Клиническое значение.
Снижение активности ферментов в лимфоцитах отмечено в период приступа бронхиальной астмы, при хроническом лимфолейкозе. Повышение активности ферментов обнаружено у больных злокачественными опухолями в гранулоцитах, снижение активности — при хроническом миелолейкозе.
КИСЛАЯ а-НАФТИЛАЦЕТАТ-ЭСТЕРАЗА.
Фермент локализуется главным образом в лизосомах цитоплазмы клеток и участвует в гидролизе алифатических эфиров.
Принцип.
Соединения альфа-нафтилацетата при кислом рН под влиянием фермента образуется свободный нафтол, дающий цветное окрашивание с фуксином.
Реактивы.
1. 2,5 % раствор глутаральдегида (рН 7,2).
2. 4 % раствор солянокислого фуксина.
3. 4 % раствор нитрата натрия.
4. 0,7 фосфатный буфер (рН 5,0).
5. a-Нафтилацетат. 6. 2 % раствор метилового зеленого.
7. Инкубационная среда: 2 мл реактива № 2, 2 мл реактива № 3, 40 мл реактива № 4. 10 мг a-нафтилацетата, растворенного в 0,4 мл ацетона. Инкубационная среда должна иметь рН 5,8 и готовиться перед употреблением.
Специальное оборудование.
1.Холодильник.
2. Весы.
З. Эксикатор.
Ход определения. Высушенные на воздухе мазки фиксируют в глутаральдегиде (реактив №1) при температуре 4 °С в течение10 мин (нефиксированные мазки можно хранить холодильнике 1—2 мес.). Промывают дистиллированной водой. Инкубируют в инкубационной среде в течение 1,1/2-6 ч. Промывают дистиллированной водой. докрашивают метиловым зеленым.
Дата добавления: 2015-12-17; просмотров: 12; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!