Аминокислотный состав церебролизина
Церебролизин представляет собой ноотропный
пептидергический препарат с комплексом низко-
молекулярных (молекулярная масса не более 10 000
дальтон) биологически активных 24-х нейропеп-
тидов — энкефалинов, нейротензина, вещества Р
(15 %), 17-и свободных L-аминокислот (85 %) и ми-
кроэлементов [Windisch M., 1996; Громова О. А. и др.,
2001; Громова О. А., 2000, 2002; Sotnikova N. Yu.,
Gromova О. А., 2002; Громова О. А. и др., 2006], прео-
долевающих гематоэнцефалический барьер и непо-
средственно поступающих к нервным клеткам. Ис-
следования О. А. Громовой и др. (2006) показали, что
состав церебролизина является достаточно сложным
и требует дальнейшего изучения как биохимического,
так и клинического. Объектом исследования являлся
раствор церебролизина (FPF-1070) фирмы «Ebewe».
Препарат исследовали в двух вариантах:
1. Церебролизин-1 — препарат с удаленной фос-
фолипидной фракцией;
2. Церебролизин-2 — препарат после процедуры
обессоливания.
Хроматографическое разделение компонентов
церебролизина представлено на обзорной хрома-
тограмме (рис. 1).
Разделение препарата свидетельствует о том,
что церебролизин-2 содержит три группы соедине-
ний (рис. 2), которые условно можно обозначить как
НAУчНЫЕ ОБЗОРЫ
28 ОБЗОРЫ ПО КЛИНИЧЕСКОЙ ФАРМАКОЛОГИИ И ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТЕРАПИИ ТОМ 7/2009/4
гидрофильную (время удерживания RT < 5 мин), ней-
тральную (RT от 5 до 20 мин) и липофильную (RT > 20
мин). Разделение компонентов двух последних групп
|
|
|
было эффективным, а для лучшего разрешения пи-
ков гидрофильной группы были подобраны специ-
альные параметры хроматографии, позволившие
получить фракции 1–10. Все фракции препарата це-
ребролизин содержат пептиды, а фракции 4–7 (8),
возможно, также триптофан.
По данным MALDI-TOF отмечено, что в очи-
щенном церебролизине присутствуют более 100
олигопептидов и мотивов белков с молекулярной
массой в основном до 3 kDa. При исследовании
церебролизина на системе белковых чипов с масс-
спектрометрической детекцией (рис. 3) выявлены
пептиды до 5800 Da (многочисленные короткие со-
четания аминокислот, фрагменты пептидов, полу-
ченные при трипсинолизе протеома коры головного
мозга свиней), представляющие собой потенциаль-
ный трофический продукт для метаболизма нервных
клеток.
Важным итогом исследования явилось обнару-
жение в составе церебролизина жизненно важных
для нейрохимии мозга олигопептидов. Это три-
пептиды — глутатион Glu-Cis-Gly и тиролиберин
Glu-His-Pro, а также мотивы энкефалина Tyr-Gly-
Gly-Phe и коллагена Gly-Pro-Hyp. Кроме того, при
очистке препарата выявлена неизвестная ранее
мембранная фракция липидов, требующая даль-
нейшего изучения, поскольку вероятно, что эф-
|
|
|
■ Рисунок 2. Полупрепаративная ВЭЖХ препарата церебролизин-2 (градиент элюции 0–30 % В, 30 мин, 30–100 % В,
50 мин, термостатирование, 20 %). Непрерывная линия — флуоресценция Em=300 нм при Ex=210 нм, прерывистая —
поглощение при 214 нм
■ Рисунок 1. Обзорная ВЭЖХ препарата церебролизин-2. Градиент элюции 0–100 % В, 45 мин, 100 % В
НAУчНЫЕ ОБЗОРЫ
ТОМ 7/2009/4 ОБЗОРЫ ПО КЛИНИЧЕСКОЙ ФАРМАКОЛОГИИ И ЛЕКАРСТВЕННОЙ ТЕРАПИИ 29
■ Рисунок 3. Спектры масс пептидов экстракта церебролизина, полученные посредством SELDI-MS. Ось абсцисс —
масса/заряд, Да; ось ординат — относительная интенсивность сигнала
фекты церебролизина, связанные с повышением
пластичночти нейронов, могут опираться не толь-
ко на мембранную фракцию пептидов, но и на ге-
терогенную фракцию нейроспецифических липи-
дов. Наиболее важным результатом исследования
явилось обнаружение в образцах церебролизина
тиролиберина, глутатиона, а также мотивов колла-
гена и энкефалинов.
В церебролизине идентифицирован трипептид
тиролиберин с последовательностью аминокислот
Glu-His-Pro, являющийся антагонистом опиоидной
активности. Основная функция этого олигопепти-
да — усиление выделения тиротропина передней
|
|
|
долей гипофиза, а также стимуляция ростового
гормона кортикотропина [Громова О. А. и др., 2006].
Выделенный из церебролизина трипептид глутати-
он Glu-Cis-Gly (GSH) — широко распространенный в
организме человека олигопептид, присутствующий
во всех тканевых образованиях: в надпочечниках,
эритроцитах, спиномозговой жидкости, мозге, хру-
сталике глаза. Наиболее важным является участие
глутатиона в окислительно-восстановительных ре-
акциях, где он используется как донор и акцептор
кислорода и необходим для работы большого чис-
ла ферментов. Глутатион поддерживает ключевые
белки в организме и аскорбиновую кислоту в вос-
становленном состоянии, что жизненно важно для
обеспечения целости эритроцитов и прозрачности
хрусталика глаза. Выделенный из очищенного це-
ребролизина мотив энкефалина с последователь-
ностью аминокислот Tyr-Gly-Gly-Phe относится к
пептидам с широким диапазоном действия в цен-
тральной и периферической нервной системе, ре-
гулирующим вместе с другими пептидами болевую
чувствительность, половое поведение, мотива-
цию удовлетворения, адаптационные процессы и
имеющий высокое сродство с μ- и δ-рецепторами
опиоидного типа. Обнаруженный в очищенном це-
ребролизине коллагеновый мотив Gly-Pro-Hyp ис-
пользуется в организме для реконструкции повреж-
денных и для синтеза новых опорных коллагеновых
и других белков.
Дата добавления: 2018-09-22; просмотров: 163; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!