Стандартизация иммунных сывороток (специфическая и удельная активность)
Сыворотки стандартизируют по показателям: общий белок, стерильность, пирогенность, токсичность, определение специфической активности, содержание хлороформа. Специфическую активность сывороток определяют в реакции нейтрализации соответствующего АГ. Также проверяют удельную активность средства на 0,1 г белка.
Определение специфической антитоксической активности
Активность (титр) сыворотки устанавливают по ее способности нейтрализовать предварительно установленную дозу яда гадюки, равную 3 LD50 (доза, вызывающая гибель 50% мышей, взятых в опыт). За одну антитоксическую единицу (АЕ) принимают количество сыворотки, которое в смеси с 3 LD50 яда защищает от гибели 50% взятых в опыт мышей.
Дозу яда гадюки устанавливают путем предварительного разведения яда на 10–20%. Четырем мышам вводят по 5–6 разведений внутривенно. За животными наблюдают в течение двух суток. Фиксируют летальность и рассчитывают LD50 яда.
Сыворотку разводят 0,9% стерильным р-р натрия хлорида и получают разведения, отличающиеся на 10–20%. Берут 0,2 мл разведения сыворотки и 0,3 мл яда гадюки и вводят внутривенно 4 белым мешам. Смесь яда и сыворотки выдерживают при 37±0,5ºС в течение 45 мин. За животными наблюдают в течение 48 ч. В качестве контроля берут три разведения яда.
Удельную активность вычисляют по формуле: УА = а × 10 / в, где а - количество АЕ в 1 мл сыворотки; в - содержание белка в процентах.
|
|
|
Билет
Интерфероны, свойства, классификация, применение в медицине. Общие биотехнологические приемы получения.
Интерфероны представляют собой класс цитокинов. Типы интерферонов (всего более 20 белков): лейкоцитарный альфа-интерферон и близкий к нему омега-интерферон (гены локализованы в 9-й хромосоме); бета-интерферон (фибробластный) и гамма-интерферон (ИНФ-g) – иммунный (Т-клеточный, ген находится в 12-й хромосоме).
Альфа-интерферон и бета-интерферон являются мощными факторами противовир., а также противоопух. иммунитета. Они блок.репликацию вирусов в клетках. Эти белки вырабатываются клетками, инфицированными вирусом, а также после стимуляции клеток лекарствами-интерфероногенами или вакцинами. Интерфероны видоспецифичны: человеческие не влияют на инфекции животных и наоборот. При стимуляции лейкоцитов вирусными и другими антигенами они выделяются в значительном количестве. Интерфероны-препараты применяют для лечения гепатитов, опухолей и других заболеваний.
Интерфероны не блокируют проникновение вируса в клетку и их противовирусный эффект является опосредованным через изменение клеточного метаболизма. Они связываются со специфическими рецепторами на мембранах инфицированных клеток и запускают синтез противовирусных белков и ферментов. Один из них, протеинкиназа, фосфорилируетрибосомальные белки, что приводит к блокаде трансляции вирусной РНК на рибосомах клетки. Продукт другого фермента, олигоаденилатсинтазы, активирует внутриклеточную латентную нуклеазу, которая расщепляет вирусную нуклеиновую кислоту.
|
|
|
Интерферон-гамма (ИНФ-g) отличается от предыдущих. Он проявляет свойства типичного интерлейкина. Этот цитокин продуцируется преимущественно Т-хелперами 1 типа, активирует различные клеточные популяции, особенно макрофаги, естественные киллеры, стимулирует превращение Тх0 в Тх1, тем самым усиливая воспалительный компонент иммунного ответа.
Гамма-интерферон усиливает синтез HLA-антигенов клетками, что приводит к ускорению процессов распознавания и переработки антигенов, адгезию лейкоцитов и моноцитов, фагоцитоз, усиливает экспрессию Fc-рецепторов на моноцитах/макрофагах и отсюда связывание ими антител.
Разработка методов получения лейкоцитарного и рекомбинантного интерферона в препаративных количествах, а также высокоэффективных методов их очистки открыла возможность применения этих препаратов в лечении вирусных гепатитов. В настоящее время выпускаются коммерческие препараты: человеческий лейкоцитарный, лимфобластный «Велферон» (Wellferon), фибробластный (Ферон); интерферон и интерфероны, полученные генно-инженерными методами: рекомбинантные альфа- (Лаферобион, Роферон, Реальдирон, Виферон, Гриппферон, Генферон, и другие), бета- и гамма-интерферон (Ингарон).
Дата добавления: 2018-04-04; просмотров: 459; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!