ДР. 1.9.3 Підготовка стерильного посуду для мікробіологічних робіт
Для культивування штамів-продуцентів використовують скляний посуд слідуючих типів:
- пробірки біологічні (D=14 мм)
- чашки Петрі (D=100 мм)
- бутилки мірні (об'ємом 0,1, 0,25 та 0,45 л)
- колби плоскодонні (об'ємом 0,1, 0,25, 0,5 та 1 л)
- піпетки мірні (на 1, 2, 5 та 10 мл)
Для виробничого культивування використовують скляні біореактори, бутилі та колби різного об'єму.
Посуд миють 0,5 %-м розчином МЗ, промивають теплою водопровідною водою і триччі ополоскують очищеною водою. Бутилки, колби та пробірки закривають ватно-марлевими пробками. Чашки Петрі загортають у папір по 5 шт. і обв'язують шпагатом. Піпетки закривають ватними тампонами та загортають по одній в папір або поміщають в скляні пенали по 20-30 шт., які закриваються ватно-марлевими пробками або фольгою. Посуд стерилізують в сушильних шафах при температурі 160-200 °С протягом 2 годин.
Біореактор поміщають в автоклав і стерилізують при (1±0,05) атм протягом 40 хвилин. Експлуатацію автоклава проводять згідно інструкції, дотримуючись викладених в ній правил безпеки.
ДР. 2 Приготування стерильних поживних середовищ
Для приготування стерильних поживних середовищ використовуються очищена вода з ДР 1.8., посуд з ДР1.9., Компоненти поживного середовища з складу. Приготування стерильних поживних середовищ здійснюють згідно виробничих інструкцій та складається з наступних стадій.
Приготування розчинів.
Стерилізація розчинів.
|
|
|
Приготування поживного середовища.
Контроль середовищ на мікробіологічну чистоту.
Стерилізація посуду:
Чашки Петрі складають у стопки по 5-8 чашок, загортають в обгортковий папір і обв’язують шпагатом. Пакети з чашками Петрі автоклавують 60 хв. При 1 атм. в автоклаві.
У колбу ємністю 3л всипають зважені компоненти і заливають 0.5 л очищеної води. Ретельно перемішують вміст колби до повного розчинення компонентів. Доливають у колбу 1.3л очищеної води. Вміст колби ретельно перемішують. Після цього поживне середовище розливають порівно в дві термостійкі колби об’ємом 2л і закривають ватно-марлевими пробками. Горлечка колб з пробками загортають обгортковим папером і обв’язують шпагатом.
Стерилізація поживного середовища:
Колби з поживним середовищем автоклавують протягом 30 хв. при 0.5 атм. в автоклаві. Простерилізоване поживне середовище охолоджують до температури (40¸45 0С).
Розлив поживного середовища:
У ламінарному боксі поживне середовище розливають у чашки Петрі по 20 мл ( у кількості 90 шт.). Відразу після розливу середовища чашки розміщають на горизонтальну поверхню для застигання середовища.
Контроль стерильності чашок з поживним середовищем:
Після застигання середовища чашки Петрі поміщають у термостат на 370С і інкубують протягом двох діб для контролю можливої контамінації середовища в процесі розливу. Чашки на котрих спостерігається ріст-відбраковують. Чашки, на яких ріст мікроорганізмів відсутній визнаються придатними для проведення дослідження контамінації повітря виробничих приміщень. На придатних чашках маркером наносять:
|
|
|
Номер контрольованого приміщення;
Номер контрольної позиції (для приміщень з більш ніж однією контрольною позицією).
Склад поживних середовищ (ПС):
Поживне середовище Н15 (рідке), (г/л)
| №п/п | Компонент | Маса компоненту |
| 1 | кислота рибонуклеїнова | 10 г |
| 2 | рибонуклеаза А | 10 мг |
| 3 | дріжджовий екстракт | 50 г |
| 4 | глюкоза | 25 г |
| 5 | трисгидроксиметиламінометан | 35 г |
| 6 | гідролізат казеїну | 10г |
| 7 | ампіциліну натрієва сіль | 200 мг |
| 8 | МОРS | 52,3 г |
| 9 | МgSO4 7Н20 | 0,25 г |
| 10 | Na2НР04.12Н20 | 14,3г |
| 11 | КН2Р04 | 3г |
| 12 | NH4Сl | 1 г |
| 13 | NаСІ | 0,5 г |
| 14 | СаСІ2 | 0,11г |
| 15 | вода очищена | до 1 л |
Поживне середовище №1 LВ (рідке), (г/л)
| №п/п | Компонент | Маса компоненту |
| 1 | бактотриптон | 10 г; |
| 2 | дріжджовий екстракт | 5 г |
| 3 | ампіциліну натрієва сіль | 0,2 г |
| 4 | вода очищена | до 1 л. |
|
|
|
Поживне середовище №2 ,(г/л)
| №п/п | Компонент | Маса компоненту |
| 1 | бактотриптон | 10г |
| 2 | дріджовий екстракт | 5 г |
| 3 | агар | 15г |
| 4 | ампіциліну натрієва сіль | 0,2 г |
| 5 | вода очищена | до 1 л. |
ДР. 3 Підготовка первинної упаковки.
Флакони виймають з поліетиленових мішків, поміщають в чисту емальовану ємність на 50л та заливають 40 л очищеної води. Флакони перемішують протягом 5 хвилин пластиковою лопаткою, потім порціями по 4-ри флакони виймають їх з ємності при цьому 2 рази ополіскуючи очищеною водою. З флаконів витрушують залишки вологи. Поміщають флакони в чисту пластикову ємність на 50 л. По закінченню процесу ємність з чистими флаконами передають на розлив.
Дата добавления: 2018-06-01; просмотров: 468; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!