Опыт №1. Исследование морфологических особенностей
Дефицитных и апластических анемий.
Производят исследование особенностей железодефицитной анемии, анемии, дефицитной по витамину В12/В9, апластических анемий по коллекции мазков крови пациентов ГБОУ ВПО СПбГПМУ методом световой микроскопии. Изучают и зарисовывают в протоколе исследования морфологические маркеры дизэритропоэтических анемий.
Список литературы
1. Льюис С.М. и др. Практическая и лабораторная диагностика / С.М. Льюис, Б. Бэйн., И. Бэйтс; пер. с англ. под ред. А.Г. Румянцева. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 672.: ил.
2. Шиффман Ф.Дж. Патофизиология крови. Пер. с англ. – М.-СПб.: «Изд-во БИНОМ»-«Невский Диалект», 2000, 448 с., ил.
3. Титов В.Н., Творогова М.Г. Клиническая лабораторная диагностика / В кн. Клиническая биохимия / Под ред. В.А. Ткачука. – 2-е изд. – М.: ГЭОТАР-МЕД, 2004. С. 19 – 166.
4. Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Механизмы развития болезней и синдромов. Книга 1-я (Учебник для студентов медицинских вузов). Издание 2-е, дополненное и переработанное – СПб., 2005, ЭЛБИ-СПб, 507 с., илл.
ПАТОФИЗИОЛОГИЯ СИСТЕМЫ КРОВИ.
БЕЛАЯ КРОВЬ: ЛЕЙКОЦИТОЗЫ И ГЕМОБЛАСТОЗЫ
Лейкоциты (WBC) – сборная группа ядросодержащих форменных элементов крови, выполняющих интегральные защитные, регуляторные и сигнальные функции. Различают гранулоциты (нейтрофильные, эозинофильные, базофильные) и агранулоциты (лимфоциты, моноциты). В крови взрослого человека содержится незначительное число лейкоцитов, в среднем 4 – 9 х 109/л. Большая часть лейкоцитов реализует свои функции мигрируя в ткани организма (см. главы «Патофизиология воспаления», «Патофизиология иммунной системы»).
|
|
|
Лейкоцитоз – нарастание содержания лейкоцитов в периферической крови, может происходить за счет всех типов лейкоцитов (собственно лейкоцитоз), либо за счет гранулоцитов (гранулоцитоз), либо за счет агранулоцитов (агранулоцитоз).
Этиология лейкоцитозов:
1. Абсолютные лейкоцитозы (нормоволемические и гиперволемические лейкоцитозы):
a. Усиление лейкопоэза (физиологическая избыточная стимуляция факторами роста, неопластическая трансформация миелоидного ростка кроветворения),
b. Перераспредение лейкоцитов (ослабление адгезивных свойств, выход из депо),
2. Относительный лейкоцитоз (гиповолемические лейкоцитозы).
Классификация лейкоцитозов [2, 5]:
1. По этиологии:
1.1. Абсолютные,
1.2. Относительные.
2. По патогенезу:
2.1. Физиологические (перераспределительный лейкоцитоз, беременность и послеродовый период, перинатальный период),
2.2. Патологические (неопластические формы, реактивные формы).
3. По типу преобладающих клеток:
3.1. Нейтрофильно-эозинопеническая форма (нейтрофильный гранулоцитоз со сдвигом влево; характерен для острых бактериальных инфекций),
|
|
|
3.2. Эозинофильно-нейтрофильная форма (эозинофильно-нейтрофильный лейкоцитоз со сдвигом влево; характерен для аллергических заболеваний и паразитарных инвазиях),
3.3. Лимфоцитарно-гранулопеническая форма (лимфоцитоз, характерен для вирусных инфекций и аллергических реакций IV типа),
3.4. Моноцитарно-лимфоцитарная форма (агранулоцитоз, характерен для хронических инфекционных заболеваний).
Монолейкоцитозы – лейкоцитозы с преобладанием одного типа лейкоцитов, встречаются достаточно редко и требует тщательной дифференциальной диагностики с онкологическими заболеваниями.
Лейкопения – уменьшение содержания лейкоцитов в периферической крови, может происходить за счет всех типов лейкоцитов (собственно лейкопения), либо за счет гранулоцитов (гранулоцитопения), либо за счет агранулоцитов (агранулоцитпения). Крайне тяжелое состояние, выражающееся в практически полном отсутствии лейкоцитов в крови, называется алейкия.
Этиология лейкопении:
1. Абсолютные лейкопении:
a. Угнетение гемопоэза (апластические состояния),
b. Нарушение механизмов образования лейкоцитов (дефекты генетического аппарата, нарушение синтеза ДНК при дефиците витаминов В12 и/или В9),
|
|
|
c. Повышенные потери лейкоцитов (кровотечения, тяжело протекающие инфекции),
d. Перераспределение лейкоцитов (усиление адгезивных свойств лейкоцитов под действием химических соединений, при активации системы гемостаза),
e. Разрушение лейкоцитов в костном мозге и/или периферической крови (аутоиммунная патология),
2. Относительная лейкопения (гиперволемические состояния).
Лейкопении приводят к резкому снижению резистентности организма к инфекционным заболеваниям, нарушению механизмов противоопухолевого надзора, дисфункции системы гемостаза.
Объективную оценку состояния и сбалансированности лейкопоэза позволяет дать анализ лейкоцитарной формулы. Различают абсолютную (количество клеток различных типов лейкоцитов в крови) и относительную (процентное соотношение лейкоцитов в крови) лейкоцитарные формулы. В клинических исследованиях, как правило, пользуются относительной формулой: нейтрофилы – 46–78%, эозинофилы – 0,5–5%, базофилы – 0–1%, лимфоциты – 19–37%, моноциты – 3–11%.
Следует помнить, что соотношение лейкоцитов различных типов в крови взрослого человека и ребенка имеет существенные различия. Первые 3–4 дня периферическая кровь новорожденного содержит до 70% нейтрофилов, что соответствует показателям взрослого организма по количеству, но отличается от них качественно – наблюдается присутствие в крови «юных» клеток – метамиелоцитов и миелоцитов (редко). К 4-5 дню жизни происходит «первый перекрест лейкоцитарной формулы) – количество гранулоцитов выравнивается с показателями агранулоцитов (50:50 ± 5-10%). К окончанию второй недели жизни количество нейтрофильных гранулоцитов уменьшается до 30-35%, практически исчезают «юные» клетки, а количество агранулоцитов увеличивается до 60-65% за счет лимфоцитарного компонента. Лейкоцитарная формула у ребенка вновь становиться соотносительной с таковой у взрослого человека после «второго перекреста лейкоцитарной формулы» в 5 лет жизни [6]. Наблюдаемые изменения носят выраженный адаптивный характер и должны учитываться в клинической практике.
|
|
|
Изменение содержания лейкоцитов в крови с преобладанием более молодых (старых) клеток называется сдвигом лейкоцитарной формулы/ядерным сдвигом влево (вправо). Для анализа интенсивности и направления ядерных сдвигов за «эталон» принимают зрелый нейтрофил, имеющий 3-5и сегментированное ядро. Относительное увеличение количества нейтрофильных лейкоцитов с меньшим числом/отсутствием сегментов ядра свидетельствует о сдвиге влево (увеличивается содержание палочкоядерных клеток, появляются миелоциты и метамиелоциты), и, наоборот, уменьшение числа таких клеток и/или увеличение количества лейкоцитов с большим числом сегментов ядра свидетельствует о сдвиге вправо (в сторону более зрелых, гиперсегментированных форм).
Различают следующие виды лейкоцитарных ядерных сдвигов [5]:
Простой сдвиг влево: лейкоцитарная формула не изменена, умеренный лейкоцитоз (до 12 х 109/л) с увеличением содержания палочкоядерных гранулоцитов. Простой сдвиг характерен для неосложненных инфекционных заболеваний и стадии реконвалесценции тяжелых инфекций.
Регенеративный сдвиг влево: показатели компонентов лейкоцитарной формулы не выходят за пределы референсных значений, выраженный лейкоцитоз (до 30 х 109/л) с увеличением в крови палочкоядерных гранулоцитов и появлением метамиелоцитов. Регенеративный сдвиг характерен для среднетяжелых инфекций и длительных, вялотекущих инфекций, ожоговой болезни.
Гиперрегенеративный сдвиг влево: лейкоцитарная формула нарушена в сторону преобладания определенной клеточной популяции, лейкоцитоз превышает 30 х 109/л, в периферической крови обнаруживаются метамиелоциты и миелоциты. Крайняя степень гиперрегенеративного сдвига называется лейкемоидной реакцией и отражает высокую степень активации красного костного мозга.
Лейкемоидная (лейкозоподобная) реакция – патологическое состояние миелоидного ростка кроветворения, сопровождающаяся повышенным (более 40 – 50 х 109/л) содержанием лейкоцитов в периферической крови и значительным содержанием в ней метамиелоцитов и миелоцитов. Лейкемоидные реакции характерны для тяжелых форм различных инфекций, сепсиса и нуждаются в дифференциальной диагностике с онкологическими заболеваниями крови. Наиболее информативным критерием, отличающим доброкачественную гиперпролиферативную активность костного мозга от неопластической трансформации, является поликлональный характер лейкемоидных реакций любого типа.
Регенеративно-дегенеративный сдвиг влево: лейкоцитарная формула отражает преобладание определенного типа лейкоцитов, лейкоцитоз не характерен или выражен незначительно, юные формы нейтрофилов присутствуют в незначительном количестве, возможно появление в лейкоцитах патологических включений.
Дегенеративный сдвиг влево: редко встречающаяся форма лейкоцитарного сдвига, отражающая терминальную стадию развития заболевания, баланса лейкоцитарной формулы нет, характерна лейкопения, прежде всего за счет дефицита зрелых лейкоцитов, в лейкоцитах выявляются патологические включения и вакуолизация цитоплазмы.
«Токсическая зернистость» - часто регистрируемый вид патологических включений лейкоцитов, отражает резкое увеличение количества и интенсивности окраски гранул лейкоцитов, является маркером интенсивности синтетической активности этих клеток, и их активную фагоцитарную активность (например, при остром септическом воспалении).
Вакуолизация цитоплазмы – характерный признак глубоких нарушений метаболизма и/или развития апоптотических или некробиотических процессов в лейкоцитах.
Сдвиг вправо: лейкоцитарная формула резко нарушена, преобладают сегментоядерные и гиперсегментоядерные клетки, характерен для первичных или вторичных форм угнетения кроветворения в костном мозге (апластические состояния, инфильтрация костного мозга опухолевыми клетками).
Гемобластозы – новообразования кроветворной и лимфоидной ткани – сборная гетерогенная группа неопластических заболеваний системы крови имеющая большой удельный вес в структуре онкозаболеваемости в Российской Федерации (по данным 2005 года они составили 4,9% заболеваемости злокачественными новообразованиями у мужчин, 4,5% у женщин и 33% у лиц моложе 30 лет) [3].
Из большой группы гемобластозов в классической патофизиологии традиционно уделяют основное внимание лейкозам и лимфомам – острым и хроническим опухолевым заболеваниям кроветворной ткани, имеющим в качестве первичного локализации неопластического клона (миелоидного или лимфоидного) красный костный мозг (лейкозы) или периферические органы иммунной системы (лимфомы).
Классификация лейкозов по патогенезу [4]:
1. Острые лейкозы (миелобластные, лимфобластные, плазмобластные, миеломонобластные, эритромиелобластные, мегакариобластные, недифференцированные),
2. Хронические лейкозы:
2.1. Хронические миелоцитарные лейкозы (миелоидный, эритромиелоидный, истинная полицитемия, эритремия),
2.2. Хронические лимфоцитарные лейкозы (лимфоидный, лимфоматоз кожи, парапротеинемические лейкозы),
2.3. Хронические моноцитарные лейкозы (моноцитарный, гистиоцитозы).
Классификация лимфом по морфологии:
1. Лимфома Ходжкина
2. Неходжкинские лимфомы:
2.1. Т-клеточные лимфомы,
2.2. В-клеточные лимфомы.
В диагностике и дифференциальной диагностике неопластических заболеваний системы крови применяются молекулярно-генетические, иммуногистохимические и цитохимические методы исследования крови, биоптатов красного костного мозга, лимфатических узлов, вторичных опухолевых очагов.
В качестве скрининговых рутинных исследований еще имеет значение цитохимическое определение миелопероксидазы (маркер всех типов нейтрофилов, эозинофилов и моноцитов), щелочной фосфатазы (сегментоядерные и палочкоядерные нейтрофилы, реже метамиелоциты и макрофаги костного мозга), гистохимическое окраска толуидиновым синим гранул базофилов и мастоцитов. Однако в современной гематологии эти методы полностью заменены генетическим и иммунологическим анализом [2].
Цель занятия:
1. Исследование особенностей состояния периферических органов лимфоидной ткани.
2 Исследование морфологических особенностей лейкоцитов.
3. Решение учебных гемограмм.
Опыт №1. Выделение скоплений MALT в тонком кишечнике крысы [1].
Эвтаназию крысы проводят под эфирным наркозом. Подопытное животное фиксируют на препаровальном столике в положении «на спине». Производят разрез от мечевидного отростка до паха крысы и выделяют весь тонкий кишечник, который разрезают на фрагменты на 12 – 15 см.
При помощи шприца промывают фрагменты кишечника от содержимого ледяным физиологическим раствором, вскрывают фрагменты и рассматривают внутреннюю стенку кишечника крысы под бинокулярной лупой. Пейеровы бляшки (MALT тонкого кишечника) выступают в виде белых утолщений.
Фиксируют наличие/отсутствие макроскопических неопластических изменений MALT-системы кишечника и вносят результаты в протокол эксперимента.
Опыт №2. Выявление гранул базофилов и мастоцитов в периферической крови [1].
Приготовить мазок крови в соответствии с ранее изложенной методикой (см. глава «Патофизиология системы крови. Красная кровь. Эритроцитозы.» Опыт №2) и высушить его на воздухе.
Мазки крови залить готовым раствором толуидинового синего (Биовитрум, Россия) и выдержать 4–5 минут. Осторожно промыть мазки дистиллированной водой до полного исчезновения признаков красителя в смыве и высушить на воздухе.
Наблюдается дифференцированное интенсивное окрашивание в темно-красный или фиолетовый цвет гранул базофилов и мастоцитов, что позволяет провести их подсчет и оценить степень зрелости клеток.
Список литературы
1. Лимфоциты: Методы: Пер. с англ./Под ред. Дж. Клауса. – М.: Мир, 1990. – 395 с.
2. Льюис С.М. и др. Практическая и лабораторная гематология / С.М. Льюис, Б. Бэйн., И. Бэйтс; пер. с англ. под ред. А.Г. Румянцева. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 672.: ил.
3. Мерабишвили В.М. Злокачественные новообразования в мире, России, Санкт-Петербурге. – СПб.: КОСТА, 2007. – 424 с.
4. Рубцовенко А.В. Патологическая физиология. М.: МЕДпресс-информ, 2006. – 608 с.
5. Зайчик А.Ш., Чурилов Л.П. Механизмы развития болезней и синдромов. Книга 1-я (Учебник для студентов медицинских вузов). Издание 2-е, дополненное и переработанное – СПб., 2005, ЭЛБИ-СПб, 507 с., илл.
6. Васильев А.Г. и др. Лейкоцитозы и лейкозы. Учебно-методическое пособие для практических занятий по патологической физиологии. ГОУ ВПО СПбГПМА, 2009. – 64 с.
Дата добавления: 2019-03-09; просмотров: 152; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!