Метод Нахласа с соавт. (модификация Р. П. Нарциссова).
Принцип тот же.
Реактивы.
1. 60 % раствор ацетона, насыщенный трилоном Б.
2 1 /15 М фосфатный буфер (рН, 7,2). (0,0044М)
3. Сукцинат натрия.
4. Пара-нитротетразолий фиолетовый.
5. Трилон Б.
6. 0. 5 % раствор метилового зеленого на ацетатном буфере (рН 5,0).
7. Инкубационная среда: 540 мг сукцината натрия растворяют в 10 мл дистиллированной воды, добавляют 10 мл буферного раствора (реактив № 2) и 10 мл раствора пара-нитротетразолия в дистиллированной воде(1 мг/мл), 13мгтрилонаБ (рН довести до 7,2) и дистиллированной воды до 40 мл.
Среда может быть пригодна 1—2 нед при хранении в холодильнике.
Специальное оборудование.
1. Термостат или водяная баня.
2. Холодильник.
Ход определения.
Фиксируют мазки ацетоном (реактив № 1) при комнатной температуре в течение 30 с. Ополаскивают дистиллированной водой 3—5 с и высушивают. Инкубируют в инкубационной среде в течение 1 ч при 37 °С. Промывают проточной водой в течение 1 мин. Ополаскивают дистиллированной водой 3—5 с. Докрашивают метиловым зеленым 5—10 мин. Промывают в проточной воде. Дополнительно фиксируют мазки парами формалина в течение 30 мин (для предотвращения растворения формазана нитротетразолия фиолетового в иммерсионном масле).
А-ГЛИЦЕРОФОСФАТДЕГИДРОГЕНАЗА (а-ГФДГ).
Метод Нахласа с соавт. (модификация Р. П. Нарциссова).
Дата добавления: 2015-12-17; просмотров: 12; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!