Выявление пероксидазы (метод Грахама-Кнолля).
Фермент, разрушающий перекись водорода, образующийся в клетке в процессе жизнедеятельности. Токсичная для клеток перекись водорода обезвреживается, освобождающийся при участии пероксидазы кислород вновь используется клеткой.
Ход реакции: фиксированные мазки крови или костного мозга заливают бесцветным раствором бензидина или ортотолидина, предварительно добавив к нему каплю 3% перекиси водорода. Если в клетке содержится пероксидаза, то перекись водорода превращается в воду с выделением кислорода. Высвободившийся кислород окисляет.бензидин и приводит его в окрашенное соединение. При использовании бензидина цитоплазма клеток, содержащих пероксидазу, окрашивается в желтый цвет.
Результат: при наличии активности пероксидазы в цитоплазме присут-ствуют желто-коричневые гранулы. В клетках нормального гранулоцитарного ряда -положительная реакция, в лимфацитах - отрицательная, в моноцитх -отрицательная или слабоположительная.
Применение: при дифференциальном диагнозе цитологического вида острого лейкоза. Реакция полезна при ранней диагностике предлейкозного состояния.
3) Цитохимическая реакция на полисахариды (гликоген). Энергетические потребности клетки обеспечиваются гликогеном. Сложные метаболические процессы, связанные с расщеплением и ресинтезом гликогена под воздействием различных патологических процессов, могут извращаться.
|
|
|
Ход реакции: под воздействием реактива Шиффа, в состав которого входит фуксин, в цитоплазме клеток появляются красные или фиолетово-красные зерна, указывающие на присутствие гликогена. После проведения ШИК-реакции и докраски гематоксилином все клеточные элементы хорошо дифференцируются. Ядра нейтрофилов окрашиваются в синий цвет, в их цитоплазме определяется мелкая красная зернистость гликогена, образующая сплошной красный фон. Степень окраски цитоплазмы различная. В лимфо-цитах гликоген определяется в виде сравнительно крупных красных не сливающихся между собой зерен. Их количество зависит от ширины пояса, образованного цитоплазмой вокруг ядра. Для уточнения характера малых лимфоцитов с тонким ободком цитоплазмы необходимо пристальное микроскопирование.
Значение: ШИК-реакции велико только у нейтофилов и лимфоцитов, т.к_ моноциты и эозинофилы из-за ярко-розовой цитоплазмы не дают нужной картины.
Результат: гранулы гликогена в гранулацитах окрашиваются в багряно-красный цвет.
Применение:а) при дифференциальной диагностике отдельных видов острой лейкемии;б) в целях постановки диагноза и наблюдения за ходом лечения при хронической лимфолейкемии;в) для дифференцировки клеток Гоше.
Дата добавления: 2015-12-17; просмотров: 14; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!