Розділ 6. ОБГРУНТУВАННЯ ВИБОРУ ОСНОВНИХ ЕТАПІВ ВИРОБНИЦТВА ТЕСТ-СИСТЕМИ

За АТС класифікацією тест-системи мають код: V04CX - “Інші діагностичні засоби”.

Основне призначення препарату

Тест-система імуноферментна призначена для виявлення антитіл до збудника туберкульозу у сироватці та плазмі крові людини.

Автентичність. Тест-система повинна специфічно виявляти наявність антитіл до збудника туберкульозу у сироватці або плазмі крові людини. Визначають як описано в розділі «Чутливість та специфічність».

Склад компонентів тест-системи

Позитивний контроль (К+):

– сироватка крові людини, яка містить антитіла до збудника туберкульозу, інактивована;

– гентаміцин за ФС 42У-1-343-98;

– мертіолат (тімеросал), Merck, Німеччина, кат. №817043.

Негативний контроль (К-):

– сироватка крові людини, яка не містить антитіла до збудника туберкульозу;

– азид натрію, Merck, Німеччина, кат. № 822335;

– паранітрофенол за ТУ 6-09-3973-75.

Кон¢югат імуноферментний:

– очищенй антиген А60, основний білок клітиної стінки мікобактерій туберкульозу, кон’югований з ферментом пероксидазою хріну;

– сечовина, Merck, Німеччина, кат. №108488;

– альбумін бичачий сироватковий, Merck, Німеччина, кат. №112018;

– гемін, Fluka, Швейцарія, кат. №51280;

– D-трегалоза, Merck, Німеччина, кат. №108216;

– D-манітол, Merck, Німеччина, кат. №105987;

– мертіолат (тімеросал), Merck, Німеччина, кат. №817043;

– бензойна кислота за ГОСТ 10521-78;

– феноловий червоний за ТУ 6-09-5170-84;

– вода очищена за ФС 42-2619-89.

Хромоген ТМБ:

– 3,3',5,5'-тетраметилбензидин, Aldrich, США, кат. № 86,033-6 або аналогічний за якістю;

– вода очищена за ФС 42-2619-89.

Концентрат РПП

– натрій фосфорнокислий двозаміщений 12-водний за ГОСТ 4172-76 або Merck, Німеччина, кат. №106573 або кат. №106579;

– натрій фосфорнокислий однозаміщений 2-водний за ГОСТ 245-76 або Merck, Німеччина, кат. №106345;

– натрій хлористий за ГОСТ 4233-77 або Merck, Німеччина, кат. №106400;

– тритон Х-100, Merck, Німеччина, кат. №108603 або Твін 20, Merck, Німеччина, кат. №822184;

– вода очищена за ФС 42-2619-89.

РозчинРКС

– натрій фосфорнокислий двозаміщений 12-водний за ГОСТ 4172-76 або Merck, Німеччина, кат. №106573 або кат. №106579;

– натрій фосфорнокислий однозаміщений 2-водний за ГОСТ 245-76 або Merck, Німеччина, кат. №106345;

– натрій хлористий за ГОСТ 4233-77 або Merck, Німеччина, кат. №106400;

– калій хлористий за ГОСТ 4234-77;

– сечовина за ГОСТ 6691-77 або, Merck, Німеччина, кат. №108488;

– сухе молоко за ГОСТ 10970-87;

– лізат клітин E. coli (ITG–1);

– мертіолат (тімеросал), Merck, Німеччина, кат. №817043;

– бензойна кислота за ГОСТ 10521-78;

– бромкрезоловий пурпуровий за ТУ 6-09-5422-90;

– вода очищена за ФС 42-2619-89.

Розчин СБ

– натрій фосфорнокислий двозаміщений 12-водний за ГОСТ 4172-76 або Merck, Німеччина, кат. № 106573 або кат. № 106579;

– кислота лимонна за ГОСТ 3652-69 або Merck, Німеччина, кат. № 112014;

– перекис водню за ТУ 6-224.00556-052-98;

– вода очищена за ФС 42-2619-89.

Стоп-реагент

– кислота сірчана за ГОСТ 4204-77;

– вода очищена за ФС 42-2619-89.

Показник концентрації іонів водню (рН) розчинів

рН розчинів повинен бути:

– розчин № 1 – від 6,04 до 6,05 (визначають, розводячи 8 мл концентрату розчину в 350 мл очищеної води);

– розчин № 3 – від 7,2 до 7,4;

– розчин № 4 – від 7,2 до 7,3;

– розчин № 5 – від 4,5 до 4,7.

Визначають у відповідності з рН-метрією.

Вакуум (захисний газ, герметизація).

 Флакони щільно закривають кришками в атмосфері очищеного повітря у зоні зі ступенем чистоти D згідно зі стандартом ГП 07.004.98.

Чутливість та специфічність

Чутливість тест-системи повинна складати 100 % при перевірці її на стандартній панелі позитивних сироваток.

Специфічність тест-системи повинна складати 100 % при перевірці її на стандартній панелі негативних сироваток.

Контроль проводять методом імуноферментного аналізу.

Оцінка зовнішнього вигляду компонентів

Відповідність зовнішнього вигляду компонентів вимогам установлюють візуально.

Зовнішній вигляд компонентів:

Для огляду використовують компоненти одного набору.

Імунохімічне дослідження

Чутливість і специфічність. 

Процедуру аналізу здійснюють відповідно до Інструкції по використанню тест-системи з застосуванням внутрішньовиробничої стандартної панелі позитивних і негативних сироваток (стандарт підприємства). Стандартна панель включає зразки сироваток інфікованих облич високого, середнього і низького ступеня позитивності, а також сироватки від здорових донорів.

Чутливість – ступінь здатності тест-системи визначати позитивні сироватки (маючі антитіла) без хибнонегативних результатів. Чутливість тест-системи повинна складати 100 % при перевірці її на стандартній панелі позитивних сироваток.

Специфічність – ступінь здатності тест-системи визначати негативні сироватки (немаючі антитіла) без хибнопозитивних результатів. Специфічність тест-системи повинна складати 100 % при перевірці її на стандартній панелі негативних сироваток.

Для контрольної перевірки кожної серії тест-систем використовують 1 набір.

Проведення аналізу в тест-системі «DIA-TUB Ig(A+G+M) DK» вважається коректним, якщо середнє значення оптичної густини (ОГ) у лунках з негативним контролем (ОГ К-) не вище 0,1 оптичної одиниці, середнє значення в лунках з позитивним контролем (ОГ К+) не нижче 0,6 оптичної одиниці.

Для оцінки результатів аналізу проводять математичний розрахунок параметрів граничного значення оптичної щільності і “сірої зони”.

Граничне значення ОГ (ГЗ) – сума середнього значення ОГ К- і константної величини для конкретної серії тест-систем.

“Сіра зона” – зона значень оптичної щільності від рівня ГЗ до значення, меншого ГЗ на 10 %.

Використовуючи визначені значення ГЗ і “сірої зони” проводять оцінку результатів по кожній сироватці панелі (позитивної і негативний).

Результат тестування вважають позитивним, якщо значення ОГ сироватки панелі більше граничного значення (ГЗ).

Результат тестування вважають негативним, якщо значення ОГ сироватки менше нижнього рівня ОГ “сірої зони”.

Порівнюючи характеристики кожної сироватки (негативної чи позитивний) і отриманих даних визначають наявність хибнопозитивних і хибнонегативних результатів.

Чутливість виражається відношенням кількості сироваток панелі, що мали позитивний результат в аналізі, до їхньої суми з кількістю хибнонегативних результатів, виражене у відсотках. Розраховують по формулі:

F = ´ 100 %,

де:

N⁺ – кількість сироваток, позитивних в аналізі;

Nх^– – кількість хибнонегативних результатів.

Специфічність - відношення кількості сироваток панелі, що мають негативний результат при аналізі, до їхньої суми з кількістю хибнопозитивних результатів, виражених у відсотках. Розраховують по формулі:

S = ´ 100 %,

де:

N^– - кількість сироваток, негативних в аналізі,

Nх⁺ - кількість хибнопозитивних в аналізі результатів.

Чутливість і специфічність зразка тест-системи в тестовій комбінації повинна складати 100 %. Крім того значення позитивних сироваток повинні відповідати їхньої специфікації по паспорті стандартної панелі.

У випадку, якщо отримані значення показників чутливості і специфічності не відповідають зазначеним нормам, контроль повторюють на подвійній кількості тест-систем (2 набори). Якщо результати повторного контролю не відповідають вищенаведеним нормам хоча б для одного з 4 узятих для аналізу планшетів - серію повертають на повторний підбор дози конъюгата.

У випадку повторного одержання незадовільних результатів тестової комбінації з новою дозою коньюгата – серію тест-систем бракують.

Пакування

Пакування компонентів тест-системи

· Кожний планшет імуносорбенту вкладають в пакет розміром 140´207 мм з поліетиленової плівки за ТУ У 20067704002-99 або з багатошарової та комбiнованої плiвки марки 12ПЕТ/9АЛ/45ПЕ (ELIF Plastik, Туреччина, PET/AL/PE), пакети термозапаюють.

· Кон'югат імуноферментний, позитивний контроль (К+), негативний контроль (К-) розливають в пластикові ампули місткістю: 0,5 мл або 2,0 мл

(Sarstedt, Німеччина, кат. № 72730003, кат. № 72609 з кришками кат. №№ 65716001, 65716003, 65716005), (або Nalgene Brand Products, США, кат. № 362800-0005, кат. № 362800-0020 з кришками кат. №№ 342820-0114, 342820-0115, 342820-0116) або аналогічні їм за якістю та характеристиками ампули та кришки інших виробників.

· Розчини РПП, РКС, СБ та стоп-реагент розливають у пластмасові флакони місткістю: 30 мл (Nalgene Brand Products, США, кат. № 312089-0001) або аналогічні їм за якістю та характеристиками флакони інших виробників.

· Розчин ТМБ розливають у флакони з пластмаси коричневого кольору місткістю 15 мл (Nalgene Brand Products, США, кат. № 312004-9050) або аналогічні їм за якістю та характеристиками флакони інших виробників.

Набір компонентів разом з інструкцією з використання поміщують в коробку з гофрокартону (ГОСТ 22186-93) розміром 230х200х65 мм з пінополіурітановою (ТУ У 30110135.001-99) або полістироловою (ГОСТ 28250-89) вставкою або аналогічні їм.

Групова та транспортна тара у відповідності з ГОСТ 17768-90.

Маркування

На етикетці ампул та флаконів українською або одночасно українською та іншими мовами вказують:

- назву компонента; об’єм; номер серії; термін придатності; умови зберігання; країну-виробник та назву підприємства-виробника.

На етикетці імуносорбенту українською або одночасно українською та іншими мовами вказують:

- назву компонента; номер серії; термін придатності; умови зберігання; країну-виробник та назву підприємства-виробника.

На коробці українською або одночасно українською та іншими мовами вказують:

- країну-виробник; назву підприємства-виробника та його адресу; товарний знак; ідентифікаційний номер; назву тест-системи; надпис “in vitro”; кількість аналізів; умови зберігання; номер серії; термін придатності; ідентифікаційний номер EAN.

На етикетці групової тари додатково вказують кількість наборів та попереджувальний надпис “БІОПРЕПАРАТИ”.

Транспортне маркування у відповідності з ГОСТ 14192-96.

Транспортування.

Всіма видами критого транспорту при температурі від 2 до 8°С.

Зберігання.

 У сухому темному місці при температурі від 2 до 8 °С.

Термін придатності. 1 рік.

Мы поможем в написании ваших работ!