Цитохимическое выявление гликогена по методу Шабадаша.
Локализуется в цитоплазме клеток и играет важную роль в энергетическом метаболизме клеток. При цитохимическом исследовании гликогена используют главным образом PAS - или ШИК-реакцию (по названию реактивом шифф -йодная кислота).
Метод Щабадаша.
Принцип. Под влиянием перйодата калия гликоген окисляется с образованием альдегидных соединений, легко реагирующих с реактивом Шиффа (фуксин-сернистая кислота).
Результат. В местах локализации гликогена выявляется вишнево-фиолетовое окрашивание.
Реактивы.
1. 0,03 М раствор перйодата калия или натрия: 230 мг периодата растворяют в 100 мл дистиллированной воды. Готовят перед употреблением.
2. 1 н. НСl соляной кислоты: 82,5 мл концентрированной НСI отн. плотности 1,19 доливают дистиллированной водой до 1 л.
3. Реактив Шабадаша. К 100 мл этилового спирта добавляют 1,8 г нитрата меди (CuNO3), 0.9 г нитрата кальция [Ca(NO3)2] и 10 мл формалина
4. Метабисульфит калия.
5. Реактив Шиффа
6. Сернистая вода: к 10 мл 10 % раствора метабисульфита калия добавляют 200 мл дистиллированной воды и 10 мл 1 н. НСI. Готовят перед употреблением.
7. 0,1 % спиртовой раствор светло-зеленой краски (лихтгрюн).
Специальное оборудование: Горелки. Термостат. Весы.
Ход определения.
1. Препараты фиксируют (тотчас после приготовления) в реактиве Шабадаша в течение 30 мин.
2. Промывают в двух сменах дистиллированной воды.
3. Погружают в раствор перйодата на 20 мин (в темноте).
4. Промывают в трех сменах дистиллированной воды.
5. Ополаскивают в сернистой воде (в течение 1-2 мин).
6. Окрашивают реактивом Шиффа в течение 30—40 мин (в темноте).
7. Промывают в трех сменах сернистой воды по 3 мин.
8. Промывают в трех сменах дистиллированной воды по 3 мин.
9. Окрашивают светло-зеленой краской в течение 10—20 с.
10. Промывают в дистиллированной воде.
Дата добавления: 2015-12-17; просмотров: 18; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!