Клиническое значение метода Шабадаша
Увеличение содержания гликогена в нейтрофилах наблюдается при различных воспалительных процессах, эритремии, сахарном диабете, уменьшение - при агранулоцитозах, лучевой болезни, хроническом миелолейкозе, особенно при прогрессировании процесса.
Повышение числа гликогенположительных лимфоцитов (до 70 - 80 %) характерно для лимфопролиферативных заболеваний, особенно хронического лимфолейкоза.
При хроническом миелолейкозе содержание гликогена в гранулоцитах уменьшается приблизительно в 2 раза по отношению к норме, хотя общее его количество, определяемое биохимическими методами, может быть даже повышенным вследствие лейкоцитоза.
При тромбоцитопенической пурпуре и симптоматических тромбоцитопениях число гликогенположительных форм мегакариоцитов значительно снижено, после спленэктомии оно повышается до нормальных величин.
При острых лейкозах гликоген можно обнаружить в бластных клетках: при остром миелобластном лейкозе в виде мелкой зернистости в цитоплазме или в виде слабого диффузного ее окрашивания, причем в части бластов PAS-реакция отрицательная. При остром промиелоцитарном лейкозе наблюдается яркое диффузное окрашивание цитоплазмы. В монобластах реакция может быть отрицательной, слабо положительной в диффузной или диффузно-гранулярной форме (когда продукт реакции выявляется в виде рассеянных мелких или средних гранул, располагающихся по краю цитоплазмы, на диффузном фоне). При эритромиелозе гликоген в виде гранул обнаруживается в эритробластах, в виде диффузного окрашивания разной интенсивности - в нормобластах. Лимфобласты содержат гликоген в цитоплазме в виде средних и крупных гранул, располагающихся венчиком вокруг ядра, иногда сливающихся в блоки, на неокрашенном фоне. Количество клеток с таким характером PAS-реакции сильно варьирует при различных случаях острого лимфобластного лейкоза.
|
|
|
Цитохимическое исследование на гликоген можно проводить не только в мазках крови и костного мозга. Так, например, можно исследовать мазки влагалищного эпителия и по результатам исследования судить о функциональном состоянии яичников. В норме у женщин обнаруживают много гликогена в клетках, в то время как обеднение их гликогеном свидетельствует о нарушении функции яичников.
В опухолях количество гликогена различно: зрелые доброкачественные опухоли содержат много гликогена, в незрелых раковых опухолях количество гликогена резко уменьшено. Снижение гликогена в опухолевых клетках, вероятно, может быть использовано как показатель злокачественности опухоли.
ДЕГИДРОГЕНАЗЫ — группа окислительно-восстановительных ферментов, локализующихся в митохондриях цитоплазмы клеток. Для исследования различных дегидрогеназ используют метод Нахласа с соавт. в модификациях, основанный на реакции восстановления солей тетразолия и выпадения осадка диформазана в местах активности ферментов.
|
|
|
СУКЦИНАТДЕГИДРОГЕНАЗА
(СДГ; К Ф. 1.3.9.9.1). Метод Нахласа с соавт. (модификация Кваглино, Хейхо).
Принцип. Активность фермента оценивается по реакции восстановления солей тетразолия в виде осадка диформазана синего цвета.
Реактивы.
1. 60 % водный раствор ацетона.
2. 0,2 М фосфатный буфер (рН 7,4).
3. 0,2 М раствор сукцината натрия.
4. 0,6 М раствор бикарбоната натрия.
5. 0,03 М раствор хлорида алюминия.
6. 0,03 М раствор хлорида кальция.
7. Тетразолий нитро ВТ.
8. 0,1 % раствор прочного красного.
9. Инкубационная среда:
10 мл реактива № 3,
2 мл реактива № 4,
0,2 мл реактива № 5,
0,2 мл реактива № 6,
10 мг тетразолия в 10 мл дистиллированной воды, дистиллированной воды до 40 мл.
Специальное оборудование. Термостат.
Ход определения.
Свежеприготовленные и высушенные на воздухе мазки фиксируют в ацетоне при комнатной температуре 30—60 с. Промывают в дистиллированной воде и высушивают на воздухе. Инкубируют в инкубационной среде в течение 1 ч при 37 °С. Промывают дистиллированной водой. Докрашивают 0,1 % раствором прочного красного 10 мин.
Дата добавления: 2015-12-17; просмотров: 13; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!