Методы диагностики микоплазмоза.
Культивирование микоплазм с последующей идентификацией.
Культуральный метод обладает абсолютной специфичностью и обеспечивает возможность получить чистую культуру, необходимую для определения чувствительности к антибиотикам.
Иммунофлюоресценция и серологические методы.
Реакция иммунофлюоресценции предназначена для детекции микоплазм в мазках, соскобах, мазках-отпечатках из цервикса, уретры и влагалища.
Иммуноферментный анализ определяет антительный ответ организма на микоплазмоз.
Методы молекулярной биологии;
ПЦР и РНК высоко чувствительные и специфические методы диагностики микоплазмоза.
Как и большинство алгоритмов по диагностики ИППП эти методики необходимо применять в сочетании двух. Один скрининговый другой подтверждающий.
Исследование бледной трепонемы в «темном поле».
Темнопольная микроскопия применяется для обнаружения возбудителя сифилиса - бледной трепонемы в отделяемом из эрозий, язв и эрозированных папул.Так как бледная трепонема может окрашиваться только специальными и сложными методами окраски, применение довольно простой и недорогой темнопольной световой микроскопии позволяет значительно ускорить и удешевить обнаружение возбудителя. Метод основан на феномене Тиндаля (в луче света, проникающем в темное помещение через узкую щель, хорошо видны частицы пыли, взвешенные в воздухе). Для этого используют темную бумагу, закрывающую доступ света в оптическую систему светового микроскопа, в которой оставляют небольшую щель.
Обнаружение бледной трепонемы является неоспоримым доказательством подтверждения диагноза сифилиса. Особо ценен метод при диагностике первичного сифилиса (при отрицательных результатах серологических исследований), при диагностике нейросифилиса (обнаружение спирохеты в ликворе) и диагностике реинфекции сифилиса.
|
|
|
Показаниями для исследования являются любые эрозии, язвы и эрозированные папулы в области половых органов, ануса, слизистой оболочки рта и губ.
Для проведения исследования важно получить так называемый тканевой сок, в котором содержаться бледные трепонемы. После обработки поверхности высыпного элемента (эрозии, язвы, эрозированной папулы) осторожными движениями затупленного скальпеля добиваются выделения тканевого сока - прозрачно-желтой жидкости, который немедленно забирается для исследования и просматривается в темнопольном микроскопе.
Диагноз сифилиса потверждается при обнаружении подвижных бледных трепонем с поступательными, качательными, маятникообразными и ротаторным движениями. Обращается внимание на количество равномерных завитков, которых у бледной трепонемы насчитывают от 8 до 14.
|
|
|
Все эти особенности необходимы,чтобы отличить бледную трепонему от других,так называемых сапрофитирующих (непатогенных) спирохет - S.buccalis,S.refringens,S.balantidis,S.pseudopallida,которые могут находится в материале, особенно если он взят из полости рта.
Отсутствие бледной трепонемы в отделяемом эрозий, язв, эрозированных папул и из периферических лимфатических узлов не исключает диагноз сифилиса.
Постановка микрореакции и КСР на сифилис с кардиолипиновым антигеном, знакомство с методиками РИФ, РИБТ, ИФА, РПГА и др.
Принцип микрореакции: при добавлении к плазме или сыворотке крови больного сифилисом эмульсии кардиолипинового антигена образуется преципитат (комплекс антиген - антитело), выпадающий в виде хлопьев белого цвета.
Возможно проведение качественную и количественную постановки микрореакции с испытуемой плазмой и инактивированной сывороткой крови. Количественный метод используется для контроля излеченности пациента, т.е. снижение титра преципитинов в 2 раза в течении одного года после лечения говорит об успешной терапии и возможности снятия больного с учета.
К моменту снятия леченного больного с учета неспецифические тесты с кардиолипиновым антигеном обычно негативируются, в то время как позитивность специфических реакций может наблюдаться долго после окончания лечения, в связи с чем эти тесты не могут служить критерием излеченности и больные снимаются с учета с положительными результатами РИТ, РИФ, ИФА, РПГА.
|
|
|
Реакции связывания комплемента (реакция Вассермана)
Принцип: реагины, находящиеся в сыворотке крови больных сифилисом, обладают свойством вступать в соединение с кардиолипиновым антигеном. Специфические антитрепонемные антитела вступают в соединение со специфическими антигенами (ультраозвученный трепонемный антиген). Образовавшиеся комплексы антиген - антитело сорбируют вводимый в реакцию комплемент. Индикация образовавшихся комплексов достигается введением гемолитической системы(гемолитическая сыворотка + эритроциты барана).
Иммуноферментный анализ.
Принцип иммуноферментного анализа заключается в соединении комплекса "антиген - антитело" с конъюгатом, содержащим ферментную метку, выявляемую с помощью субстратной смеси.
На твердофазном носителе (чаще лунки полистиролового планшета) зафиксирован антиген возбудителя сифилиса, который инкубируется с испытуемой сывороткой, плазмой крови или ликвором. При наличии в этом материале от пациентов противотрепонемных антител происходит их связывание в комплекс "антиген - антитело". Результат реакции оценивается спектрофотометрически с выводом цифровых данных, что исключает субъективность оценки, или визуально, что может быть полезным при отсутствии в лабораториях соответствующего оборудования. По такому принципу в настоящее время построено большинство ИФА тест - систем для диагностики сифилиса.
|
|
|
В зависимости от используемых антигенов все ИФА тест - системы для выявления антител подразделяются на:
1) лизатные (лизированный или обработанный ультразвуком возбудитель инфекции, полученный в культуре);
2) рекомбинантные - используются полученные генно - инженерным способом белки - аналоги определенных белковых антигенов возбудителя;
3) пептидные - использующие синтетические фрагменты белков.
Реакция пассивной гемагглютинации.
Принцип метода заключается в том, что при соединении сыворотки крови, содержащей специфические антитела, с эритроцитами, сенсибилизированными соответствующим антигеном, наблюдается их характерная агглютинация. Постановка реакции может осуществляться в пробирках или планшетах.
Реакция иммунофлюоресценции.
Принцип метода заключается в соединении специфического комплекса антиген - антитело с иммунной антивидовой сывороткой, меченной флюорохромом, и выявление его с помощью люминесцентного микроскопа.
Дата добавления: 2018-05-12; просмотров: 379; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!