Особенности гистологического исследование материала при инфекционных заболеваниях

Гистологическое исследование органов тру­па в случаях смерти от инфекционных заболеваний   является обязательным. Гистологическое исследование органов трупа имеет большое значение для подтверждения патологоанатомического диагноза, для детализации патологического про­цесса. Особое значение гистологическое исследование секционного материала приобретает в случаях смерти от инфекционных болезней; сопоставленные с данными бак­териологического или вирусологического исследования, оно может помочь установлению окончательного диагно­за.

Во время вскрытия из патологически измененных органов трупа (бугорки, узлы, язвы, абсцессы, рубцы и др.) вырезают острым ножом кусочки ткани с таким расчетом, чтобы захватить не только участок поражения, но и соседний участок, где видимых изменений не обнару­живается. Последнее очень важно для установления вза­имоотношений патологического процесса с окружающи­ми тканями. Вырезанные кусочки органов должны иметь вид пластинок размером не более 1х1х0,5 см. Кроме органов, в которых были обнаружены изменения, гисто­логическому обследованию подлежат также видимо не измененные паренхиматозные органы и головной мозг, из которых вырезают такие же кусочки.

Вырезанные для гистологического исследования ку­сочки органов следует подвергнуть фиксации. Обычно применяют 5-15% раствор нейтрального формалина.

Правила забора секционного материала для микробиологических исследований.Бактериологические и вирусологические исследования имеют важное, нередко решающее значение для оконча­тельного установления диагноза у умерших от инфек­ционных заболеваний, дают возможность выяснить этиологический фактор, что имеет большое эпидемиологическое значение, и принятия противоэпидемиче­ских мер.

При постановке окончательного заключения о причине заболева­ния необходимо базироваться не только на данных бактериологического или вирусологического исследований, а также учитывать сведения об эпидемиологии, клинические данные и патологоанатомического вскрытия. При проведении аутопсии умершего от инфекционного заболевания, кроме патологоанатома должен присутствовать врач-инфекционист и специалист-бактерио­лог, который, как правило, производит взятие из трупа материала для всех необходимых лабораторных исследований. Заключение об этиологии заболевания может быть получено не только на основании мазков, отпечатков и посевов, но также на основании посмертных серологических реакций, а в некоторых случаях только на основании биологической пробы путем заражения эксперименталь­ных животных.

Взятие материалов для бактериологического и виру­сологического исследований от трупа следует произво­дить как можно скорее после смерти больного. Следует знать, что длительное хранение трупа при температуре свыше 10°С создает условия, благоприятствующие быстрому гниению и поступлению гнилостных микробов в кровь и органы. Даже в случаях разложения трупа рекомендуется проводить бактериологическое и вирусо­логическое исследования. Необходимо произвести тщательное бактериологиче­ское исследование в первую очередь тех тканей и орга­нов, в которых морфологически обнаруживаются воспа­лительные изменения в виде флегмон, карбункулов, язв, абсцессов, пневмонических очагов, менингита. Рекомендуется исследовать также кровь, выделения (экссудат), ткань лимфатических узлов, селезенки, костного мозга, содержимое кишечника, желчного пузыря.

Техническое оснащение необходимое для бактериологического и ви­русологического исследований:

1) платиновая петля,

2) метал­лическая (лучше платиновая) лопаточка (шпатель),

3) мелкие и крупные стерильные пастеровские пипетки, а также обычные бактериологические пробирки,

4) сте­рилизованные шприцы емкостью 5—10 мл с иглами,

5) спиртовая горелка,

6) пакеты стерильной ваты и мар­ли,

7) чистый и денатурированный спирт,

8) йодная на­стойка,

9) предметные и покровные стекла,

10) ножницы, скальпели, пинцеты и желобоватый зонд,

11) набор пита­тельных сред; бульон, скошенный и прямой, агар в про­бирках и чашках Петри для дробных посевов,

12) сте­рильная ступка со стерильным пестиком для растирания,

13) физиологический раствор (стерильный) - 100 мл,

14) карандаши или чернила для нанесения надписей на стекле,

15) стерилизатор для кипячения инструментов
16) пробирка со стерильным глицерином (50% на физио­логическом растворе) с рН 7,4, закрытые резиновыми пробками,

17) 3% раствор фенола или 5% раствор лизо­ла для последующего обеззараживания инструментов и остатков посевного материала.

 

Для пересылки в микробиологическую лабораторию материалов от трупа необходимо иметь стерильные широкогорлые банки емкостью от 100—150 мл до 2 л со стеклянными пробками или, лучше, пропитанными пара­фином, корковыми, обвязанными пергаментной бумагой или полиэтиленовой пленкой. Взятие материала из органов на бактериологи­ческое исследование лучше производить на мес­те, когда они еще не извлечены из трупа. Например, при вскрытии полости черепа и рассечении твердой мозговой оболочки делают посевы из мягких мозговых оболочек, если там имеется экссудат. При вскрытии грудной полос­ти делают посевы из средостения, плевры, полости пери­карда и полости сердца, тканей легких. При вскрытии брюшной полости делают посевы с брюшины, из тканей печени, мочевого пузыря. Осторожно раздвигая органы, можно сделать посевы из брыжеечных лимфатических узлов, кишечника, червеобразного отростка, желчного пузыря, селезенки. При этом необходимо помнить, что посевы с поверхности органов делают до соприкосно­вения их с нестерильными предметами (перчатки, инстру­менты). Посевы из органов делают после прижигания раскаленной лопаточкой (шпателем) той поверхности, которую предполагают разрезать, и разрезание самого органа производят стерильным скальпелем или ножни­цами, что имеет большое значение для получе­ния объективных результатов посева. Посев крови для бактериологического исследования берут из сердца, локтевой и бедренной вен. При этом кровь из сердца забирается на микробиологический посев до вскрытия полости черепа и до извлечения головного мозга. Нужно следить за тем, чтобы при извлечении гру­дины не повредить крупные вены средостения и шеи, ина­че в полость правого сердца может попасть содержащий посторонние бактерии воздух. После осторожного извле­чения грудины разрезают сердечную сорочку, прокален­ным шпателем прижигают переднюю, поверхность право­го предсердия, куда вводят конец запаянной стерильной пипетки, который перед этим обламывают и обжигают над пламенем горелки, или иглу шприца, которыми наби­рают кровь.

Если полость черепа уже вскрыта, то все же не сле­дует отказываться от взятия крови из сердца, но лучше брать кровь из периферических сосудов. Если же вскры­тие уже закончено, то кровь берут чаще всего из локте­вой вены. Для посева необходимо брать 5-10 мл крови. Часть крови может быть использована также и для по­смертных серологических реакций, которые дают исклю­чительно ценные результаты для диагностики таких забо­леваний, как бруцеллез, туляремия, брюшной тиф, пище­вые токсикоинфекции, сифилис, а также почти при всех вирусных и риккетсиозных заболеваниях.

При взятии крови из локтевой вены область локтевой складки смазывают йодом, затем спиртом и обжигают, прокаленным на спиртовке скальпелем делают разрез в области вены; другим стерильным (или снова прокален­ным скальпелем) перерезают вену и в стерильную пи­петку или в шприц насасывают нужное количество крови. Если кровь из вен поступает в недостаточном количестве, то путем массирования предплечья от кисти к локтю усиливают ее истечение. После взятия крови ее засевают на питательные среды, а также оставляют для проведе­ния необходимых серологических реакций.

Пересылают кровь и другие жидкости из трупа в су­хих стерильных бактериологических пробирках, закры­тых резиновыми пробками. Можно пересылать (кровь и другие жидкости) также в запаянных с обеих сторон пастеровских пипетках. Пробирки (пипетки) укладывают в металлические коробки (пеналы) так, чтобы они не разбились, и сопровождают их соответствующей за­пиской.

Для получения жидкостей из полостей тела (напри­мер, из серозных полостей, суставов, желчного пузыря и др.) обнаженную от соседних тканей стенку полости прижигают раскаленным шпателем и через нее вводят стерильную пастеровскую пипетку или иглу шприца, ко­торыми и собирают содержимое полости.

Если это содержимое очень густое, можно разрезать стенку полости прокаленным ножом и взять материал стерильной платиновой петлей. Из желудочков невскры­того мозга жидкость можно добыть путем прокола через мозолистое тело.

Для бактериологического исследования ткани, сока органов (например, селезенки, лимфатических узлов, лег­кого и др.), лучше брать посевы, как указано выше, т. е. до изъятия органов из трупа, но можно исследовать орга­ны и после их извлечения. Поверхность органа прижига­ют хорошо прокаленным шпателем. На извлеченных же органах поверхность слегка смачивают тампоном со спиртом и обжигают. Затем на этом месте стерильным скальпелем делают разрез, из которого и берут мате­риал.

Если материал для исследования представляет плот­ную ткань (например, печень), то стерильными остроко­нечными ножницами вырезают с поверхности разреза маленький ее кусочек и одновременно прокаливают пла­тиновую петлю; не давая остыть петле, прикасаются ею к вырезанному кусочку, который крепко пристает к горя­чей петле. В таком виде кусочек тут же переносят на среду, на которой непроженной стороной производят по­севы. Можно также из органов вырезать крупные куски (например, размером 3X3X3 см), которые обмакнув в спирт и.дав стечь излишнему спирту, быстро обжигают на спиртовке, а затем стерильным инструментом разреза­ют и берут материал из центральной их части.

Если исследуют материал жидкий, например кровь, гной или жидкость с поверхности разреза селезенки, лим­фатических узлов и др., то его захватывают прокаленной, но остывшей платиновой петлей. Для засева большого количества жидкости ее набирают 1 —10 мл и засевают стерильной пипеткой.

Костный мозг извлекают из плоских костей (грудина, ребра, позвонки), выдавливая его сильным сжиманием распиленной кости костными ножницами, поверхность распила кости надо сначала обеззаразить путем обжига­ния на пламени. Костный мозг из трубчатых костей бе­рут стерильной лопаточкой или пинцетом после распила их и обеззараживания поверхности распила путем обжи­гания Бактериологическое исследование содержимого ки­шечника (на холеру, тиф, паратиф, бактериальную ди­зентерию и др.) производят путем посевов на обычные и специальные питательные среды. Следует иметь в виду, что для посева на бакто-агар Ж (для выделения возбу­дителя тифо-паратифозных и дизентерийных заболева­ний) нужно брать примерно в 10 раз большее количество материала, чем на обычные среды.

Важно помнить, что возбудители кишечных инфекций хорошо выделяются не только из содержимого кишечни­ка, но также из печени, желчи, селезенки, костного мозга, почек.

Бактериологическое исследование содержимого ки­шечника лучше всего производить в специальных бакте­риологических лабораториях. Для этого невскрытую и не промытую водой, перевязанную лигатурами с двух кон­цов кишечную петлю с содержимым помещают в стериль­ную сухую банку и пересылают в лабораторию.

Если уже во время вскрытия трупа возникает необ­ходимость взятия содержимого кишечника для бактерио­логического исследования, то, не вынимая кишечник, при­жигают серозную оболочку нагретым над пламенем го­релки шпателем или пластинкой желобоватого зонда и вводят в это место пастеровскую пипетку или стерильную иглу шприца, берут содержимое и по возможности не­медленно производят посевы на питательные среды. Мож­но произвести посев содержимого кишечника из трупа, вскрыв стерильными инструментами петлю кишки, пред­варительно продезинфицировав ее серозный покров там­поном, смоченным спиртом, или путем прижигания. Пос­ле вскрытия петли кишки - содержимое ее, взятое про­каленной и охлажденной петлей (или шпателем), немедленно переносят на соответствующие питательные среды. Хорошо также брать материал для посева из соскоба слизистой оболочки кишки. Следует, кроме того, взять мазки со слизистой оболочки кишки, в частности с язвенных поверхностей ее, для последующей фиксации мазков, окраски и микроскопического изучения. Из желчного пузыря берут содержимое (после при­жигания его стенки) стерильной пипеткой и производят посев на питательные среды для выделения возбудителей кишечной группы инфекций. Желчный пузырь может быть отправлен для исследования в стерильной банке целиком с предварительной перевязкой его шейки.

Необходимо помнить, что органы и их кусочки, посы­лаемые для бактериологического исследования, не сле­дует заливать каким-либо дезинфицирующим р а с т в о р о м.

Нельзя класть в банку кусочки от нескольких вскры­тий. Взятые от одного вскрытия разные органы рекомен­дуется класть в отдельные банки. Размер подлежащих исследованию частей органов должен быть не менее 3X3X3 см, мелкие органы (лимфатические узлы, черве­образный отросток) могут быть отосланы целиком.

Помимо посевов, необходимо произвести изучение от­печатков и мазков, сделанных на предметных стеклах (бактериоскопическое исследование), которое иногда уже на вскрытии может дать довольно точное представление об этиологии заболевания. Особенно полезны в этом от­ношении отпечатки органов. Отпечатки и мазки делают из органов и патологически измененных тканей, жидко­стей. Мазки и отпечатки можно фиксировать: 1) троек­ратным проведением (фламбирование) предметного стек­ла (мазок) через пламя горелки, при этом поверхность мазка должна быть обращена вверх; 2) смесью абсолют­ного спирта с абсолютным эфиром в равных количествах (смесь Никифорова) в течение 20—30 мин или метило­вым спиртом (метанол и даже денатурат) —5 мин. После фиксации отпечатки и мазки окрашивают метиленовым синим, фуксином по Граму, азур-эозином по Романовскому — Гимза и другими способами.

Некоторые особенности представляет взятие материа­ла при вирусных нейроинфекциях и риккетсиозах (энце­фалиты, полиомиелит, бешенство и др.). Основным мате­риалом для вирусологического исследования являются головной и спинной мозг, из различных отделов которого в строго асептических условиях берут кусочки размером 2X2X1 см. Кусочки нужно брать из коры головного мозга, подкорковых узлов, аммонова ро­га, варолиева моста, продолговатого мозга и из спинного мозга на различных уровнях. При выборе места взятия материала необходимо до известной степени руководст­воваться клиническими данными о локализации патоло­гического процесса.

При вирусных нейроинфекциях обнаженную (по обыч­ному способу) от мягких тканей черепную коробку обмывают спиртом. Распил производят обычной пилой, пред­варительно обработанной спиртом, и при этом стараются не повредить твердую мозговую оболочку, которую также обрабатывают спиртом, обжигают и после этого разрезают стерильными ножницами. Для вирусологического исследования кусочки из моз­га также надо брать стерильными ножницами и поме­щать в стерильную посуду или в стерильный 50% рас­твор глицерина.

Для пересылки взятых материалов в микробиологиче­скую и вирусологическую лаборатории производят упа­ковку отпечатанных банок, пробирок и пипеток. Эта упа­ковка должна гарантировать их от разбивания.

Все подлежащие упаковке предметы (банки и др.), находившиеся в секционной или соприкасавшиеся с труп­ным материалом, подвергают тщательной влажной дезин­фекции, проведение которой не должно вредить изъятому материалу. Для такой влажной дезинфекции удобнее все­го использовать растворы лизола, фенола и хлорсодержащие дезинфекционные средства.

Для уточнения или установления этиологического диагноза при инфекционных заболеваниях в некоторых случаях производят так называемую биологическую пробу путем заражения лабораторных животных. Тру­пы этих павших или забитых животных подвергают патологоанатомическому вскрытию. Вскрытие животных и последующее бактериологическое и вирусологическое их исследование проводят по тем же правилам, что и вскры­тие трупа человека. Работа по заражению и вскрытию животных прово­дится в специально отведенном помещении с соблюдени­ем всех правил техники безопасности, которые предусма­триваются инструкциями при работе с инфицированным материалом.

---

Дата добавления: 2018-11-24; просмотров: 513; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

---

---

Мы поможем в написании ваших работ!