Лабораторная работа 4. Высаливание как метод разделения белков сыворотки крови

⇐ ПредыдущаяСтр 10 из 52Следующая ⇒

Активность осаждения белков зависит от ионной силы солевого раствора (или конечной концентрации таких водоотнимающих средств, как спирт или ацетон) и x-потенциала белка.

Глобулины сыворотки крови выпадают в осадок в полунасыщенном растворе сульфата аммония (50%), альбумин – при 75%-ном насыщении. Это позволяет осуществить фракционирование белков путем дробного их осаждения. Высаливание белков является обратимым процессом, и после удаления соли (путем диализа, при разбавлении водой или другими способами) белок вновь приобретает природные свойства, что используется для разделения, очистки белков и получения нативных белковых препаратов.

Ход работы. В пробирку 1 внести 2 мл раствора яичного белка или сыворотки крови. Добавить 2 мл насыщенного раствора (NH₄)₂SO₄ и перемешать. В образовавшемся полунасыщенном растворе (NH₄)₂SO₄ осаждаются глобулины, которые отделяют фильтрованием. К фильтрату добавить равный объем насыщенного раствора (NH₄)₂SO₄, насыщая таким образом фильтрат данной солью на 75%. При данной концентрации (NH₄)₂SO₄ осаждается альбумин, который также отделяют от раствора фильтрованием (фильтрат в пробирке 3). Полученные осадки собирают с фильтров, переносят в пробирки (4 и 5) и растворяют в минимальном объеме дистиллированной воды (не более 1 мл) и проводят с полученными растворами, а также с фильтратом, полученным после отделения альбумина (пробирка 3), биуретовую реакцию. Делают вывод о наличии белка в данных фракциях.

Контрольные вопросы по теме “Введение в биохимию. Биохимические компоненты клеток”:

1. Биологическая химия (биохимия) как наука. Место биохимии среди других медико-биологических дисциплин. Объекты изучения и задание биохимии. Ведущая роль биохимии в установлении молекулярных механизмов патогенеза болезней человека.

2. Связь биохимии с другими биомедицинскими науками. Медицинская биохимия. Клиническая биохимия. Биохимическая лабораторная диагностика.

3. Биохимические компоненты клетки, их биохимические функции. Классы биомолекул. Иерархия биомолекул, их происхождение.

4. Что понимают под первичной, вторичной, третичной и четвертичной структурами белка? Какие связи стабилизируют данные уровни структурной организации белка?

5. Характеристика пептидной группировки.

6. Каковы различия в аминокислотном составе глобулярных и фибриллярных белков?

7. Что такое изоэлектрическая точка? На чем основаны методы ее определения?

8. От чего зависит растворимость белков? Как влияет на растворимость заряд белковой молекулы, рН раствора?

9. Каковы общие принципы осаждения белка из раствора?

10. Что такое денатурация? Какие агенты ее вызывают? Какие уровни пространственной структуры белка нарушаются при денатурации?

11. Каким способом можно осадить белки из раствора, не вызывая их денатурацию?

12. Классификация сложных белков. Каковы важнейшие представители сложных белков и их функции?

13. Классификация простых белков. Каковы важнейшие представители простых белков и их функции?

Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 73; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 5 6 7 8 91011 12 13 14 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!