидантного стресса, интенсификацию процессов апоптоза. Все это приводит к изменениям макроструктуры и микроструктуры почек, а, следовательно, и функции этого органа. Ввиду значительной распространенности заболеваний почек среди населения возникает необходимость поиска новых инновационных методов лечения, одним из которых может быть трансплантация клеток с высоким пролиферативным потенциалом. Наиболее перспективным направлением клеточной терапии считается использование мезенхимальных стволовых клеток (МСК) костномозгового происхождения, благодаря их высокой миграционной способности, значительной пролиферативной активности и легкой индукции дифференцировки. Эти клетки способны стимулировать регенерацию и восстанавливать поврежденные клеточные структуры путем синтеза цитокинов и факторов роста.
|
|
|
Цель: Изучение влияния аллогенных мезенхимальных стволовых клеток на показатели функциональной активности почечной ткани крыс (суточного диуреза, концентрации креатинина и мочевины сыворотки крови и мочи, скорости клубочковой фильтрации (СКФ), канальцевой реабсорбции) после 24-часового иммобилизационного стресса.
Материалы и методы. Эксперимент выполнен с использованием 208 самцов беспородных белых крыс массой 225 ± 25 граммов. Костномозговые мезенхимальные стволовые клетки извлекали из полостей бедренных и большеберцовых костей половозрелых лабораторных крыс. Полученные клетки культивировали в питательной среде ИГЛА-МЕМ с L-глютамином, 10% телячьей эмбриональной сывороткой и антибиотиками 14 дней при 37° С условиях СО2–инкубатора со сменой среды 1 раз в 5 дней. Культуру фенотипировали непрямым иммунофлюоресцентным методом с помощью моноклональных антитела к СД 73, СД 105, СД 44, СД 90 и СД 54. Острый стресс моделировали 24 часовой иммобилизацией крыс в индивидуальных фиксирующих камерах. Животных разделили на группы: № 1 – интактную, № 2 – контрольную (после 24-часовой иммобилизации крысам вводили по 1 мл стерильного физиологического раствора в латеральную вену хвоста), № 3 – экспериментальную (после 24-часовой иммобилизации крысам вводили по 5 млн МСК в латеральную вену хвоста). Для сбора суточного количества мочи животных помещали в обменные клетки на 1, 3, 7, 14, 21 и 30 сутки наблюдения. Стандартными методами в моче определяли концентрацию креатинина и мочевины. Предварительно наркотизированных эфиром крыс выводили из эксперимента путем декапитации на 1, 3, 7, 14, 21 и 30 сутки исследования. Производили забор крови для получения сыворотки, в которой на биохимическом анализаторе определяли содержание мочевины и креатинина. Рассчитывали скорость клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции воды. Данные обрабатывали программой «Statistica 10.0» Достоверность различий между группами оценивали по критерию Манна – Уитни. Достоверно значимыми считали отклонения при р<0,05. Данные представлялись в виде медианы и интерквартильного размаха.
|
|
|
Результаты и их обсуждение. Опытным путем доказано, что показатели сыворотки крови и почечной ткани, зависят от срока наблюдения в послестрессовом периоде и значительно изменяются под действием мезенхимальных стволовых клеток. Уровни креатинина и мочевины сыворотки крови на 3 сутки были достоверно выше интактных значений как в группе № 2 (соответственно на 28,36% и 54,34%, р<0,05), так и в группе № 3 (соответственно на 28,64% и 40,1%, р<0,05). Интактные цифры креатинина достигались в контрольной группе к 30 суткам, а в экспериментальной – к 14 суткам наблюдения. У крыс группы № 2 уровень мочевины к 30 суткам был выше значений группы № 1 на 4,38%, а в группе № 3 уже на 21 сутки достигал интактных цифр. При этом показатели группы № 3 были ниже контрольных значений во все сроки наблюдения. Показатели мочевины и креатинина мочи в у крыс группы № 2 были ниже интактных значений в 1 сутки на 14,5% и 24,15% соответственно, на 3 сутки – на 33,53% и 40,88%, на 7 сутки на 26,96% и 32,73%, на 14 сутки – на 14,94% и 22,07% (р<0,05). У крыс, получавших клеточную терапию, в 1 и 3 сутки наблюдения показатели мочевины и креатинина мочи статистически не отличались от контрольных значений, на 7 сутки были выше контроля соответственно на 18,42% и 17,99%, на 14 сутки – на 14,46% и 23,53% (р<0,05). При этом суточный диурез увеличился на 1 и 3 сутки как во второй (на 23,94% и 35,21%), так и в третьей группе (на 18,31% и 32,39%). У контрольных крыс суточный диурез увеличился на 7-е сутки на 28,17%, на 14-е – на 19,72%, а у крыс, получавших МСК, он был ниже контрольных значений на 7 сутки на 12,09%, на 14 сутки – на 12,94%. Что касается скорости клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции, то у контрольных животных эти показатели были ниже интактных в 1 сутки на 26,315% и 2,65% соответственно, на 3-и сутки – на 37,6% и 4,56%, на 7-е сутки – на 26,315% и 2,74%, на 14-е сутки – на 13,53% и 1,51%. У экспериментальных животных показатели СКФ превышали контрольные значения на 7-е сутки на 12,245%, на 14-е сутки – на 9,57%. Значения канальцевой реабсорбции у крыс, леченных МСК, на 7-е сутки повысились на 1,52%, а на 14-е – на 1,28% по сравнению с контрольными значениями. Полученные экспериментальные данные указывают на более выраженные нарушения фильтрационной способности почек на фоне иммобилизационного стресса.
|
|
|
|
|
|
Выводы. Установлено, что острая иммобилизация приводит к ухудшению показателей функциональной активности почечной ткани, что проявляется снижением скорости клубочковой фильтрации и канальцевой реабсорбции на фоне повышения суточного диуреза и нарастания креатинина и мочевины в сыворотке крови. Применение аллогенных мезенхимальных стволовых клеток способствовало более быстрому восстановлению значений функциональных показателей до интактных цифр у крыс экспериментальной группы по сравнению с контролем.
УДК 617.586-007.5-084-053.5
Бондарь А.В.
Дата добавления: 2019-08-30; просмотров: 159; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!