Розділ 2. Методи виявлення та ідентифікації патогенних агентів
Класичні методи дослідження
Як вже зазначалося раніше, з метою діагностики розповсюдженихінфекційних захворювань застосовують різні методи лабораторних досліджень. Зокрема досі не втратили актуальність такі класичні методи як:
Бактеріологічний напрямок пов'язаний з прискореним виділенням і накопиченням бактеріальних популяцій патогенних, умовно-патогенних і санітарно-показових мікроорганізмів. Воно засноване на використанні оптимальних ростових поживних середовищ, що містять необхідні біостимулятори, для прискореного отримання бактеріальної культури і часткової їх ідентифікації за сукупністю культуральних ознак[ 10].
Ензимо-індикаційний напрямок, пов'язаний з експрес-індикацією біохімічних властивостей і визначенням ферментативного спектру мікробів.
Як і раніше збережуть свою значимість дослідження з розробки політропний (полісубстратних) поживних середовищ. У нашій країні були розроблені оригінальні політропні середовища та їх комбінації, які з успіхом застосовуються в лабораторній практиці. [11]
При створенні складних полікомпонентних поживних систем необхідно виходити з різних біохімічних і енергетичних потреб мікроорганізмів. Для кращої прояви життєдіяльності та біохімічної активності патогенних та інших мікробів у середовищах необхідно створювати оптимальні умови для їх росту і розмноження і одночасно вводити фермент субстрати (вуглеводи, багатоатомні спирти, амінокислоти та ін.). В результаті застосування оптимальних полісубстратних середовищ проводиться виділення та накопичення чистої культури мікробів з одночасним визначенням їх біохімічних ознак. [15]
|
|
|
Перспективним слід розглядати розвиток ензимо-індикаційний метод, в яких субстрат з індикатором відділений від живильного середовища і фіксований на спеціальному носії. У нашій країні розроблені вуглеводно-паперові диски із захисною плівкою паперові реагенти для визначення дезамінази у мікробів та паперово-індикаторні системи, вуглеводно-паперові поплавці, вуглеводно-полімерні плівки. Всі ці препарати є дуже перспективними, вони дозволяють протягом найкоротшого терміну (3-5 год), використовуючи загальноприйняті поживні середовища та лабораторний посуд, визначати ферментативну активність різних видів мікроорганізмів.
Полісубстратна тест-система і ензимо-індикаторна стрічка використовуються для одночасної ідентифікації 20 біохімічних ознак у мікробів. Це нові види простих «довгоживучих» препаратів, призначених для швидкого й економічного визначення біохімічних властивостей мікробів.
Імунологічний напрямок,пов'язанийзішвидкимвизначеннямякокремихспецифічнихдетермінант, такізіндикацієюцілихантигеннихгрупікомплексів, щохарактеризуютьвидиісероварбактерій. До власне імунологічному напрямку ми відносимо класичні імунологічні методи, засновані на використанні природних реагентів. Реакції преципітації в рідині по Асколі і в гелі по Оухтерлоні і Манчіні (особливо їх мікроваріант) зберігають своє значення як методи експрес-індикації патогенних мікробів і виявлення їх антигенів в різних матеріалах. [11]
|
|
|
Перспективними є рапід-системи для одночасної і швидкої індикації різних видів мікроорганізмів в реакціях мікроаглютинації, хоча раніше не вирішені питання створення оптимальних видів і найбільш економічних форм таких систем.Імунологічні принципи розпізнавання антигенів є досить тонкими, специфічними, чутливими, з великими індикаційно-діагностичними можливостями.
Іммунофізіологічний напрямок, що використовує різні за природою, формою і величиною види дрібнодисперсних носіїв (сорбентів) антигенів і антитіл, що сприяють підвищенню чутливості комплексних імунологічних методів.
Реакції пасивної гемаглютинації та їх модифікації пов'язані з використанням еритроцитарних діагностичних препаратів. Еритроцитарної діагностику з успіхом застосовуються для прискореного виявлення та ідентифікації як патогенних, так і умовно-патогенних мікроорганізмів (наприклад, збудників туляремії, бруцельозу, сальмонельозу та ін.) В різних патологічних матеріалах, отриманих від хворих, і в об'єктах зовнішнього середовища. Реакції з еритроцитарних діагностикумами є дуже чутливими, і в цьому відношенні часто перевершують інші серологічні реакції. Вони введені в офіційні інструкції по експрес-індикації бактеріальних агентів в елементах зовнішнього середовища і в матеріалах, отриманих від уражених людей і тварин.
|
|
|
Одночасно тривають пошуки нових носіїв антигенів і антитіл, які були б без антигенними, стабільними, не руйнується при тривалому зберіганні, а застосовувані реакції - простими з техніки постановки (наприклад, скляні тести) і дослідження з їх допомогою - економічними.
Удосконалюються реакції з застосуванням кольорових целюлозних частинок як носіїв антигенів і антитіл. Позитивними властивостями такого роду препаратів є: 1) відсутність власної антигенності; 2) стабільність при тривалому зберіганні; 3) демонстративність і простота техніки постановки реакції, зазвичай на предметному склі; 4) висока швидкість проходження реакції; 5) економічність.
Крім того, корисним і виправданим вважаємо пошук нових носіїв антигенів і антитіл. У цьому відношенні перспективними є іонообмінні смоли, латекси, целюлоза та її похідні і ряд інших речовин, які можуть сприяти підвищенню чутливості серологічних реакцій [11].
|
|
|
Імунохімічний напрямок, пов'язаний з використанням різноманітних комплексних сполук специфічних антитіл або антигенів з хімічними речовинами. Приєднані хімічні речовини надають їм нові феноменологічні здібності та властивості, тим самим, розширюючи можливості експрес-індикації мікробних агентів зокрема і лабораторного аналізу взагалі.[14]
Велику популярність і практичну значимість придбали методи швидкого імунофлюоресцентного аналізу (прямий, непрямий, антікомплементарний), які нині офіційно використовуються як методи експресному індикації і швидкого визначення мікроорганізмів.
Подальший розвиток дуже перспективного імунохімічного напрямку багато в чому залежить від хіміків, які повинні розробити досить яскраві нові барвники, вступають у з'єднання зі специфічними антитілами і антигенами.
Імуноелектрофоретичний напрямок, успішно розвивається з кінця 50-х років. Розроблено численні методи іммуноелектрофореза. Однак для цілей експрес-індикації мікробів частіше вдаються до зустрічного іммуноелектрофореза. Застосування нових хімічних барвників, ферментної або радіоактивності дозволить різко підвищити чутливість методу іммуноелектропреціпітаціі.[14]
Імунорадіологічний напрямок, пов'язаний з використанням різноманітних кон'югатів специфічних антитіл або антигенів, з'єднаних з радіоактивними речовинами, які надають їм нові феноменологічні властивості і здібності, розширюючи можливості експрес-індикаціонного методу. Значні перспективи подальший розвиток іммунорадіологічного напряму, так як воно безсумнівно приведе до створення нових, простих методів експрес-індикації мікроорганізмів. [13 ]
Мікроцитологічний напрямокшвидкогоцитоморфологічногоаналізупов'язанезвикористаннямсвітлової талюмінесцентноїмікроскопіїбактеріологічнихмазковихпрепаратів, обробленихіпофарбованихбарвниками, щодозволяютьшвидкоідентифікуватимікроорганізмипоїхморфологіїіспецифічнимструктурнихелементівмікробноїклітини. Дослідженню піддають як нативний (гній, харкотиння, сеча, СМЖ, різні ексудати та ін.), Так і збагачений (наприклад, центрифугуванням, фільтруванням та іншими методами) патологічний матеріал. [11 ]
Фагодіагностичний напрям, який передбачає, з одного боку, ідентифікацію мікробів за допомогою специфічних індикаторних бактеріофагів, а з іншого, - виявлення та індикацію специфічних фагів в патологічному і другом матеріалах за допомогою індикаторних мікробних культур. Прискорена фагодіагностіка в ряді випадків є необхідним і корисним методом, що дозволяє значно скоротити терміни досліджень і встановити природу збудника навіть у тих випадках, коли іншими методами, на увазі його мінливості або забрудненості матеріалу, він залишається нерозпізнаним. [ 11]
Біологічний напрямок, пов'язаний з вивченням токсичних і агресивних властивостей патогенних мікроорганізмів. Біологічні методи здійснюються на одноклітинних організмах, на культурах клітин, курячих ембріонах, а також на здорових, а ще краще спеціально підготовлених лабораторних тварин. Ці методи більш трудомісткі і менш точні в порівнянні з іншими.[12]
Фізико-хімічний напрямок. Цей напрямок пов'язаний з використанням порівняно швидких, але в той же час і досить складних за апаратурним оформлення методів. Сюди входять методи вивчення бактеріальних популяцій і їх екстрактів за допомогою хроматографії (газорідинна та ін.), Спектроскопії (інфрачервоної, ультрафіолетової та ін.), Резістографіі відносно різних антибіотичних, хімічних і лікарських речовин, а також методи температурної і кислотної агрегації, коагуляції мікробних суспензій і їх токсинів. [12]
Комплексний напрямок прискореної ідентифікації патогенних і санітарно-показових мікроорганізмів, що використовує методи експрес-індикації, засновані на інтеграції різних принципів, пов'язаний з розробкою і створенням індикаторних тест-систем, що дозволяють протягом короткого терміну і з мінімальними витратами на аналіз визначити комплекс основних ознак патогена або санітарно-показового представника, достатніх для його ідентифікації до роду, виду і навіть типу. [6]
Бактеріологічний напрямок,одним з поширених прийомів бактеріологічного дослідження є біохімічна ідентифікація. Це спосіб швидкої ідентифікації різних бактерій, який дозволяє стандартно і якісно проводити дослідження з використанням сухих поживних середовищ з субстратами, поміщеними в лунки пластмасових пластин для мікротитрування. У них, в ході інкубації випробуваного штаму, протікають біохімічні реакції, результати якої реєструються візуально щодо зміни кольору індикатора. У більшості тест-систем ідентифікації мікроорганізмів час інкубації, в залежності від виду набору, становить від 2 до 48 годин.[3]
Дата добавления: 2018-06-01; просмотров: 266; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!