ТП. 6.1.2.6. Пакування , маркування імуносорбенту
Висушені імуносорбенти які надходять з ТП 6.1.2.3 вкладають в поліетиленові пакунки, запаюють за допомогою вакуум пакувальної машини. Візуальна контролюють якість запайки. На імунофермент наклеюють етикетки. На етикетці українською мовою вказують назву компонента, № серії, термін придатності, умови зберігання, країну виробника.
ТП. 6.2. Приготування розчинів.
Готують наступні розчини:
1. Концентрат розчину для промивання планшету (46х) (РПП) (Na2HPO4 * 12H2O, NaH2PO4 * 2H2O, NaCl, тритон Х-100, H2O очищена).
2. Приготування розчину для розведення кон’югату та сироваток (РКС) (молоко сухе, Na2PO4 *12 H2O, NaH2PO4 * 2H2O, NaCl, KCl, сечовина, КБР, фракція М1, КБР фракція, мертіолат бензойна кислота, 5-бромо-5-нітро-1,3, діоксан, бромкрезоловий пурпуровий, вода очищена).
3. Приготування концентрату розчину №5 для приготування проявника з хромогеном ТМБ – субстратний буфер (СБ)(Na2 HPO4 *12 H2 O, лимонна кислота, перекис водню (35% х. ч.) , вода очищена).
4. Приготування розчину ТМБ (тетраметилбензидин, дігидрохлорид, вода очищена).
5. Приготування розчину стоп-реагенту (H2 SO4 , вода очищена).
Призводять контроль. Отримані розчини направляють на ТП9.
ТП. 6.3. Одержання позитивного та негативного контролів
ТП. 6.3.1. Одержання (К+)
Для цього проводять отримання позитивних сироваток з цитратної донорської крові, обробка сироватки b-пропіолактоном (BPL), консервація позитивної сироватки, стерилізуюча фільтрація позитивної сироватки.
|
|
|
ТП. 6.3.2. Одержання (К-)
Для цього одержують негативні сироватки з безцетратної донорської крові, термообробка негативної сироватки, консервація негативної сироватки, попередня фільтрація негативної сироватки.
ТП. 6.4. Одержання імуноферментного кон’югату
ТП. 6.4.1. Синтез імуноферментного кон’югату
До розрахункової кількості розчину пероксидази в розчині 0,1М NaHCO3 при повільному перемішуванні додають рівний об’єм розчину перйодата натрію. Флакон закривають пробкою і повільно перемішують 2 години на магнітній мішалці в темряві при 20-22˚С .
Беруть окислену пероксидазу і рекомбінантний білок у молярному співвідношенні 2:1 і змішують у темному флаконі. До розчину спочатку додають розчин 0,132 М боргідрида натрію в кількості 1/5 від об’єму кон’югату, а потім перемішують і витримують 2 години при 4˚С .
Розчин кон’югату переносять у діалізний мішок і діалізують при 4˚С в 2 зміни проти 10л розчину, перемішують 20 хвилин на магнітній мішалці. При діалізі повинен бути досягнутий ступінь розведення домішок не менше 1:10000. По тій же схемі отримають комплекс анти А60 пероксидази хрону.
Кон’югат розливають у центрифужні склянки, врівноважують і центрифугують (Ф48) при 10000 об/хв., 10 хв. при температурі 4˚С, осад викидають, а надосадову рідину переносять у чистий мірний циліндр, для визначення точного об’єму , а потім переносять у чистий флакон. По тій же схемі отримають комплекс анти А60 пероксидази хрону.
|
|
|
ТП. 6.4.2. Підбір дози імуноферментного кон’югату.
Необхідно провести підбір дози імуноферментного кон’югату для отримання оптимального титру кон’югату, тобто такого титру кон’югата, що у постановці ІФА забезпечувались значення оптичної густини окремих позитивних і середнє значення ОГ негативних сироваток стандартних панелей у встановленому діапазоні.
ТП. 7. Розлив компонентів тест-систем.
ТП. 7.1. Розлив розчинів.
Розчини розливають у пластмасові флакони об’ємом 30 мл за допомогою апарату для розливу. Проводять контрольний розлив 5-ти доз розчину. Контролюють об'єм розливу за допомогою відкаліброваного мірного циліндра. У випадку невідповідності дози розливу проводять калібрування дозатора. Контрольні флакони з розчинами відкидають. Контроль дози в процесі розливу проводять для кожного лотка після заповнення всіх флаконів. Для цього вміст 1-го, потім останнього флаконів по черзі виливають в мірну пробірку і міряють об'єм.
|
|
|
Норми допуску дози розливу:
- від 8,0 до 8,3 мл;
- від 14,0 до 14,5 мл;
- від 20,0 до 20,6 мл;
- від 22,0 до 22,6 мл;
- від 25,0 до 25,6 мл;
- від 26,0 до 26,6 мл.
Здійснюють вибірковий контроль закупорки флаконів ручною прокруткою. Якщо дозатор використовується відразу для розливу іншого розчину (протягом робочої зміни), систему промивають 3 л очищеної води, викачують воду з системи та починають розлив нового розчину.
Дата добавления: 2018-06-01; просмотров: 223; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!