Опыт №1. Взятие крови у крысы путем пункции сердца.
Взятие крови у лабораторных животных сопряжено с рядом трудностей. Прежде всего, к ним относятся малый объем циркулирующей крови и незначительный диаметр кровеносных сосудов. Вместе с тем для целого ряда лабораторных исследований (изучение параметров системы гемостаза, биохимический анализ) требуется получение больших объемов крови с минимальными «примесями» продуктами разрушения тканей периваскулярной зоны; при этом в условиях хронического эксперимента эвтаназия животного не всегда желательна.
На кафедре патологической физиологии ГБОУ ВПО СПбГПМУ успешно применяется метод взятия крови у лабораторных крыс путем пункции сердца при помощи вакуумных систем (например, вакуумные пробирки BD Vacutainer (BectonDickinson, USA) в комплекте с двусторонними иглами и держателем) под эфирным наркозом.
Животное вводится в наркоз парами эфира и фиксируется на препаровальном столике в положении «на спине». Пальпаторно определяется положение верхушки сердца в проекции на грудную клетку крысы. Двусторонняя игла закрепляется в держателе и с внешней иглы снимается резиновый защитный кожух. Игла вводится в камеру сердца в проекции верхушки сердца проколом грудной клетки под углом 350 – 450 к грудине животного.
После вхождения в камеру сердца (определяется по ритмичным колебаниям иглы) на внутреннюю иглу насаживается вакутейнер с соответствующим опыту антикоагулянтом (цитрат натрия, гепарин, ЭДТА и пр.) и слегка покачивая пробирку (амплитуда 50 – 100) набирается кровь до момента заполнения вакутейнера. Завершив взятие крови, быстрым движением выводят внешнюю иглу из сердца крысы. Вакуумная пробирка освобождается от иглы, осторожно переворачивается 2 – 3 раза для полного перемешивания крови и антикоагулянта, устанавливается в штатив и может быть подвергнута обработке в соответствии с протоколом исследования.
|
|
|
Животное снимается с препаровального столика и осторожно укладывается в боковом положении в индивидуальную клетку, обеспечивается свободный доступ к воде и пище. Длительность индивидуального содержания крысы зависит от объема взятой крови и колеблется от 1 до 3 суток.
Опыт №2. Приготовление мазка крови и окрашивание
по Май-Грюнвальд – Гимза ( May - Gr ü nwald - Giemsa )
Мазок крови является высокоинформативным классическим рутинным методом исследования количественного и качественного состава крови. Для его приготовления используется цельная кровь без примесей антикоагулянтов, способных дать искажение при окрашивании мазка.
Для приготовления мазка крови используются два стандартных чистых обезжиренных предметных стекла с гладкими краями. На горизонтально расположенное предметное стекло наносят каплю крови по срединной линии на 0,5 – 1 см от края. Второе стекло (или специальное стекло) устанавливают под углом 300 – 400 к предметному стеклу и касаются краем капли крови. После растекания крови по краю стекла, не надавливая быстрым и непрерывным движением проводят им по предметному стеклу, формируя мазок крови.
|
|
|
Мазок высушивается на воздухе и подвергаются обработке красителем. При используемом методе окрашивания дополнительная фиксация мазков не требуется, она осуществляется в процессе окраски метиловым спиртом, входящим в состав красителя Май-Грюнвальд. Высушенный мазок помещается в контейнер с красителем Май-Грюнвальд (Биовитрум, Россия) на 3 – 5 минут, промывается дистиллированной водой в течение 1 – 2 минут, дополнительно докрашивается готовым красителем Гимза (Биовитрум, Россия) в течении 10 – 12 минут и еще раз промывается 1 – 2 минуты дистиллированной водой. Мазок высушивается на воздухе и исследуется методом световой микроскопии.
Ход опыта и результаты исследования записывают в протокол исследования.
Список литературы
1. Rubin Е., Gorstein F et al. Rubin’s pathology: clinicopathologic foundations of medicine / editor-in-chief, E. Rubin. 4-th ed. 2004.
2. Льюис С.М. и др. Практическая и лабораторная гематология / С.М. Льюис, Б. Бэйн., И. Бэйтс; пер. с англ. под ред. А.Г. Румянцева. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 672.: ил.
3. Михайлов В.В. Основы патологической физиологии: Руководство для врачей. М.: Медицина., 2001. – 704 с.
Дата добавления: 2019-03-09; просмотров: 500; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!