Метод азосочетания (модификация М. Г. Шубина).
Реактивы.
1. 0,5 % раствор целлоидина в смеси равных количеств абсолютного спирта и эфира.
Целлоидин можно готовить из кино и фотопленок по методике Меркулова: удалить слой эмульсии после вымачивания в горячей воде или щелочи, выдержать 5—10 дней в трех сменах хлороформа, промыть спиртом, высушить, мелко нарезать и растворить в смеси абсолютного спирта с эфиром.
2. 0,5 М раствор тетрабората рН 9,18 [19,1 г тетрабората натрия (бура) растворить и довести дистиллированной водой до 1 л]. Раствор стойкий.
3. 0,1 % раствор а-нафтилфосфата в растворе тетрабората (готовят перед употреблением).
4. 0,2 % раствор диазоля синего 0 в растворе тетрабората (готовят перед употреблением и фильтруют в защищенном от света месте).
5. Гематаль 8 Бейкера: один объем 0,1 % гематеина, приготовленного на 50 % водном растворе этиленгликоля, смешивают с одним объемом 1,6 % водного раствора сульфата алюминия. Вместо гематаля можно использовать гематоксилин: 1 г краски растворяют в 50 мл дистиллированной воды, доводят до кипения, доливают 50 мл дистиллированной воды, добавляют 0,02 г йодата натрия и 5 г алюмокалиевых квасцов, встряхивают до растворения и охлаждают.
6. Инкубационная среда (готовят перед употреблением); равные количества реактивов 3 и 4.
Специальное оборудование.
Холодильник.
Ход определения.
Мазки фиксируют в 0,5 % растворе целлоидина в течение 3—5 с. После фиксации целлоидин с обратной стороны предметного стекла удаляют салфеткой, стекла ставят в вертикальном положении на фильтровальную бумагу и дают им высохнуть. Инкубируют в инкубационной среде при комнатной температуре в защищенном от света месте в течение 30 мин. Промывают в проточной воде в течение 5—10 мин и ополаскивают в дистиллированной воде. Докрашивают ядра красителем (реактив 5). При использовании гематаля 8 мазки окрашивают 18—24 ч, затем ополаскивают в дистиллированной и проточной воде и высушивают. При использовании гематоксилина мазки окрашивают 30—60 мин, ополаскивают в тетраборатном буфере, разведенном водопроводной водой, промывают водой и высушивают.
|
|
|
Дата добавления: 2015-12-17; просмотров: 8; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!