Методы микробиологической диагностики вирусных инфекций
Методы микробиологической диагностики инфекционных заболеваний, их характеристика
Хотя в других вопросах уже было сказано о том, как осуществлять диагностику тех или иных инфекционных заболеваний, исходя из этиологического фактора (вирусы, бактерии и т.д.), в настоящем вопросе мы обобщим все имеющиеся сведения, рассмотрим методы микробиологической диагностики соответственно:
- бактериальный заболеваний;
- вирусных заболеваний;
- грибковых заболеваний;
- протозойных заболеваний
Перед тем, как говорить о методах, целесообразно коснуться вопроса об этапности микробиологической диагностики. Различают 3 основных этапа: преаналитический, аналитический и постаналитический.
Преаналитический этап включает взятие материала для исследования. Т.е. говоря о микробиологической диагностике, правильно начинать с забора материала. Выбор материала диктуется 3 основными аспектами:
- входными воротами;
- патогенезом;
- клинической картиной
Материал для исследования – биологические и патологические жидкости больного (кровь, ликвор, гной, рвотные массы и промывные воды, фекалии, слизь, мокрота и т.д.).
Аналитический этап включает методы микробиологической диагностики:
- микроскопический метод (обнаружение микроорганизмов в кусочке ткани);
- культуральный метод – посев на искусственные питательные среды, куриные эмбрионы, культуру клеток и выделение чистой культуры. Различают бактериологическое, вирусологическое, микологическое и протозоологическое исследование;
|
|
|
- биологический метод – создание модели заболевание путём заражения лабораторных животных;
- серологический метод – обнаружение титра антител в сыворотке крови больного (серодиагностика), реже – обнаружение антигенов в исследуемом материале (сероиндикация);
- аллергологический метод – выявление аллергии путём постановки внутрикожных проб с соответствующими аллергенами;
- молекулярно-генетический метод – обнаружение и выявление определённых генов, фрагментов нуклеиновых кислот. Наиболее важными являются ПЦР, секвенирование генома и ДНК-зонды.
Информативность перечисленных методов неодинакова. Так, «золотым стандартом» микробиологии является культуральный метод, поскольку позволяет выделить и идентифицировать возбудителя, т.е. первопричину болезни, а остальные методы выявляют те изменения в организме, которые обусловлены деятельностью возбудителя.
На втором месте стоит серологический метод, а вот микроскопия даёт очень ориентировочные результаты, поскольку микробы – очень мелкие организмы, и что-то конкретное можно сказать, если они имеют какую-то уникальную морфологию. В остальных случаях можно дать грубую оценку возбудителя по типу: грамотрицательные палочки, грамположительные кокки и тому подобное.
|
|
|
Использование биологического метода очень ограничено, поскольку многие животные просто невосприимчивы к возбудителям инфекций у человека.
Аллергологический метод имеет ещё меньшее значение в микробиологической диагностике: мало какие микроорганизмы вызывают ГЗТ у человека.
Молекулярно-генетические методы следует отнести к экспресс-методам, поскольку результат можно получить в течение часов, а то и минут. Но на первое место их поставить нельзя, поскольку, хотя они и отличаются высочайшей точностью (идентифицируют РНК или ДНК), дороговизна и сложная технология обусловили существенное ограничение их применения. Это в основном крупные научные центры и НИИ, клиники, но никак не рядовые ЛПУ, каких большинство.
Постаналитический этап – это работа врачей-клиницистов, которые должны провести параллель между данными микробиологической диагностики и теми клиническими проявлениями и жалобами, с которыми пришёл больной.
Методы микробиологической диагностики бактериальных инфекций
|
|
|
Для микробиологической диагностики бактериальных инфекций можно применять:
- бактериоскопию;
- бактериологический метод;
- биологический метод;
- серологический метод;
- аллергологический метод
Итак, бактериоскопия – очень оценочный метод, хотя метод прост, быстр и удобен.
Бактериологический метод – важнейший метод микробиологической диагностики. Он позволяет после посева выделить и накопить чистую культуру, исследуя её свойства:
- тинкториальные;
- морфологические;
- культуральные;
- биохимические;
- антигенные
Это позволяет установить вид возбудителя. Также нередко составляют антибиотикограмма, т.е. определяют чувствительность микроорганизма к определённым антибиотикам.
Пример антибиотикограммы
Если заболевание вызвано условно-патогенными микроорганизмами, представителями нормальной микрофлоры, то обязательно указать количество микроорганизмов (в КОЕ/мл) в исследуемом материале.
Биологический метод:
- негуманен;
- малоэкономичен;
- малоэффективен
Метод находит очень ограниченное применение.
Серологический метод тоже позволяет дать определённую оценку возбудителя. Реализуется он в двух направлениях:
|
|
|
- серодиагностика;
- сероиндикация
Серодиагностика – это обнаружение определённого титра антител в крови. Метод достаточно удобен, в определённой степени информативен, но недостатком является то, что антитела к возбудителю в большинстве случаев появляются к 7-10 дню заболевания, а ответ желательно получить быстрее, особенно при остром течении инфекции. Кроме того, в подавляющем большинстве следует оценить динамику антителообразования, при этом используют парные сыворотки, с интервалом в 10-14 дней, обнаруживая нарастание титра в 4 и более раз с помощью ИФА, РПГА, РСК, РНИФ.
Очень быстро можно определить антигены в исследуемом материале, поскольку они есть там всегда, в отличие от антител. Очень часто используют РИФ.
Методы микробиологической диагностики вирусных инфекций
Вирусоскопия не имеет широкой распространённости в медицинской практике, ведь полноценно изучать морфологию вируса можно только с помощью электронной микроскопии. Светооптическая микроскопия позволяет визуализировать крупные вирусы в виде внутриклеточных включений (если предварительно покрасить ткань анилиновыми красителями). Если пометить ткань флюорохромом, то можно видеть характерное свечение вируса в люминесцентном микроскопе. И всё же данный метод имеет ограниченное применение, поскольку очевидна его ориентировочность.
Вирусологический метод заключается в культивировании вирусов посредством 3 основных вариантов:
- заражение лабораторных животных;
- заражение куриных эмбрионов;
- выделение в культуре клеток
При заражении животных и куриных эмбрионов оценочный результат можно получить на основании клинических проявлений, хотя последние у животных моделей не всегда чётко выражены, поэтому чаще окончательный результат получают после реакции гемагглютинации.
В культуре клеток присутствие вируса определяется следующими изменениями:
- цитопатический эффект;
- образование внутриклеточных включений;
- бляшкообразование;
- гемадсорбция;
- цветная реакция
Все они были подробно описаны в 3-м блоке вопросов.
Серологический метод осуществляется аналогично тому, что было описано для бактериальных инфекций.
Экспресс-метод РИФ позволяет определить антигены вируса в исследуемом материале. Для идентификации используют парные сыворотки: одну берут в начале болезни, другую через 10-14 дней, сыворотки хранят при температуре 4-8 
, исследуя одномоментно, т.е. определяют сероконверсию: нарастание титра антител в 4 и более раз, что является диагностически ценным.
Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 362; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!