Переваги та недоліки сучасних тест-систем для діагностики туберкульозу
| № | Метод | Переваги | Недоліки |
| 1. | Імунохрома-тографія (ТВ-Check-1), одностадійний метод | Час аналізу 25 - 35 хв.; Простота виконання; Одностадійний аналіз; Не вимагає приладового забезпечення. | Висока ціна аналізу (8 - 12$); Неможливість інструментального обліку і суб'єктивізм оцінки результатів; Відсутність позитивного контролю. |
| 2. | Дот-блотінг (MycoDot), двохстадійний метод | Час аналізу 35–45 хв. Відносна простота виконання; Наявність негативного і позитивного контролю і порівняльної колірної шкали; Мінімальне приладове забезпечення (флакони, піпетки). | Відносно висока ціна аналізу (4–8 $); Неможливість інструментального обліку; Труднощі з оцінкою результату в “сірій зоні” |
| 3. | Твердофазний ІФА на стрипах, двохстадійний метод | Час аналізу 1,5–2 г; Наявність позитивного і негативного контролів; Можливість використовування інструментального і візуального обліку результатів аналізу. Об'єктивна і точна оцінка результатів при інструментальному обліку. При візуальному обліку - мінімальне приладове забезпечення (флакони, піпетки). Низька вартість аналізу (1–1,5 $); Зручний і вигідний для проведення масових аналізів. | Відносна трудомісткість аналізу (2 стадії + промивка + ферментативне забарвлення); Необхідність фотометрії при використовуванні інструментального обліку результатів. |
Як зазначалося в літературному огляді для загального висновку по використанні серологічних методів діагностики, зокрема імуноферментного, дозволяє значно скоротити час лабораторного підтвердження клінічного діагнозу, активно застосовувати його для діагностики позалегеневих форм туберкульозу, особливо цінний він для діагностики туберкульозу у дітей (труднощі із збором мокроти, множинні рентгенологічні дослідження). При оцінці результатів досліджень важливо стежити за динамікою рівня антитіл. ІФА вимагає мікрокількостей біологічної рідини (набагато менше ніж для проведення мікроскопії), високочутливий, добре відтворюваний, піддається автоматизованому обліку, не вимагає проведення біопсії у разі туберкульозу позалегеневої локалізації. Вся реакція займає 1,5-2 години. Виявлення антитіл до збудника туберкульозу в матеріалі за допомогою ІФА необхідне для:
|
|
|
швидкого виявлення джерела інфекції;
діагностики легеневого туберкульозу;
діагности туберкульозу позалегеневої локалізації;
контролю ефективності протитуберкульозного лікування;
раннього виявлення випадків рецидивів.
Проблеми, що пов’язані з недостатньою специфічністю, при використанні сучасних імуноферментних діагностикумів на туберкульоз, виникають дуже рідко. Але річ у тому, що антитіла до мікобактерій в тій або іншій кількості присутні в крові не тільки хворих, але і здорових інфікованих людей. Титри антитіл у людей з неактивним туберкульозом звичайно все-таки істотно нижче, ніж у хворих, і це дає можливість при дотриманні певних правил вивести якийсь дискримінаційний рівень, при подоланні якого можна говорити про високу вірогідність активного туберкульозу.
|
|
|
Враховуючи специфіку захворювання (наявність неактивного і активного варіантів туберкульозу, багатоманітну локалізацію процесу, індивідуальність реакцій імунної системи), досягти 100% чутливості, ймовірно, неможливо. Проте до цієї відмітки можна спробувати максимально наблизитися.
При розробці тест-системи для імуноферментної серодіагностики туберкульозу потрібно виділили два ключові моменти:
По-перше, оскільки у кожного хворого при виникненні активної форми туберкульозу виробляється свій власний, індивідуальний спектр антитіл, при конструюванні тест-системи було вирішено використовувати не один-два, а комплекс найбільш імуногенних антигенів з розрахунку на більш універсальну чутливість по відношенню до різних форм туберкульозу. Це перший підхід до конструювання тест-систем. Іншийполягає в наступному. Антиген А60 є антигенним комплексом з молекулярною масою 38 kДа, до якого в 85% випадках з'являються антитіла до Mycobacterium tuberculosis. Також цей антигенний комплекс присутній у всіх видів Mycobacterium, Corynebacterium і Nocardia. Використання А60 антигену в ІФА технології дозволяє досягти дуже високої чутливості і специфічності в діагностиці туберкульозу, не дивлячись на крос-реактивність з Corynebacterium і Nocardia. Специфічність IgG-тесту для випадків легеневого туберкульозу у дорослих і дітей - 85-100% і 71-100% для туберкульозу позалегеневої локалізації. При порівнянні результатів, отриманих різними методами – за допомогою мікроскопії, бактеріологічних досліджень, ІФА, було показано, що ІФА-тест з використанням антигену А60 завжди більш чутливі, ніж мікроскопія і мають таку ж чутливість як і бактеріологічні методи у випадку легеневого туберкульозу і навіть більш чутливі, ніж бактеріологічні методи у випадку туберкульозу позалегеневої локалізації у дітей і осіб похилого віку. В тому випадку, якщо як антиген для діагностики туберкульозу використовується антиген «5» або антиген «6» з молекулярною масою 32 кДа, або суміш цих очищених антигенів, то специфічність і чутливість таких тест-систем значно нижче, ніж тест-систем на основі антигену А60.
|
|
|
По-друге, тест-система повинна виявляти специфічні антитіла, що належать до всіх класів імуноглобулінів. Більшість тест-систем розрахована на визначення тільки імуноглобулінів класу G, оскільки вважається, що IgM-антитіла присутні в крові тільки на початку захворювання і, в основному, при неактивному туберкульозі, а при розвитку активного процесу вже зникають. Проте це торкається головним чином дорослих. У дітей же IgM до збудника туберкульозу нерідко присутні в крові протягом 2-х років після початку захворювання, причому їх рівень значний навіть при відносно низьких титрах IgG.
|
|
|
Антитіла класу IgA можуть визначатися при туберкульозі як в крові (сироватковий IgA), так і в секретах, сечі, мокроті (секреторний IgA). Часто в діагностичній практиці відбувається недооцінка цього факту. Встановлено, що рівень специфічних IgA при туберкульозі схильний значним коливанням, проте це відноситься в основному до секреторного IgA. У ряді опублікованих останнім часом робіт повідомлялося про збільшення чутливості серологічного аналізу на туберкульоз (на 10–20%) при одночасному визначенні IgG і сироватковому IgA. За попередніми даними, додаткове до IgG визначення специфічних антитіл IgA і IgM у дітей 7–13 років збільшує чутливість ІФА-тесту в середньому на 40 % без зниження специфічності [ ].
В специфічних антитіл при туберкульозі у дорослих звичайно превалюють IgG-антитіла. Рідше переважна частина представлена IgA. Антитіла IgM у дорослих хворих зустрічаються досить рідко і більш характерні для початкових стадій захворювання. У дітей високі титри специфічних IgA і IgM наголошуються набагато частіше. Причому високий рівень IgM іноді може зберігатися тривалий час і навіть при відносно низьких рівнях IgG- і IgA-антитіл[ ].
В результаті проведених попередніх досліджень знайдений оптимальний варіант конструкції тест-системи, що забезпечує нею більш високу чутливість (при збереженні специфічності) це досягається за рахунок використання для іммобілізації на підкладку очищеного антигену мікобактерій (А60), а також застосування того ж самого антигену в імуноферментному кон'югаті .
Комплектація тест-системи готовими до роботи планшетами з сорбованим і стабілізованим в лунках антигеном дозволяє спростити аналіз і скоротити його час. В набір тест-систему входять всі необхідні для проведення аналізу реактиви і матеріали.
Отже, на підставі аналізу переваг і недоліків різних варіантів діагностикумів на туберкульоз пропонується виготовляти тест-систему саме для імуноферментного аналізу.
Дата добавления: 2018-06-01; просмотров: 322; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!