Список приладів, посуду, реактивів та матеріалів для пункту штучного осіменіння свиней



Назва Кількість
1 2

Прилади та апаратура

Чучело з дерев’яною площадкою 3
Зібрані штучні вагіни 10
Гумові камери для вагін 25
Кулі Річардсона 3
Спермоприймачі 10
Стерильні марлеві серветки в пакунках 10
Полістероловий пристрій для осіменіння 20
Поліетиленовий чохлик для катетера 10
Мікроскоп біологічний 1
Оптичний стандарт для визначення концентрації сперми у кнурів   2
Дистилятор Д-1 1
Термостат для вагін 1
Термоізоляторний чохлик для спермоприймача 3
Сушильна шафа 1
Термоси 3
Ваги аптекарські 1
Різноваги 1
Корнцанг матковий довжиною 40 см 1
Поліетиленовий флакон місткістю 150—260 мл 20
Зігріваючі столи до мікроскопа або термостати спеціальні 2
Палички для змащування вагін 5
Підставки для приладів 2
Підставки для вагін 4
Посуд та скляні вироби  
Спеціальні колби для розбавлення 5
Циліндри мірні на 250 мл 5
Циліндри мірні на 500 мл 5
Лійки скляні 5
Пляшки для дистильованої води 4
Тампонниці на 100 мл 10
Термометри для вагін 4
Скельця покривні 1000

Продовження таблиці 23

1 2
Скельця предметні 50
Скляні палички для взяття проб сперми 10

Прилади та матеріали

Ножиці гострокінцеві, 1
Пінцет анатомічний 1
Марля біла, м 10
Вата гігроскопічна, кг 0,5

Реактиви й препарати

Вазелін

У міру необхідності

Спирт-ректифікат (з розрахунку 3 г на одне взяття сперми на одне запліднення)

Господарський інвентар

Електропіч 1
Праска 1
Шафа медична двійчаста 1
Столи 3
Стілець гвинтовий 3
Таз для води 3
Відро емальоване 2
Щітки різних розмірів для миття посуду 10
Рушники 4
Халати білі 5
Халати чорні 6
Гумові чоботи 4
Фартухи 3
Мило господарське 3
Мило туалетне 3
Стерилізатор 2
Кастрюлі різні 5

В роботі зручніше користуватись чучелом з автоматичним регулюванням температури вагіни в межах 40…41°С. Якщо його немає, вагіну обгортають електричною грілкою з постійним нагріванням, чучело покривають шкірою забитої в стані охоти свині і встановлюють в манежі для одержання сперми. Перед кожним привчанням чучело зрошують змивом із статевих органів або сечею свиноматки в охоті, а задню його частину – спермою кнура.

Привчають до садки на чучело як молодих (віком 5…6 міс.), так і дорослих кнурів яких раніше використовували для природного парування. Плідники повинні мати нормальну вгодованість і відповідно реагувати на появу свиноматки.

Привчати кнурів до садки на чучело краще зранку, до годівлі. Спочатку в плідників виробляють рефлекс на місце, приганяючи їх кілька разів у манеж до чучела. Якщо кнурів утримують у групових станках, то в манеж їх направляють групами, по черзі підганяючи до чучела. В цьому випадку вони спокійно реагують на нове приміщення (манеж). Спостерігаючи за поведінкою кнурів, слід визначитися як доцільніше їх залишати по одному чи групою. Деякі кнури роблять садку з першого підганяння. У цей час інших кнурів розміщують біля манежу. В збудженому стані вони можуть робити стрибок на чучело після садки на іншого кнура. Для підвищення статевого збудження в манежі біля чучела або за огорожею розміщують свиноматку. Виробити рефлекс можна також шляхом одержання сперми у штучну вагіну, яку тримають збоку свиноматки в охоті під час садки кнура. Після 3…4 таких щоденних повторень та наступної 3…4-денної перерви кнур робить садку на чучело. Інколи молоді кнури при груповому утриманні, стрибаючи один на одного, збуджуються, виділяючи навіть сперму, а пізніше не реагують на чучело. В цьому випадку чучело можна поставити безпосередньо в клітці і спробувати одержати першу садку в ній. Крім того, ефективно також відокремлювати кнурів на кілька днів в ізольовані клітки. У деяких кнурів мимовільне виділення сперми спостерігається і при індивідуальному їх утриманні. У цьому випадку слід збільшити статеве навантаження та тривалість активного моціону. Після садки кожного кнура на чучело останнє дезінфікують слабким розчином фурациліну (1:5000).

Оцінка якості сперми. Оцінка якості сперми з достатньою точністю дає можливість визначити непридатні для осіменіння еякуляти, встановити відхилення окремих показників у кожного кнура від норми, і тим самим, своєчасно встановити і усунути причини, що зумовлюють погіршення якості сперми.

Основними методами оцінки сперми у виробничих умовах є органолептичний (за кольором, запахом, об’ємом) і мікроскопічний (за густиною, рухливістю, концентрацією, наявністю патологічних форм і виживаністю сперміїв поза організмом).

Органолептична оцінка. Сперма кнурів має рідку консистенцію, білий колір із сіруватим відтінком, специфічний запах. Рожевий колір свідчить про вміст у еякуляті домішок крові, бурий чи зелений – домішок гною, жовтий – сечі. При наявності зазначених ознак еякуляти вибраковують.

Об’єм профільтрованої частини еякуляту визначають у мірному циліндрі, підігрітому до температури сперми. Він становить 200…1000 мл і залежить від багатьох факторів.

Мікроскопічна оцінка. Використовують мікроскопи різних марок з підсвітлюванням освітлювачем 01-19. М’якою ганчіркою протирають зовнішні скельця об’єктива, окуляра й дзеркала. Освітлювач 01-19 встановлюють на відстані 12 см від дзеркала мікроскопа і настроюють на рівномірне освітлення поля зору. Спермії краще видно при неяскравому освітленні.

Для дослідження сперми під мікроскопом у стерильний флакон піпеткою відбирають 2…3 мл сперми. Стерильною піпеткою або скляною паличкою наносять краплину сперми на сухе предметне скло і накривають покривним. Скло ставлять на предметний столик мікроскопа, розміщеного в термостаті за температури 40…42°С, і оцінюють сперму при збільшенні в 200…300 разів.

Густа сперма (Г) відповідає концентрації 200 млн сперміїв і більше в 1 мл, усе поле зору ними заповнено густо (рис. 43).

Середня сперма (С) відповідає концентрації 100…200 млн сперміїв у                  1 мл, добре видно проміжки між окремими статевими клітинами.

Рідка сперма (Р) відповідає концентрації менше 100 млн сперміїв у                1 мл. Проміжки між статевими клітинами великі.

 

Рис. 43. Густота сперми кнурів при окомірній оцінці:

1 – густа; 2 – середня; 3 – рідка

Одночасно визначають рухливість сперміїв як ознаку їхньої життєздатності.

У 10 балів оцінюють сперму, в якій усі статеві клітини, що знаходяться в полі зору, мають прямолінійно-поступальний рух, 9, 8 і 7 балів – такий рух характерний відповідно для 90, 80 і 70% сперміїв. Для розрідження допускається сперма з активністю не нижче 7 балів.

Оцінка сперми за концентрацією сперміїв у 1 мл необхідна для визначення ступеня розрідження її спеціальними розріджувачами для того, щоб найраціональніше використати еякулят. Концентрацію сперміїв визначають у камері Горяєва, фотоелектроколориметром (ФЕК) або за оптичним стандартом.

Найпростішим і ефективним є метод визначення статевих клітин у спермі кнура за оптичним стандартом ТУ-46-07-942-74, розробленим у Інституті тваринництва УААН (автор Сердюк С.І.).

У стандартну чисту пробірку (використання пробірок іншого діаметра не допускається) наливають піпеткою 1 мл 1%-ного розчину хлористого натрію. Потім мікропіпеткою набирають 0,1 мл свіжої відфільтрованої через 4…6 шарів марлі сперми. Кінець мікропіпетки, який був занурений у сперму, витирають зовні чистою марлею або ватою і вносять сперму в пробірку з розчином. Мікропіпетку обов’язково промивають 1…2 рази цим же розчином.

Пробірку обережно струшують, розміщують поряд із стандартом, який попередньо добре струшують, а позаду прикладають газетний або книжковий текст. Пробірку з досліджуваною спермою і стандарт з текстом тримають на рівні очей проти па­даючого світла. Порівнюючи із стандартом оптичну щільність, до досліджуваної сперми додають градуйованою піпеткою 1%-ний розчин хлористого натрію до тих пір, поки висота літер шрифту та оптична щільність не стануть однаковими із стандартом (для більш точної оцінки бажано порівняння оптичної щільності проводити на різних шрифтах). При додаванні кожної частки розчину вміст пробірки і стандарт струшують для одержання рівномірної суміші.

Після того, як оптична щільність досліджуваної сперми і стандарту зрівняються, концентрацію розраховують за формулою:

К = 50 × (П + 0,1),

де К – концентрація статевих клітин у спермі, млн/мл; П – об’єм доданого 1%-ного розчину хлористого натрію, мл.

Стандарт відповідає оптичній щільності сперми кнура з концентрацією сперміїв 5 млн/мл.

У комплект входять: оптичний стандарт – 2 шт., пробірки – 8, мікропіпетка місткістю 0,1 мл – 1, піпетка з поділками місткістю 2 мл – 1,    інструкція – 1 шт.

Приготування синтетичних середовищ. Для розрідження сперми використовують синтетичні середовища, які випускають у вигляді сухих заготовок. Компоненти розріджувача сперми повинні бути хімічно чистими й зберігатися у герметичній упаковці в сухому темному приміщенні за температури не вище 5°С.

На даний час в Україні використовуються різні середовища для розбавлення і зберігання сперми кнурів, як вітчизняного, так і закордонного виробництва. Відомі середовища для розбавлення і зберігання сперми кнурів закордонного виробництва – BTS, IVT, SCHONON, ZORLESCO, ANDROHEP. В Україні із закордонних застосовується переважно середовище BTS (польського, німецького або голландського виробництва) розраховане на 3-, 7- чи 10-денний термін зберігання сперми кнурів, а з вітчизняних середовищ – «Біоконсан», ГХЦ-У Харківської науково-виробничої комерційної фірми «Ембріон», ГХЦС чи ГХЦ, виготовлені безпосередньо на станціях штучного осіменіння свиней згідно Інструкції зі штучного осіменіння свиней. Проте це потребує додаткових затрат праці і обладнання та ускладнюється тим, що в Україні продаються складники для виготовлення середовищ від багатьох виробників (здебільшого імпортних), та партії цих реактивів дуже відрізняються між собою за дією на сперму.

З середовищ вітчизняного виробництва в Україні найбільш широко реалізовується та застосовується для розбавлення сперми кнурів, призначеної для штучного осіменіння свиноматок, готова суха заготовка середовища «Біоконсан». Всі середовища для розбавлення сперми кнурів, які використовуються на сьогодні у світі містять в своєму складі глюкозу, трьохзаміщений цитрат натрію і натрій двовуглекислий. У складі всіх середовищ, крім IVT та глюкозо-сольового розбавника міститься двонатрієва сіль етилендіамінтетраоцтової кислоти. Також у склад різних середовищ входять такі сполуки, як хлорид калію, трис, HEPES, лимонна кислота, цистеїн, сульфат амонію та бичачий сироватковий альбумін. Призначенням основних складників, які застосовуються у більшості середовищ для зберігання охолодженої сперми кнурів у рідкому стані поза організмом є наступне:

· глюкоза є енергетичним матеріалом для сперматозоїдів і запобігає втраті ними електричного заряду, а, отже, їх аглютинації;

· цитрат, бікарбонат натрію, чи хлорид калію, які є природними буферами, перешкоджають отруєнню сперміїв кислими продуктами їхнього власного розпаду, зменшують проникність оболонок сперміїв, послаблюють дію антитіл у статевих шляхах свиноматок на сперматозоїди, виводять з сироватки сперми кальцій, вільні іони якого є шкідливими для сперматозоїдів;

· трилон Б (хелатон-3 або двонатрієва сіль етилендіамінтетраоцтової кислоти), запропонований у 1965 році М.Т. Плішко в Інституті біології тварин, даного часу застосовується в більшості синтетичних середовищ для зберігання охолодженої сперми кнурів у рідкому стані. Його дія полягає у захопленні дивалентних іонів металів, зокрема кальцію, й обмеженні його проникнення через плазматичну мембрану. Він запобігає початку капацитації та змінам акросоми сперміїв в процесі їхнього зберігання;

· речовини, які містять сульфгідрильні групи, допомагають стабілізувати мембрану сперміїв при розбавленні, зберіганні й охолодженні і в свою чергу підвищують їхню стійкість до коливань температури, та запобігають капацитації;

· антиоксиданти продовжують життя сперміїв із збереженням запліднювальної здатності на вищому рівні;

· фосфоровмісні сполуки, які вводяться в середовища для розбавлення і зберігання сперми кнурів, є важливими для підтримання рівня аденозинофосфорних кислот у сперміях (АТФ, АДФ, АМФ) і забезпечення процесів життєдіяльності в сперміях при зберіганні. Мають важливе значення як для запобігання передчасній капацитації сперміїв при зберіганні та транспортуванні, так і для створення сприятливого середовища в матці свиноматок при осіменінні;

· протимікробні препарати (переважно антибіотики) широкого спектру дії затримують розвиток мікроорганізмів у спермі, що можуть потрапити в неї при взятті, фасуванні і зберіганні.

Для розрідження та зберігання придатна сперма кнурів з концентрацією 100 млн/мл і вище й рухливістю сперміїв не менше                                    7 балів (табл. 24).

Температура середовища і сперми перед розрідженням повинна бути однаковою. Середовище додають до сперми невеликими порціями і кожного разу ретельно перемішують. Після розрідження під мікроскопом визначають рухливість статевих клітин.

 

Таблиця 24


Дата добавления: 2018-02-15; просмотров: 316; ЗАКАЗАТЬ РАБОТУ