Методики определения групп крови по системе АВО.
Группа крови по системе АВО определяется наличием в эритроцитах двух антигенов, обозначаемых латинскими буквами А и В. Антиген А связывается агглютинином α, антиген В – агглютинином β. В крови человека не могут находиться реагирующие друг с другом ("одноименные") агглютиногены и агглютинины (иначе происходила бы агглютинация эритроцитов). Таким образом, кровь 4-х групп имеет следующий состав:
| № группы и обозначение | Агглютиногены эритроцитов | Агглютинины плазмы |
| I (О) | Нет | α и β |
| II (А) | А | β |
| III (В) | В | α |
| IV (АВ) | А и В | Нет |
Для определения группы крови по системе АВО используют стандартные сыворотки, полученные из донорской крови 4-х групп и содержащие агглютинины α и β в разных комбинациях. По одной капле стандартных сывороток каждой группы, не допуская их смешивания, помещают на белую керамическую пластинку. Используя 4 угла предметного стекла в каждую каплю сыворотки вносят небольшое количество исследуемой крови (соотношение объемов кровь/сыворотка=1/5-1/10). В течение 5 минут перемешивают кровь с сывороткой путем плавных покачиваний пластинки. В отсутствии агглютинации капля остается однородной и равномерно окрашенной. При агглютинации образуется прозрачная капля с зернышками агглютинированных эритроцитов. Группу крови определяют по тому, в каких сыворотках произошла агглютинация:
|
|
|
Из таблицы видно, что для определения группы крови, в принципе, достаточно сывороток II (β) и III (α) групп, которые соответственно выявляют наличие в эритроцитах исследуемой крови антигенов В и А. Полный набор сывороток используется для контроля.
Пример. При определении группы крови агглютинация наблюдалась только в сыворотках II (А) и III (В) групп, но не в сыворотке I (О) группы. Такого быть не должно, что свидетельствует о технической ошибке при определении группы крови. В этом случае исследование повторяют, используя новые сыворотки.
Определение резус фактора в крови человека.
Существует несколько методов определения Rh-фактора:
1. Метод конглютинации на чашках Петри. Для этого исследования, кроме глазных пипеток и флакона с изотоническим раствором хлорида натрия, необходимо иметь чашки Петри, водяную баню с постоянной температурой 46-480С и стандартные антирезусные сыворотки всех групп системы АВО. Для анализа берут антирезусную сыворотку двух серий, одногруппную по системе АВО с исследуемыми эритроцитами:
· в чашку Петри наносят по 2 капли антирезусной сыворотки, слева – одной серии, справа – другой в 3 ряда для 3 исследований;
· в каждую серию прибавляют по капле эритроцитов (исследуемые, контрольные Rh-положительные и контрольные Rh-отрицательные);
|
|
|
· после перемешивания чашку Петри помещают в водяную баню на 10 минут, после чего рассматривают в проходящем свете. Наличие агглютинации свидетельствует о положительном результате, отсутствие ее – об отрицательном. Для контроля в этом методе используют заведомо Rh-отрицательные и Rh-положительные эритроциты.
2. Определение резус-принадлежности методом в пробирке без подогрева. Для этого метода используется стандартный универсальный реагент, представляющий собой сыворотку анти-D с неполными антителами, с добавлением 33% полиглюкина в качестве коллоидной среды:
· в сухие пробирки вносят одну каплю исследуемых эритроцитов и одну каплю универсального реагента анти-резус;
· содержимое перемешивают, медленно поворачивая пробирку так, чтобы оно растекалось по ее стенкам;
· через 3 минуты в пробирку добавляют 2-3 мл изотонического раствора NaCl и перемешивают содержимое 2-3-х кратным перевертыванием пробирки, не встряхивая;
· пробирку просматривают на свет. Результат определяется по наличию или отсутствию агглютинации. Если на фоне прозрачного физиологического раствора имеются агглютинаты в виде комочков или хлопьев из склеенных эритроцитов, то исследуемую кровь считают резус-положительной. При отсутствии агглютинации, равномерном окрашивании раствора исследуемую кровь считают резус-отрицательной.
|
|
|
3. Определение резус-принадлежности методом реакции агглютинации на плоскости с помощью цоликлонов (цоликлон – это солевой раствор моноклональных антител к антигенам, расположенным на поверхности эритроцитов человека) анти-D супер. Для этого используется специальный реагент, содержащий моноклональные антитела к резус-фактору (цоликлон анти-D супер или аналогичные):
· на пластинку или планшет наносят большую каплю (около 0,1 мл) реагента, а рядом маленькую каплю (0,02-0,03 мл) исследуемых эритроцитов;
· тщательно смешивают реагент с эритроцитами стеклянной палочкой;
· через 10-20 секунд начинают мягко покачивать пластинку. Несмотря на то, что четкая агглютинация наступает почти мгновенно, результаты реакции учитывают через 3 минуты после смешивания. При наличии агглютинации исследуемая кровь маркируется как резус-положительная, при отсутствии – как резус-отрицательная.
Дата добавления: 2018-08-06; просмотров: 1833; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!