Лабораторная работа 2. Качественные реакции на белки и аминокислоты

⇐ ПредыдущаяСтр 8 из 52Следующая ⇒

Присутствие белка в биологических образцах или растворах можно обнаружить с помощью цветных реакций, которые обусловлены наличием пептидных связей или специфических групп аминокислот. Данные реакции используются в аналитике для выявления белков и определения их аминокислотного состава. С помощью цветных реакций можно выявить сравнить аминокислотный состав глобулярных и фибриллярных белков.

В качестве примера глобулярных белков могут использоваться белки сыворотки крови. Представителем фибриллярных белков является коллаген, продукт частичного гидролиза которого – желатин – в данной работе сравнивается с глобулярными белками сыворотки.

По результатам цветных реакций заполнить таблицу.

Название реакции	Чем обусловлена	Цвет, вид	Сыворотка (+/–)	Желатин (+/–)
1. Биуретовая
2. Нингидриновая
3. Ксантопротеиновая
4. Адамкевича
5. Эрлиха
6. Сакагучи
7. Фоля

Сделать вывод об аминокислотном составе исследованных белков и их возможной пищевой ценности.

Работа 1. Биуретовая реакция

Обусловлена наличием в белках и пептидах пептидных группировок, которые в щелочной среде образуют с сернокислой медью окрашенные в сине-фиолетовый цвет комплексы.

Ход работы. Взять 2 пробирки, в одну налить 0,5 мл раствора сыворотки крови, во вторую – 0,5 мл раствора желатина. В каждую пробирку добавить по 3-4 капли 10%-ного раствора NaOH и 1-2 капли 1%-ного раствора Сu₂SО₄ и перемешать.

Работа 2. Нингидриновая реакция

Обусловлена наличием свободной a-аминогруппы у всех белков, пептидов и a-аминокислот. При нагревании с нингидрином эти вещества окисляются с образованием СО₂, NН₃ и соответствующих альдегидов. Нингидрин при этом восстанавливается и конденсируется с NH₃ и избытком гидратированной кетоформы нингидрина, образуя комплекс сине-фиолетового цвета.

Ход работы. В 2 пробирки внести по 0,5 мл сыворотки крови и желатина, добавить по 5 капель 0,5% раствора нингидрина, перемешать и нагреть до кипения.

Работа 3. Ксантопротеиновая реакция

Обусловлена наличием в большинстве белков ароматических аминокислот, которые при нагревании с азотной кислотой подвергаются нитрованию. Образующиеся нитропроизводные аминокислот окрашены в желтый, а в щелочной среде - в оранжевый цвет.

Ход работы. В 2 пробирки внести по 0,5 мл сыворотки крови и желатины. Добавить по 0,5 мл концентрированной НNO₃ и осторожно (!) нагреть. В случае появления желтого окрашивания охладить смесь и добавить 30% раствор NaOH пo каплям до появления оранжевой окраски.

Работа 4. Реакция Адамкевича на триптофан

Триптофан в кислой среде взаимодействует с альдегидами, давая окрашенные продукты конденсации. Ледяная уксусная кислота может служить в качестве источника глиоксиловой кислоты, необходимой для этой реакции.

Ход работы. В 2 пробирки внести по 0,5 мл сыворотки крови и желатины. Добавить в каждую по 0,5 мл концентрированной уксусной кислоты, слегка нагреть. После охлаждения по стенке подслоить 1 мл концентрированной H₂SO₄ до появления красно-фиолетового кольца.

Работа 5. Реакция Эрлиха на гистидин

При смешивании растворов 1 (сульфаниловая кислота в НС1) и 2 (NaNO₂ в воде) друг с другом и с аммиаком образуется диазобензолсульфоновая кислота, дающая оранжевое окрашивание с гистидином.

Ход работы. В 2 пробирки внести по 0,5 мл сыворотки крови и желатины. Добавить по 0,5 мл реактива 1, по 1-2 капли реактива 2 и NH₄OH (или NаОН) до щелочной реакции.

Работа 6. Реакция Сакагучи на аргинин

В присутствии щелочи гуанидиновая группировка аргинина окисляется гипобромитом или гипохлоридом. Далее окисленный аргинин, соединяясь с a- нафтолом, дает продукт, окрашенный в красный цвет.

Ход работы. Внести в 2 пробирки по 0,5 мл сыворотки крови и желатины, добавить по 0,5 мл 10% раствора NaOH, по 5 капель 0,1% раствора a-нафтола в спирте и по 1-5 капель раствора гипобромита.

Работа 7. Реакция Фоля на серусодержащие аминокислоты

Цистин, цистеин, метионин при нагревании с концентрированными растворами щелочей разрушаются с образованием сульфидов. При добавлении ацетата свинца образуется сернистый свинец (сульфид свинца), выпадающий в осадок черного цвета.

Особо богаты цистеином фибриллярные белки, входящие в состав волос и ногтей.

Ход работы. Взять 3 пробирки: в одну внести 5 капель сыворотки крови, в другую – 5 капель желатины, в третью – налить 0,5 мл воды и опустить кусочек ногтя или волос. Добавить в каждую по 10 капель 30% раствора NаОН и по 1 капле 5% раствора (CH₃COO)₂Pb. Нагреть до кипения и осторожно кипятить 1-2 мин.

Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 65; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 3 4 5 6 789 10 11 12 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!