Визначення мікрофлори повітря аспіраційним методом

(на апараті Кротова)

Аспіраційні методи основані на уловлюванні бактерій рідиною. Серед приборів для дослідження повітря приміщень найпоширенішим є прибор Кротова. Механізм уловлювання мікрофлори засновується на ударно-прибивної дії струменя повітря, який проходить крізь клиноподібну щілину і з великою швидкістю зіштовхується з вологою поверхнею поживного середовища.

Основними елементами апарату Кротова (рис. 17) є збудник аспірації (електромотор з відцентровим вентилятором), прибор для визначення об'єму протягнутого повітря (мікроманометр) та диск, який обертається, і на який встановлюється відкрита чашка Петрі з твердим поживним середовищем. Корпус прибору герметично закривається кришкою, центральна частина якої є прозорий диск із плексигласу з клиноподібною щілиною (ширина 0,1 мм біля центру).

Рисунок 17 – Апарат Кротова

Під час відбору проби повітря відкрита чашка Петрі обертається разом з диском апарату, завдяки чому досягається рівномірне засівання поверхні агару мікрофлорою повітря.

Апарат дозволяє пропускати від 20 до 40 л (дм³) повітря за хвилину. Загальний об'єм пропущеного через апарат повітря для аналізу різний і залежить від виду приміщення.

Проби повітря необхідно відбирати на рівні людини, яка сидить або стоїть.

Методика визначення мікрофлори повітря на апараті Кротова:

1.Підписати дві чашки Петрі.

2. Відкрити кришку апарату і закріпити на диску відкриту чашку Петрі із застиглим МПА.

3. Закрити кришку прибору, включити апарат в електромережу, встановити швидкість просочування повітря 25 л/хв і відмітити початковий час аспірації.

4. Провести забір 100 л повітря (час роботи апарата — 4 хв).

5. Аналогічно провести дослід з паралельною чашкою.

6. Інкубацію посівів провести в термостаті при температурі 37°С упродовж 24-48 год.

7. Підрахувати кількість колоній на кожній з двох чашок Петрі.

8. Вирахувати середнє арифметичне кількості колоній на двох паралельних чашках.

9. Визначити мікробне число (X) повітря даного приміщення за формулою:

X = а · 10,

де а - середнє арифметичне кількості колоній в 100 л повітря,

10 - коефіцієнт перерахунку на 1 м³ (1 м³=1000 л).

Визначення мікрофлори повітря седиментаційним методом.

За допомогою методів осадження (седиментації) можна отримати загальну уяву про мікрофлору повітря.

Методика визначення мікрофлори повітря седиментаційним методом:

1. Чашку із застиглим м'ясо-пептонним агаром переносять у досліджуване приміщення і розміщують на розгорнутому папері, в якому вона стерилізувалась. Під час аналізу слідкують за тим, щоб не було руху повітря.

2. Не перевертаючи чашки, здвигають кришку на край таким чином, щоб вся поверхня чашки з МПА була повністю відкрита, витримують 5 хв і закривають кришкою.

3. Підписують на папері прізвище, ім'я, групу, дату і місце взяття проби повітря.

4. Чашку ставлять у термостат при температурі 37°С на 24-48 год для культивування мікроорганізмів.

5. Після культивування вивчають культуральні ознаки (особливості росту на поживних середовищах) різних колоній (ізольоване скупчення клітин одного виду, що виросло з однієї клітини) (с.23-24), які виросли на чашці Петрі, й описують їх в зошиті за схемою:

Колонія	Розмір	Колір	Форма	Профіль	Край	Структура

6. Мікроскопують описані колонії, приготував фіксовані фарбовані за Грамом препарати, замальовують і визначають морфологічні ознаки.

Для підрахування мікробного числа повітря закритих приміщень користуються формулою В.Л. Омелянського, згідно з якою на поверхню 100 см² осідає за 5 хв стільки мікроорганізмів, скільки їх міститься в 10 л (дм³) повітря:

де X — кількість мікробів в 1 м³ повітря;

а — кількість колоній, що виросли на чашці Петрі;

b - площа чашки Петрі (3,14 х 5² = 78,5 см²);

t - час експозиції в досліді, хв;

5 - час експозиції за Омелянським, хв;

10 — об'єм повітря, з якого відбувається осадження за 5 хв, за Омелянським, л (дм³);

100 - площа, на яку відбувається осадження мікробів за Омелянським, см²;

1000 - перерахунок на 1 м³ повітря.

Після скорочення формула виглядає наступним чином, якщо експозиція чашки під час досліду дорівнювала 5 хв:

X = (а · 100 · 100): b

Завдання:

1. Провести мікробіологічне дослідження повітря методом осадження в мікробіологічній лабораторії, в буфеті, столовій, аудиторії і коридорі університету.

2. Провести дослідження мікрофлори повітря мікробіологічної лабораторії аспіраційним методом за допомогою апарата Кротова.

3. Визначити мікробне число повітря досліджених приміщень, проведене обома методами. Порівняти результати.

4. Провести кількісний облік мікроорганізмів за допомогою пластини Лафара або камери Вольфюгеля.

5. Описати культуральні ознаки колоній, які виросли на чашках Петрі. Дані занести до таблиці.

6. підготувати мазки та офарбувати їх за Грамом, провести мікроскопію описаних колоній, замалювати, встановивши їх морфологічні ознаки.

Питання для самоконтролю:

1. Чому повітря є несприятливим середовищем для життєдіяльності мікроорганізмів?

2. З якою метою і за допомогою яких методів проводиться кількісний аналіз мікрофлори повітря?

3. В чому сутність методу Коха?

4. Методика визначення мікрофлори повітря на апараті Кротова.

5. Що означає мікробне число повітря?

ЛАБОРАТОРНА РОБОТА № 10

Дата добавления: 2018-04-05; просмотров: 943; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 9 10 11 12 131415 16 17 18 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!