Возбудитель инфекционного мастита коров

Возбудитель инфекционного мастита – Streptococcus agalactiae

Патогенность. Вирулентность маститного стрептококка непостоянна. Наиболее вирулентные стрептококки содержатся в гнойном экссудате из вымени коров, больных острым маститом. При внутрибрюшинном введении такого экссудата мышам в дозе 0,1–-0,2 мл они гибнут в течение суток, а из крови их сердца выделяется культура гемолитического стрептококка. Выраженные на питательных средах, особенно без крови, культуры этого микроорганизма слабо вирулентны. Культуры стрептококка, выделенные при хроническом течении мастита, менее вирулентны, культуры 2–3 раза пересеянные на простые питательные среды, авирулентны.

Устойчивость. Во внешней среде маститный стрептококк значительно устойчив, в высушенном гнойном экссудате сохраняется 2–3 мес. В молоке погибает при нагревании до 85 °С, влечение 30 мин, при воздействии 2 %-ного раствора едкого натра, 1 %-ного раствора формалина гибнет за 10–15 мин. Замораживание консервирует его. К пенициллину стрептококк довольно устойчив, что объясняется широким применением его в последние годы для лечения мастита и появлением устойчивых рас возбудителя. Чувствителен к окситетрациклину, полимиксину, особенно в сочетании с сульфадимезином.

Иммунитет. Иммунитет подвержен значительным колебаниям. В одном и том же стаде одни животные болеют, другие остаются здоровыми. Постинфекционный иммунитет непродолжительный и недостаточно напряженный. Он обусловлен антитоксическими и антибактериальными факторами.

Патогенез обусловлен воздействием на ткани вымени и всего организма стрептококковых токсинов и ферментов.

Стрептококки, размножаясь на слизистых оболочках, вызывают катарально-гнойное воспаление. Проникая вглубь тканей, обусловливают нагноительные процессы. Патогенез мастита тесно связан с послеродовый эндометритом, так как из воспаленной после родов матки стрептококки гематогенным путем проникают в вымя и вызывают мастит.

Диагностика. Материалом для исследования служит молоко коров, больных маститом. Берут его из воспаленных долей (первые порции сдаивают в отдельную посуду и уничтожают) в стерильные пробирки с пробками и тут же отправляют в лабораторию. При необходимости молоко консервируют замораживанием. Из молока готовят мазки, окрашивают фуксином, по Граму или Романовскому. Под микроскопом обнаруживают стрептококки, лейкоциты и продукты воспаления. Высевы производит на МПА, МППА и на кровяной агар. Выросшие колонии с кровяного агара пересевают для дифференциации. Одновременно внутрибрюшинно заражают молоком в дозе 0,5 мл двух молодых мышей, после гибели их вскрывают и из крови сердца делают высевы на МПА; выросшие культуры дифференцируют. Путем постановки биопробы удается выделить чистую культуру возбудителя мастита.

Streptococcus pyogenes

Гноеродный стрептококк.S.pyogenes вызывает у животных абсцессы, артриты, флегмоны, эндометриты, а также септицемию. Возникновению гнойных процессов способствуют пониженная сопротивляемость организма, несвоевременная хирургическая обработка ран, несоблюдение правил асептики и антисептики, излишнее травмирование тканей при исследовании ран, гиповитаминозы и авитаминозы.

При бактериологическом исследовании материала (гнойный экссудат ран, абсцессов, асептически взятый экссудат, кровь – при подозрении на септицемию) готовят мазки. Для выделения чистой культуры Str. pyogenes проводят посев на питательные среды.

Глава 13. ГРАМПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ
НЕСПОРООБРАЗУЮЩИЕ БАКТЕРИИ

13.

Возбудитель эризипелоидоза

Рожа свиней – септическое антропозоонозное инфекционное заболевание, характеризующееся геморрагическим гастроэнтеритом, нефритом, кровоизлияниями на серозных и слизистых оболочках, увеличением селезенки. При несвоевременной запоздалой диагностике и принятии мер, многие животные погибают.

Возбудитель рожи свиней– Erysipelothrix rhusiopathiae, открыт Пастером в 1882 г. Его обнаруживают у свиней, мышей, ягнят, телят, индеек, уток, рыб, а также человека.

Морфология и тинкториальные свойства. Е. rhusiopathiae – полиморфная, короткая палочка размером 0,2–0,3x0,5–1,5 мкм, располагается одиночно и цепочками. Неподвижна. Спор и капсул не образует. По данным электроноскопических исследований, в лизирующейся клетке видны протоспоры. Бактерии размножаются перешнуровыванием с образованием гетероморфных клеток. В старых культурах, а также в мазках из разращений эндокарда, из мозговых оболочек Е. rhusiopathiae образует длинные, извилистые нити или клубки. В мазках из почек, печени, селезенки бактерии располагаются одиночно, парно или небольшими гнездами. Обнаруживают также и фагоцитированные бактерии.

Микроб хорошо окрашивается обычными анилиновыми красками, грамположительный.

Культивирование. Е. rhusiopathiae – микроаэрофил. Неприхотлив к питательным средам. Культивируется на ПМБ, МПА, МПЖ, молоке, полужидком агаре (МПБ с 0,05–0,15 % агара), кровяной сыворотке, средах с углеводами, элективной среде Сент-Иваньи (агаровая среда, содержащая 0,1 % кристаллвиолета и 1 % азида натрия). Рост на питательных средах с рН 7,2–7,6 наблюдается при оптимальной температуре 37 °С уже через сутки в аэробных и микроаэрофильных условиях. На бульоне появляется слабое помутнение, незначительный сероватый осадок; на агаре колонии мелкие, нежные, прозрачные в виде капелек росы; на желатине при посеве уколом через 6–10 дней от серовато-белого стержня отходят горизонтальные, нежные, бахромчатые отростки, напоминающие собой форму ламповой щетки. Желатин не разжижает.

Биохимические свойства. Микроб ферментирует с образованием кислоты лактозу, глюкозу, левулезу, галактозу, в слабой степени ксилозу, а иногда арабинозу, мальтозу и рамнозу.

Патогенность. Рожистая бактерия широко распространена в животном мире. В естественных условиях патогенна для свиней, ягнят, индеек, кур, уток, голубей. Ее встречают у ворон, воробьев, дроф, фламинго и других птиц, у тюленей, дельфинов, а также у иксодовых клещей и млекопитающих зоопарка – белок, пятнистых оленей. Для речных и морских рыб рожистая бактерия является сапрофитом. К рожистой бактерии восприимчив и человек, у которого наблюдается эрисипелоид в форме местного (чаще на ладонях, кистях рук, суставах запястья) серозного воспаления кожи с расширением лимфатических ходов без некроза. К экспериментальному подкожному заражению восприимчивы особенно белые мыши и голуби, которые гибнут спустя 2–5 дней, менее чувствительны кролики, которые после внутривенного заражения гибнут через 3–6 дней.

Устойчивость. Несмотря на то, что Е. rhusiopathiae не образует спор, она весьма устойчива к внешним воздействиям. Жизнеспособность ее в жидких средах в запаянных ампулах сохраняется до 17–35 лет, в загнившем трупном материале – месяцами, в речной воде – до 73 дней, моче – до 203, фекалиях – до 94, в почвенной взвеси – до 108 дней. Высушивание выдерживает до трех недель.

Однако нагревание убивает рожистую бактерию уже при 50 °С через 15 мин, а при 70 °С – через 5 мин. Но при варке толстых кусков мяса бактерия гибнет лишь через 2,5 ч. Переживает в течение зимы. Жарение и тушение не стерилизуют мясо от рожистой бактерии. Бактерию находили в копченой свинине через 90, а в солонине – через 170 дней после изготовления. Обычные дезинфицирующие растворы эффективны. Чувствительна к УФ-лучам.

Антигенная структура. Рожистая бактерия содержит два антигена: термолабильный групповой и термостабильный видовой. На основании серологических исследований (реакции преципитации, агглютинации, гемагглютинации) установлено два серовара. Серовар А для свиней более вирулентен, а серовар В менее вирулентен. Серовар А выделяется в культурах от больных рожей свиней наиболее часто (до 95 %). Общим видовым является антиген N.

Иммунитет. Переболевшие рожей свиньи приобретают стойкий и длительный иммунитет.

Патогенез. Возбудитель рожи проникает в организм животного различными путями. При пероральном заражении бактерии первоначально оседают в миндалинах и солитарных фолликулах кишечника, а при заражении через кожные царапины – в лимфатических щелях пораженного участка, вокруг которого возникает местный воспалительный процесс. Через несколько дней микробы преодолевают защитные барьеры, проникают в кровь, размножаются в ней и распространяются по организму. Септический процесс вызывает лихорадочную реакцию, нарушение тканевого обмена, дистрофические и некротические изменения в паренхиматозных органах и сердечно-сосудистой системе, что ведет к образованию тромбов, отеков и к летальному исходу.

При хорошо выраженной реактивности животного организм организует действенную защиту против возбудителя, который своими агрессинами тормозит в начале заболевания противодействие лейкоцитов и макрофагов РЭС, и, хотя они фагоцитируют микробов, лизиса последних не наступает (незавершенный фагоцитоз). С появлением агглютининов, преципитинов и комплементсвязывающих веществ, антиагрессинов сочетанное действие фагоцитоза с антителами приводит к ликвидации возбудителя.

Патологоанатомические изменения. Картина вскрытия трупов, павших при остром и подостром течении рожи, типична для септицемии. Ярко выражена застойная гиперемия всех внутренних органов. В грудной, перикардиальной и брюшной полостях находят серозный экссудат с беловатыми нитями фибрина. Лимфоузлы увеличенные, красноватые, иногда фиолетово-красные. Легкие полнокровные, отечные. В трахее и бронхах – пенистая жидкость. Сосуды сердца переполнены кровью, на эпикарде мелкие кровоизлияния. Селезенка вишнево-красная, несколько увеличенная. Почки темно-вишневые, иногда с кровоизлияниями под капсулой. При хроническом течении рожи на поверхности клапанов сердца можно обнаружить красновато-серые разращения, напоминающие цветную капусту (веррукозный эндокардит).

Диагностика. Бактериологический диагноз включает бактериоскопию, выделение культур и биопробу. В лабораторию направляют кусочки селезенки, печени, почку, трубчатую кость, кусочки кожи (при крапивнице), сердце (при эндокардите), невскрытые суставы (при артритах). Патологический материал консервируют 30–40 %-ным глицерином или насыщенным раствором NaCl. Трубчатую кость, очищенную от мышц и сухожилий, обертывают марлей, смоченной 2 %-ным раствором карболовой кислоты.

Из свежего патматериала готовят мазки, окрашивают их по Граму и микроскопируют. В мазках обнаруживают грамположительные бактерии, расположенные одиночно и группами, внутри и вне лейкоцитов, а в мазках-отпечатках с поверхности сердечных клапанов при эндокардите – сплетения микробных нитей. Загнивший материал непригоден для бактериоскопии.

Культуры рожистой бактерии выделяют из селезенки, почки, а если материал несвежий, то из мозга трубчатых костей, лимфоузлов, а также из пораженных участков кожи.

Материалом для заражения лабораторных животных (биопроба), которые гибнут через 3–5 дней, служит эмульсия из паренхиматозных органов на стерильном физрастворе. Из загнившего трупа берут кусочки кожи или мозг из трубчатых костей. Заражают в основном голубей, так как в загнившем материале может быть В. murisepticus, патогенный для белых мышей.

Серологическая диагностика. Для выявления хронических и латентных форм рожи используют реакцию агглютинации в двух модификациях: пластинчатый (ускоренный) с сывороткой или цельной кровью исследуемого животного и пробирочный способ с исследуемой сывороткой.

Для постановки РА необходимо два компонента: антиген и исследуемая сыворотка или кровь. Срок годности антигена – шесть месяцев, при хранении в темном сухом помещении при температуре от 8 до 15 °С.

Пластинчатую реакцию ставят на обезжиренном и досуха протертом стекле. Из полученной пробы берут каплю крови (величиной 0,004–0,006мл) или сыворотки (0,002–0,003 мл), наносят ее на предметное стекло в каплю антигена и перемешивают. Затем стекло с нанесенными каплями (антиген + кровь или сыворотка) держат над спиртовкой, слегка подогревая, кругообразно покачивают. Реакцию учитывают над темным фоном. Положительной реакцией считается образование в течение 1–2 мин. от периферии к центру капли макроскопически хорошо заметных мелких или крупных серовато-белого цвета хлопьев или крупинок. При неполном выпадении реакцию считают сомнительной.

В пробирке реакцию ставят с разведением сыворотки 1 : 50 и 1 : 100.

Следует учитывать, что агглютинины у свиней появляются на 2–5-й день болезни и сохраняются в крови выздоровевших животных 2–3 недели. После вакцинации свиней РА с диагностической целью можно ставить не ранее чем через 2 месяца, а после прививки противорожистой сыворотки – через 1 месяц.

Для обнаружения рожистых бактерий в патологическом материале, а также для идентификации чистых выделенных культур можно применять метод флуоресцирующих антител.

Профилактика рожи свиней осуществляется путем создания активного (вакцинного) или пассивного (сывороточного) иммунитета.

Возбудитель листериоза

Листериоз – болезнь, протекающая с признаками поражения центральной нервной системы, абортами, маститами, септицемией.

Подобно бешенству значение листериоза связано не столько с вызываемыми им хозяйственными потерями, сколько с опасностью заражения человека. Наибольшей опасности подвергаются беременные женщины, их плод и новорожденные, а также лица с ослабленной иммунной системой. Смертность при некоторых формах листериоза, несмотря на активную антибиотикотерапию, достигает 90–100 %.

Возбудитель болезни – Listeria monocytogenes – относится по принятому систематическому делению к группе патогенных микроорганизмов рода Listeria.

Морфология. Листерии являются мелкими полиморфными Гр+ палочками, располагающимися одиночно, парами, реже короткими цепочками. Листерии подвижны. У них обнаруживается длинный полярный жгутик. Ширина микроорганизмов колеблется от 0,3 до 0,5 мкм и длина от 0,8 до 2 мкм.

Окраска по Граму свойственна преимущественно молодым культурам. Старые же культуры, по данным многих авторов, Гр«–» или же при окраске становятся неопределенными.

Культивирование. Листерии – строгие аэробы, спор они не образуют. На МПА L.monocytogenes растет в виде мелких беловатых с перламутровым оттенком колоний при падающем свете и просвечивающихся, голубоватых – при проходящем свете. Обычно колонии листерий имеют S-форму. Только при длительном культивировании и ослаблении вирулентности появляются R-колонии.

На агаре при pН-5,8 листерии дают жирный слизистый шарик с беловатым оттенком. Желатину они не разжижают. На МПБ микроорганизм растет первоначально в виде нежного помутнения с легкой опалесценцией. В старых культурах он образует вязкий, плотно пристающий ко дну пробирки осадок, который после быстрого вращения пробирки поднимается «косичкой», а при сильном встряхивании разбивается и превращается в равномерную муть.

Таблица 7. Основные свойства листерий на основании изучения 56 штаммов L.monocytogenes.

Показатели	Особенности культур листерии
Морфологические особенности	Полиморфные, Гр.»+» палочки, иногда имеющие форму овоидов и кокков. Часто расположены одиночно или парами. Редко образуют цепочки. Длина колеблется от 0,8 до 4 мкм.
Подвижность	Обычно микробные клетки подвижны в молодых культурах на жидких питательных средах, выращенных при комнатной температуре. У некоторых штаммов микробные клетки очень быстро теряют жгутики и лишаются подвижности.
Поверхностные колонии листерий на твердых питательных средах	Обычно гладкие, прозрачные, голубоватые при проходящем свете и серовато- беловатые с перламутровым оттенком при падающем свете. Вирулентные штаммы имеют S-форму, авирулентные – R-форму колонии.
Гемолиз на кровяном кроличьем агаре	Образуют L-зону гемолиза.
Рост на желатине	Желатину не разжижают. Рост по уколу через 10 дней дает перпендикулярное разрастание в глубину желатины. Глубинные колонии чечевицеобразные.
Рост на МПБ	Через 18–24 часа равномерное помутнение. Некоторые штаммы образуют поверхностную пленку. Через 5–10 и более суток на дне пробирки образуется осадок.
Рост на бульоне с глюкозой	Некоторые штаммы дают гранулярный рост и обычно не образуют слизистого природного осадка.
Лакмусовое молоко	Медленное кислотообразование без свертывания
Биохимические особенности	Образуют кислоту без газа через 18–24 ч. на глюкозе, левулезе, мальтозе, салицине, декстрине. Медленное кислотообразование на лактозе и сахарозе. На манните, сорбите, дульците, арабинозе кислоты и газа не образуют. Биохимические свойства не постоянны.
Температурный opt. и min.	Наилучший рост на жидких и твердых питательных средах находится в пределах от 20 до 37 °C. Opt. в пределах 35–37 °C. Медленно растут при 4–10 °C.
Серологические особенности	Имеются 1,2,3 и 4 серотипы (по Петерсону) и особый серотип Listeria infantiseptica.Они имеют значительную антигенную вариабельность, определяемую комбинацией 6 О- антигенов и жгутиковых N- антигенов.
Вирулентность	Большинство штаммов являются вирулентными для белых мышей.

Токсинообразование. Листерии выделяют в культуральную жидкость термолабильный гемолизин, который в результате активации его цистеином вызывает гемолиз эритроцитов голубя, кролика, морской свинки, лошади, а также липолитический фактор, вызывающий цитолиз культуры макрофагов. При распаде из микробных клеток освобождается эндотоксин, который и обусловливает характерные изменения у животных и людей.

Антигенная структура. Листерии представлены двумя основными серотипами: «грызунов» и «жвачных». Они имеют соматические О- и жгутиковые Н-антигены. О-антиген содержит 4 термолабильных (I, II, IV, V) и вариабельный (III) антигены; Н-антиген содержит антигены А, В, С, D.

Патогенез. Листерии в организм проникают различными путями. Наиболее вероятными путями заражения листериоза в естественных условиях являются заражение через слизистую оболочку носовой и ротовой полостей, конъюнктиву, пищеварительный тракт, дыхательные пути и поврежденную кожу.

Как показали многочисленные эксперименты, от способа заражения зависят пути распространения листерий по организму, а также формы течения болезни. Листерии могут обусловить возникновение носительства, развитие местных процессов и сепсиса. Возникновение той или иной формы болезни зависит, с одной стороны от вирулентности микроба, инфицирующей дозы, путей заражения, с другой стороны от возраста животных, беременности, характера кормления и содержания, сопутствующих заболеваний.

Листерии, попавшие в организм животного, обезвреживаются и выводятся из него или получают возможность к размножению и распространению по организму. О путях распространения листерий в организме существует несколько точек зрения.

Кроме нейрогенного пути распространения листерий в организме нельзя исключить возможность распространения лимфогенным и гематогенным путями.

В начале листерии локализуются в лимфатических узлах, где отмечаются сосудистые нарушения, активация клеток мезенхимы. Затем листерии можно уже выделить из крови и паренхиматозных органов; причем в них отмечаются сосудистые нарушения, дистрофические изменения. Начиная с 3 дня после заражения нарушается гематоэнцефалический барьер и листерии проникают в центральную нервную систему.

Основным местом размножения листерий является кровь. Менингоэнцефалит рассматривается как одна из форм проявления листериоза, следующая за септическим процессом.

Ряд данных заставляет считаться и с гематогенным путем распространения возбудителя, а также с латентным пребыванием его в различных органах, в том числе и в мышцах.

У взрослых животных в силу их высокой общей сопротивляемости листериозный сепсис возникает редко, чаще у них поражается ЦНС, а в период беременности – половая система. У молодняка вследствие низкой общей устойчивости развивается сепсис, а затем генерализованный гранулематоз. В некоторых случаях заболевание протекает бессимптомно, при этом животные длительное время остаются носителями листерий.

Листериоз в последние годы причисляют к типичным сапронозам, считая первичным природным очагом листерий почву, оттуда они могут попадать в растительные субстраты. Источником заражения сельскохозяйственных животных служат корма, в частности, силос, где листерии активно размножаются и неопределенно долго существуют.

Заражение людей связано с употреблением в пищу овощей, а также продуктов животноводства. Все это заставляет предположить возможность существования листерий в организме растений, куда они могут проникать из почвы, однако доказательства этого отсутствуют. Роль грызунов, птиц и других диких животных, как переносчиков листерий, установлена многими исследователями. Листерии обнаружены не только у теплокровных животных, но и у амфибий и рыб. По мере изучения этого вопроса значительно возрастает число видов животных и птиц, которые являются листерионосителями. Листерии обнаружены у значительного числа видов насекомых: клещей, блох, вшей, мух. Установлено естественное носительство листерий 8 видами иксодовых клещей, 5 видами блох, 1 видом гамазовых клещей, 1 видом аргасовых клещей и 1 видом вшей.

Свободно живущие клещи являются постоянным компонентом природных биоценозов и обитают в тех же экологических средах, в которых обнаружены и листерии.

Исследования показали, что силосная масса плохого качества интенсивно заселена свободно живущими клещами. Гниющая растительность почвы служит клещам одновременно и кормовым субстратом и основной средой их размножения.

Учитывая капрофильность клещей и способность их питаться мышцами трупов животных, изучена их способность воспринимать листерий из среды обитания. В качестве сопутствующей микрофлоры у клещей, обитающих в силосе, выделены дрожжи, плесневые грибы, актиномицеты и спорообразующие аэробы.

Клинические признаки. Инкубационный период 7–30 дней. Течение болезни острое, подострое, хроническое. Болезнь проявляется в нескольких клинических формах: нервной, септецемической, смешанной, стертой, бессимптомной, а так же с поражением половой системы и молочной железы.

Патологоанатомические изменения. При нервной форме болезни обнаруживают инъекцию сосудов и отек мозга, кровоизлияния в мозговой ткани и в отдельных внутренних органах. При гистологическом исследовании отмечают менингоэнцефалит. При септицемической форме регистрируют гиперемию или отек легких, катар слизистых оболочек пищеварительного тракта, кровоизлияния в сердечной мышце и в паренхиматозных органах, увеличение селезенки, дегенеративные изменения и некротические очаги в печени, селезенке, почках, миокарде; увеличение лимфатических узлов. При поражении половых органов у самок обнаруживают эндометрит или метрит.

Диагностика. Лабораторная диагностика листериоза осуществляется, как правило, бактериологическими и серологическими методами.

Для бактериологического исследования посылают свежий труп мелкого животного или паренхиматозные органы и голову, от трупов крупных животных (лошадь, крупный рогатый, скот, овца) – головной мозг и кусочки паренхиматозных органов, а в случае аборта – абортированный плод или его органы; при наличии мастита – пробы молока из пораженных долей вымени.

Бактериологическое исследование включает обычную микроскопию препаратов-отпечатков, окрашенных по Граму, и люминесцентную микроскопию с применением флюоресцирующей сыворотки. Посевы для выделения культуры производят из всех присланных тканей н органов на МПА, МПБ, МППБ, МППА с 1 % глюкозы и 2–3 % глицерина, переваром Мартена. Заражают морских свинок, белых мышей, голубей.

Биопроба. К листериозу восприимчивы белые мыши (массой не менее 18,0), морские свинки и голуби. Заражают их подкожно выделенной культурой или взвесью растертой ткани органов, присланных в лабораторию. Однако у морских свинок для заражения часто пользуются конъюнктивальной пробой: на конъюнктиву глаза наносят две капли испытуемой культуры, затем слегка массируют веки ватным тампоном. Вирулентные штаммы листерий на 2–4-й день вызывают гнойный кератоконъюнктивит. При подкожном заражении инъецируют суспензию тканей органов в дозе 0,3–0,5 мл. Обязательно используют суспензию головного мозга. При положительной биопробе животные гибнут через 2–6 суток. Для повышения эффективности биопробы белым мышам за 2–3 ч. до заражения внутри-брюшинно в дозе 5 мг вводят кортизон. При вскрытии обнаруживают множественные некротические очажки в печени, селезенке, почках. Срок наблюдения за зараженными животными – 8 суток (если не погибнут раньше).

Паренхиматозные органы павших животных исследуют бактериологически. Выделенную чистую культуру идентифицируют. Для идентификации культуры используют также серологический метод – РА на стекле со специфической антилистериозной сывороткой в разведении 1 : 50. Антигеном в реакции служит суспензия (смыв с агара) суточной культуры на физиологическом растворе (около 10–15 млрд. микробных тел в 1 мл). На чистое обезжиренное предметное стекло наносят одну каплю поливалентной сыворотки и отдельно каплю физиологического раствора; к ней добавляют одну каплю антигена, быстро перемешивают бактериологической петлей или запаянным концом пастеровской пипетки, затем плавно покачивают круговыми движениями. Учет в течение трех минут. Положительный результат – появление хлопьев в капле с сывороткой, отрицательный – в контроле (в капле с физиологическим раствором без сыворотки) равномерное помутнение без хлопьевидного агглютината. Запоздалую реакцию не учитывают. Серотип идентифицируется при использовании типовых сывороток. Видовую принадлежность возбудителя устанавливают также просматриванием препаратов-мазков из культуры или непосредственно из патологического материала, обработанных флюоресцирующей специфической сывороткой.

Для серологической диагностики направляемые в лабораторию пробы крови (или сыворотки) от животных из хозяйств со специфическим антигеном исследуют методом РСК.

Профилактика. Сухая живая вакцина против листериоза сельскохозяйственных животных из штамма АУФ представляет собой культуру лиофильно высушенного аттенуированного штамма листерий первого серотипа.

Псевдомонады

Синегнойная палочка

Синегнойная палочка (Pseudomonas aeruginosa) – основной возбудитель инфекционных поражений человека, вызываемых псевдомонадами. Синегнойную палочку впервые описал А. Люкке (1862), чистую культуру бактерий выделил П. Жессар (1882). Она отнесена к семейству Pseudomonadaсеае, роду Pseudomonas. Начиная с 70-х годов P. aeruginosa – один из основных возбудителей локальных и системных гнойно-воспалительных процессов.

P. aeruginosaраспространена повсеместно; ее выделяют из почвы, воды, растений и животных (водных или обитающих в ареалах).

Морфологические и тинкториальные свойства. Средние размеры синегнойной палочки 1–3 × 0,5–1 мкм; в нативных препаратах бактерии подвижны (имеют один или два полярных жгутика). В мазках чистых культур палочки расположены одиночно, попарно либо в виде коротких цепочек. В мазках из патологического материала их чаще можно обнаружить в цитоплазме фагоцитов, при этом палочки могут деформироваться. Поверхность бактерий покрыта микроворсинками; кроме того, P . aeruginosa синтезирует слизистое вещество, покрывающее тонким слоем микробную клетку. Более вирулентные, так называемые мукоидные штаммы,секретируют это вещество наиболее интенсивно, что дает основание рассматривать слизь как фактор патогенности.

Культивирование. Синегнойная палочка растет в широком диапазоне температур (4–42 °С), что указывает на способность длительно сохраняться в окружающей среде и противостоять защитному действию повышения температуры тела. Отличительная особенность микроорганизма – ограниченная потребность в питательных веществах, обеспечивающая сохранение жизнеспособности в условиях почти, полного отсутствия источников питания. Микроорганизм хорошо растет на простых питательных средах в аэробных условиях при температуре 30–37 °С, а также и при 42 °С, что можно использовать как дифференциально-диагностический признак. Образование слизи – характерная особенность вирулентных штаммов; слизь придает вязкость бульонным культурам и колониям.

В жидких средах синегнойная палочка образует характерную серовато-серебристую пленку; по мере старения культуры возникает помутнение среды по направлению сверху вниз. На плотных средахобычно образует небольшие (2–5 мм) выпуклые S-колонии. Бактерии также могут формировать плоские, неправильной формы колонии с волнистыми краями либо складчатые колонии с неровной поверхностью («маргаритки»). На плотных средах у многих штаммов синегнойной палочки наблюдают феномен радужного лизиса – появление на поверхности колоний пленки, переливающейся всеми цветами радуги в отраженном свете. Феномен радужного лизиса обусловлен спонтанным действием бактериофага и характерен только для P. aeruginosa(его можно рассматривать как дополнительный таксономический признак).Синегнойная палочка не ферментирует лактозу и образует на среде Плоскирева небольшие беловатые полупрозрачные колонии.

Биохимические свойства. P . aeruginosa – выраженный хемоорганотроф и строгий аэроб. Палочка способна расти на чисто минеральных средах при добавлении подходящего единственного источника углерода. Характерная особенность – образование триметиламина, придающего культурам запах жасмина или карамели,Как и большинство патогенных гноеродных бактерий, синегнойная палочка каталазоположительна. Подобно прочим аэробам она синтезирует цитохромоксидазу (индолфенолоксидаза), а оксидазный тест служит одним из ведущих при идентификации бактерий.

Протеолитическая активность высокая – бактерии разжижают желатину, свертывают сыворотку крови, гидролизуют казеин; утилизируют гемоглобин (большинство патогенных штаммов на КА образует зону b-гемолиза). Микроорганизмы расщепляют не только белки, но и отдельные аминокислоты (например, валин и аланин).

Сахаролитическая активность низкая – бактерии способны окислять только глюкозу с образованием глюконовой кислоты.

Ввиду явного преобладания протеолитических свойств над сахаролитической активностью к идентификации синегнойной палочки среды «пестрого ряда» готовят с малым содержанием пептона (до 0,1 %) и высокой концентрацией углеводов (до 2 %). Тест Хью-Лейфсона положителен только с глюкозой (в аэробных условиях).

Большинство штаммов продуцирует пигмент пиоцианин, который имеет синий цвет в нейтральной или щелочной и красный в кислой среде. Имеются штаммы, которые образуют темно-красный пигмент.

Токсигенность. P . aeruginosa образует комплекс экзотоксинов, а также эндотоксин, высвобождающийся при гибели бактерий.

Экзотоксины представлены метаболитами с широким спектром биологической активности; них основное значение имеют следующие экзотоксины.

Экзотоксин А – термолабильный белок, самый токсичный из всех остальных продуктов жизнедеятельности синегнойной палочки. Механизм действия связан с подавлением синтеза белков через АТФ-рибозилирование и нарушением организации матрицы синтеза. То есть во многом аналогичен действию дифтерийного токсина. Действие экзотоксина А проявляется в токсическом эффекте, отеках, некрозах, артериальной гипотензии с последующим сом, метаболическом ацидозе, дыхательной недостаточности и т. д.

Экзотоксин S – термостабильный белок с АДФ-трансферазной активностью. Первоначальноон образуется в форме неактивного белка-предшественника. Его действие проявляем развитием патологических процессов в легких.

Цитотоксин проявляет выраженное цитотоксическое действие, в том числе и на сегментоядерные нейтрофилы, способствуя развитию нейтропении. Он вызывает ультраструктурные изменения в клетках, нарушение физиологических градиентов К⁺, Na⁺, Ca²⁺ и глюкозы посредством повышения проницаемости клеточных мембран, что обусловливает набухание клеток и потерю крупных (например, белковых) молекул.

Бактерии образуют две гемолитические субстанции: термолабильный гемолизин с лецитиназной активностью (фосфолипазу С) и термостабильный гемолизин (фосфолипазу). Токсины вызывают солюбилизацию и гидролиз фосфолипидов с образованием фосфорилхолинов – источника неорганических фосфатов. Действие гемолизинов проявляется развитием некротических поражений (особенно в печени и легких).

Действие эндотоксина приводит к развитию пирогенной реакции и стимулирует воспаление, как и эндотоксины прочих грамотрицательных бактерий.

Энтеротоксический фактор. Его патогенетическое значение оценить трудно, так как инфекции P . aeruginosa , сопровождающиеся диареей, регистрируют крайне редко (в частности, при шанхайской, или 5-дневной, лихорадке).

Вирулентные штаммы синтезируют фактор проницаемости, участвующий в повреждении тканей. Нейраминидаза нарушает процессы метаболизма веществ, содержащих нейраминовые кислоты, например в соединительнотканных элементах. Нейраминидаза способна в 2–3 раза усиливать действие других токсинов.

Протеолитические ферменты. Протеаза II (эластаза) обусловливает 75 % протеолитической активности синегнойной палочки. Фермент расщепляет эластин, казеин, гемоглобин, фибрин, Ig, комплемент и другие белки, Протеаза III (щелочная протеаза) гидролизует многие белки. Коллагеназа вызывает гидролиз коллагена в соединительных тканях; ее считают основным фактором вирулентности при инфекционных поражениях роговицы.

Антигенная структура. Основные антигены P . aeruginosa – соматический, О-антиген, и жгутиковый, Н-антиген. Серологическую идентификацию культур и выявление их принадлежности к определенному серовару проводят по наличию у выделенной культуры сочетания группоспецифического О-антигена и типоспецифического Н-антигена. О-антиген и Н-антиген синегнойной палочки обозначают арабскими цифрами, указывающими на принадлежность к определенной серологической группе.

Сочетание индексов определяет принадлежность к конкретному серовару.

Патогенез. Несмотря на большое количество факторов вирулентности, синегнойную палочку следует рассматривать как оппортунистический патоген, так как инфекционные процессы, вызванныеэтим микроорганизмом, редко регистрируют у животных с нормальной резистентностью и неповрежденными анатомическими барьерами. Поверхностные микроворсинки P . aeruginosa обеспечивают адгезию бактерий к эпителию.

Псевдомонады – типичные внеклеточные паразиты, их способность к размножению зависит от возможности противостоять действию факторов резистентности зараженного организма.Слизь и секретируемые цитотоксины защищают бактерии от действия защитных факторов. Важную роль играет комплекс БАВ, синтезируемых бактериями и обеспечивающих их неорганическим фосфором (фосфолипазы) и железом (сидерофоры, нарушающие связывание железа трансферрином.

Диагностика. Заключается в выделении чистой культуры и ее идентификации. Наиболее быстрым опознавательным признаком считается обнаружение пиоцианина (подщелоченную культуру обрабатывают хлороформом; при наличии синегнойной палочки среда окрашивается в синий цвет).

Возбудитель, выделяясь с гноем и испражнениями от больных, может инфицировать пищевые продукты, воду, почву, различные предметы, которые в свою очередь являются факторами передачи его человеку и животным.

Глава 14. ГРАМПОЛОЖИТЕЛЬНЫЕ
СПОРООБРАЗУЮЩИЕ БАКТЕРИИ

14.

Возбудитель сибирской язвы

Сибирская язва (Anthrax) – зооантропозооноз. К ней восприимчивы животные многих видов, особенно травоядные, и человек. Инфекционный процесс протекает преимущественно остро с явлениями септицемии или с образованием различной величины карбункулов.

Возбудитель сибирской язвы – Вас. аnthracis.

Морфология. Бацилла антракса довольно крупная (1–1,3X3,0–!0,0 мкм) палочка, неподвижная, образующая капсулу и спору. Микроб встречается в трех формах; в виде вегетативных различной величины клеток (капсульных и бескапсульных), в виде спор, заключенных в хорошо выраженный экзоспориум и в виде изолированных спор. В препаратах из крови и тканей, больных или погибших от сибирской язвы животных бактерии в неокрашенном состоянии имеют форму гомогенных прозрачных палочек с четко закругленными концами.

Сибиреязвенная бацилла при неблагоприятных условиях существования обладает способностью формировать споры. В каждой вегетативной клетке, или спорангии, образуется только одна эндоспора, чаще располагающаяся центрально, реже – субтерминально. Споры бациллы антракса овальные, иногда округлые. Размеры зрелых спор колеблются в пределах 1,2–1,5 мкм в длину и 0,8–1 мкм в поперечнике, незрелые споры (проспоры) несколько меньше. При температуре ниже 12 °С и выше 42 °С, а также в живом организме или невскрытом трупе, в крови и сыворотке крови животных споры не образуются.

Культивирование. Наиболее благоприятны для роста бациллы антракса питательные среды, содержащие в своем составе частично гидролизованные до пептонов и полипептидов белковые комплексы. Бактерия может также интенсивно размножаться и в безбелковых синтетических средах, состоящих из определенного набора аминокислот. В качестве источника энергии могут быть использованы различные соединения углерода: глюкоза, сахароза, мальтоза, глицерин и др.

Сибиреязвенный микроб по способу дыхания относят к факультативным анаэробам; он одинаково хорошо развивается в условиях повышенной аэрации, в том числе ив атмосфере кислорода, и в строго анаэробных условиях.

Устойчивость. Устойчивость и длительность выживания у вегетативных клеток и спор возбудителя сибирской язвы различны. Первые относительно лабильны, вторые достаточно резистентны.

В невскрытом трупе вегетативная форма микроба в результате воздействия протеолитических ферментов разрушается уже в течение 2–3 суток, в зарытых трупах может сохраняться до четырех дней, через семь суток завершается лизис бактерий даже в костном мозге. В желудочном соке – 38 °С гибнет через 30 мин, в замороженном мясе при –15 °С остается жизнеспособной 15 дней, в засоленном мясе-до 1,5 месяца. Навозная жижа, смешанная с сибиреязвенной кровью, убивает вегетативный клетки через 2–3 ч, споры же остаются в ней вирулентными в течение месяцев.

В отличие от вегетативных клеток споры бациллы антракса более длительно сохраняются во внешней среде. Резистентность спор во многом зависит от того, насколько они быстро сформировались. Так, споры, образовавшиеся при 18–20 °С, более резистентны, чем споры, сформировавшиеся при температуре 35–38 °С. Споры сибиреязвенных вакцин Ланге сохраняли жизнеспособность в течение 80-летнего срока наблюдения. В запаянных ампулах с бульонными культурами споры могут оставаться жизнеспособными и вирулентными до 63 лет, в почве – более 50 лет. Особенно благоприятны для длительного сохранения спор почвы, богатые гумусом и нейтральным рН. В этих почвах при элективных режимах температуры, влажности и аэрации не исключена вегетация спор.

К воздействию различных химических веществ вегетативные клетки малоустойчивы. Спирт, эфир, 2 %-ный формалин, 5 %-ный фенол, 5–10 %-ный хлорамин, свежий 5 %-ный раствор хлорной извести, перекись водорода их разрушает в течение 5 мин. Для уничтожения споровой формы возбудителя требуется более длительная экспозиция. Этиловый спирт в концентрациях от 25 % до абсолютного убивает споры в течение 50 дней и более, 5 %-ный фенол, 5–10 %-ный растворы хлорамина обезвреживают споры через несколько часов и даже суток, 1 %-ный раствор формалина – через 2 ч, 2 %-ный формалин –через 10–15 мин, 3 %-ный раствор перекиси водорода – через 1 ч, 4 %-ный марганцовокислый калий –через 15 мин, 10 %-ный едкий натрий – через 2 ч. Важное значение имеет температура дезинфицирующего раствора и концентрация спор.

Вегетативные клетки также малоустойчивы и к температурным факторам. При нагревании до 50--55^оС гибнут в течение 1 ч, при 60 °С – через 15 мин, при 75 °С – через 1 мин, при кипячении – мгновенно. Они чувствительны к высушиванию, однако при медленном высушивании наступает спорообразование и микроб не гибнет. Низкие же температуры их консервируют. Так, при –10 °С бактерии сохраняются 24 дня, при –24 °С – 12 дней, даже при температуре жидкого азота (–196 °С) не гибнут в течение 24 ч. Воздействие прямого солнечного света обезвреживает бактерии через несколько часов.

На споры высушивание вообще не оказывает губительного действия. Сухой жар при 120–140 °С убивает споры только через 2–3 ч, при 150 °С -через 1 ч., текучий пар при 100 °С – через 12–15мин., кипячение – через 1 ч.

Возбудитель сибирской язвы проявляет высокую чувствительность к литическому действию лизоцима. Бактериостатическим эффектом на протяжении 24 ч. обладает свежевыдоенное молоко коров.

Может также проявляться антагонистическое влияние на бациллу антракса ряда микроорганизмов: сальмонелл, кишечной палочки, протея, стафилококк, актиномицет и др. Антагонизм энтеробактерий отчасти объясняет причину редкого возникновения кишечных форм сибирской язвы у животных.

Токсигенность. Бацилла антракса образует сложный экзотоксин. Этот токсин состоит из трех компонентов (факторов), которые обозначаются: эдематогенный фактор (EF), протективный антиген (РА) и летальный фактор (LF) или соответственно I, II и III факторы. Все они синтезируют капсульные и бескапсульные варианты микроба. Эдематогенный фактор вызывает местную воспалительную реакцию – отек и разрушение тканей. В химическом отношении это липопротеин. Протективный антиген – носитель защитных свойств, обладает выраженным иммуногенным действием. В чистом виде не токсичен. Летальный фактор сам по себе не токсичен, но в смеси со вторым фактором (РА) вызывает гибель крыс, белых мышей и морских свинок. Протективный антиген и летальный фактор – гетерогенные в молекулярном отношении белки. Все три компонента токсина составляют синергическую смесь, оказывающую одновременно эдематогенное и летальное действие, каждый из них обладает выраженной антигенной функцией и серологически активен.

Инвазивные свойства обусловлены капсульным d-глутаминовым полипептидом и экзоферментами.

Антигенная структура. В состав антигенов бациллы антракса входят неиммуногенный соматический полисахаридный комплекс и капсульный глутамин-полипептид. Полисахаридный антиген не создает иммунитета у животных и не определяет агрессивных функций бациллы, его всегда обнаруживают как у вирулентных, так и авирулентных штаммов. В связи с тем, что полисахарид тесно связан с телом бактериальной клетки, он получил название соматического антигена. Сибиреязвенный соматический антиген очень часто обозначается буквой С, капсульный полипептид – буквой Р. Капсульный антиген бациллы антракса представлен сложным полипептидом d-глутаминовой кислоты и рассматривается как группоспецифическое вещество, так как он дает перекрестные серологические реакции с полипептидом Вас. subtilis, Вас. cereus и Вас. megaterium. Активными антигенами также являются все три компонента сибиреязвенного экзотоксина.

Иммунитет. Сейчас значительно расширились представления о механизмах иммуногенеза при сибирской язве. Установлено, что соматический полисахарид и капсульный полипептид глутаминовой кислоты бациллы антракса не способны обусловить синтез защитных антител. Эту функцию у бациллы антракса выполняет протективный антиген: будучи одним из факторов патогенности, он обусловливает формирование иммунитета к этой инфекции по типу антитоксического.

Защитные антитела обнаружены при помощи РСК, РДП и непрямого варианта метода флуоресцирующих антител в сыворотках животных, вакцинированных сибиреязвенным протективным антигеном или живыми споровыми вакцинами.

Важнейшим фактором антимикробного противосибиреязвенного иммунитета является фагоцитоз, о чем еще в 1901 г. сообщал И. И. Мечников.

Переболевание животного сибирской язвой или же его вакцинация сопровождаются развитием чувствительности замедленного типа. Аллергенной активностью обладают фракции бациллы антракса с преимущественным содержанием белка.

В результате естественного заражения и переболевания сибирской язвой у животных возникает длительный и стойкий иммунитет.

Патогенез. Бацилла антракса обладает выраженной инвазивностью и легко проникает через царапины кожных покровов или слизистых оболочек. Заражение животных происходит преимущественно алиментарно. Через поврежденную слизистую пищеварительного тракта микроб проникает в лимфатическую систему, а затем в кровь, где фагоцитируется и разносится по всему организму, фиксируясь в элементах лимфоидно-макрофагальной системы, после чего снова мигрирует в кровь, обусловливая септицемию.

Размножаясь в организме, бацилла антракса синтезирует капсульный полипептид и выделяет экзотоксин. Капсульное вещество ингибирует опсонизацию, в то время как экзотоксин разрушает фагоциты, поражает центральную нервную систему, вызывает отек, возникает гипергликемия и повышается активность щелочной фосфатазы.

В терминальной фазе процесса в крови снижается содержание кислорода до уровня, несовместимого с жизнью. Резко нарушается метаболизм, развивается вторичный шок и наступает гибель животных.

Возбудитель сибирской язвы из организма может выделяться с бронхиальной слизью, слюной, молоком, мочой и испражнениями.

Клинические признаки. Инкубационный период 1–3 дня. Принято различать две основные формы болезни – септицемическую и карбункулезную. Кроме того, в зависимости от локализации процесс может протекать с преимущественным поражением кожи, кишечника, легких и глотки. Однако указанное деление довольно условно и используется лишь для удобства описания клинической картины. Па самом деле местные патологические процессы развиваются, как правило, на фоне септицемии и встречаются в различных сочетаниях. Различают молниеносное (сверхострое), острое, подострое, хроническое и абортивное течение.

При молниеносном течении, которое регистрируют у овец, коз, лошадей, крупного рогатого скота, отмечают возбуждение, повышение температуры тела, учащение пульса и дыхания, синюшность видимых слизистых оболочек. Животное внезапно падает и в судорогах погибает. Длительность болезни – от нескольких минут до нескольких часов.

Острое течение (характерно для крупного рогатого скота и лошадей) проявляется повышением температуры до 42 °С, угнетением, отказом от корма, прекращением или резким сокращением лактации у коров, дрожью, нарушением сердечной деятельности, синюшностью видимых слизистых оболочек, на конъюнктиве появляются точечные кровоизлияния. У овец, крупного рогатого скота и лошадей описаны отеки в области глотки и гортани. У крупного рогатого скота отмечают признаки тимпании, у лошадей – колики. У беременных возможны аборты. Длительность течения болезни 2–3 сут.

Подострое течение характеризуется теми же клиническими признаками и отличается лишь длительностью болезни – до 6–8 дней. Хроническое течение проявляется прогрессирующим исхуданием, инфильтратами под нижней челюстью и поражением подчелюстных и заглоточных лимфатических узлов. Болезнь длится 2–3 мес. Редко встречается абортивное течение с невысоким подъемом температуры тела, которое заканчивается выздоровлением.

Возникновение сибиреязвенных карбункулов отмечают при остром и подостром течении на месте первичного внедрения возбудителя или вторично в других участках тела. Вначале появляется отек кожи и подкожной клетчатки, резко очерченный, твердый, болезненный. Затем он приобретает вид диффузной тестообразной, холодной и безболезненной припухлости, центр которой некротизируется и изъязвляется. Поражение кишечника сопровождается высокой температурой и характеризуется коликами, запором, сменяющимся поносом. Легкиев естественных условиях у животных поражаются редко.

В отличие от других видов животных у свиней сибирская язва протекает в виде ангины. Воспаление в области глотки сопровождается опуханием шеи, глотание и дыхание затрудняются, появляются кашель, сопение. Нередко у свиней болезнь протекает без выраженных признаков и диагностируется лишь при послеубойном осмотре.

Патологоанатомические изменения. Вскрытие трупов животных, подозрительных по заболеванию сибирской язвой, а тем более павших от этой болезни, категорически воспрещается. Однако в практике бывают случаи ошибочного вскрытия трупов, если болезнь протекала с недостаточно выраженными клиническими признаками. Ветеринарный специалист должен хорошо знать патологоанатомические изменения при сибирской язве, чтобы вовремя прекратить вскрытие и принять меры к недопущению рассеивания возбудителя инфекции. При осмотре трупа обращают внимание на следующие признаки: труп вздут, окоченение отсутствует или слабо выражено, из естественных отверстий – кровянистое истечение, на коже – тестоватые припухлости. Кровь темная, несвернувшаяся. В подкожной клетчатке – инфильтрация и кровоизлияния. Инфильтраты отмечают под легочной и реберной плеврой. В полостях тела – значительное количество мутной красноватой жидкости. Лимфатические узлы увеличены, пролизаны кровоизлияниями.

Характерный признак сибирской язвы – резкое увеличение селезенки, консистенция ее дряблая, пульпа на разрезе стекает в виде дегтеобразной массы. Кровоизлияния в почках, в мышце сердца. Легкие отечны, кровенаполнены. Слизистая оболочка тонкого отдела кишечника набухшая, ярко-красного цвета, с кровоизлияниями. У свиней студенисто-геморрагические инфильтраты в области гортани, трахеи, на языке, поражение миндалин и регионарных лимфоузлов.

При молниеносном течении у павших животных выраженные патологические изменения могут отсутствовать. Устанавливают лишь кровенаполнение сосудов мозговых оболочек, кровоизлияния.

Диагностика. Для лабораторного исследования на сибирскую язву чаще всего направляют ухо павшего животного. Можно взять кровь из надреза сосуда инанести толстую каплю на предметное стекло. При вынужденном убое или подозрении на сибирскую язву во время вскрытия осторожно отбирают кусочки селезенки, печени, измененныелимфоузлы. От трупов свиней берут кусочки воспаленных тканей в области глотки и заглоточные лимфоузлы. Материал должен быть свежим: в разложившихся тканях бацилла антракса лизируется. Исследуют также пробы почвы, фуража, воды, шерсти и кожевенно-мехового сырья; объектами для серологического исследования по реакции преципитации служат пробы кожевенно-мехового сырья и разложившиеся ткани.

Исследование проводится по схеме: микроскопия мазков, выделение и изучение свойств чистой культуры, биопроба на лабораторных животных, при необходимости серологические исследования – реакция преципитации и иммунофлуоресцентный анализ.

Активная защита животных от сибирской язвы путем вакцинации – надежное средство профилактики данного заболевания. С этой целью применяют живые споровые сибиреязвенные вакцины.

Первые вакцины получены в 1881 г. Пастером. Они представляли отселекционированные из популяции вирулентого штамма бациллы антракса иммунногенные мутанты с пониженной вирулентностью.

Вакцина ГНКИ – сухая живая вакцина из эталонного штамма ГНКИ. Содержит 5 х 10⁷ спор в 1 мл. Вакцина против сибирской язвы из штамма № 55.

Ассоциированная живая жидкая вакцина против сибирской язвы и эмфизематозного карбункула крупного рогатого скота.

Для пассивной профилактики и лечения сибирской язвы с успехом применяются противосибиреязвенные сыворотка и глобулин.

Противосибиреязвенный глобулин получают из гипериммунной противосибиреязвенной сыворотки осаждением этанола, содержит наиболее иммунологически активные компоненты сыворотки – гамма- и бета-глобулины и освобожден от неактивных альбуминов и альфа-глобулина. Используют глобулин для профилактики и лечения сибирской язвы у всех видов животных.

Патогенные анаэробы

Биологические свойства. Патогенные анаэробы относятся к отделу Firmicutes, семейству Bacillaceae и роду Clоstridium. В настоящее время насчитывается 61 вид рода Clostriodium, из них 12 патогенные. Среди них С. botulinum, С. tetani, C. chauvoei, C. perfrindens, C. septicum, C. histolyticum, C. novyi, C. sordellii. Патогенные анаэробы вызывают инфекционные болезни, токсикозы, дисбактериозы, некоторые виды клостридий вызывают несколько нозаформ, некоторые болезни являются результатом заражения некоторыми возбудителями. Некоторые ученые считают их хищными бактериями, т.к. их токсины приводят жертву к гибели, затем возбудитель, питаясь трупом, увеличивает численность своей популяции.

Клостридии, в т. ч. патогенные – естественные обитатели почвы и водоемов, способные к сапрофитическому существованию. Некоторые виды (C. perfrindens) постоянно обитают в желудочно-кишечном тракте животных (чаще жвачных, свиней), но не всегда вызывают заболевания (у овец – при поедании ядовитых трав, у собак – при односторонним кормлении мясом).

Клостридии грамположительные, крупные (диаметр 300,8 мнм, длина до 10 мкл.), полиморфные, подвижные перитрихи. Образуют споры, плострикапсулу не образуют, кроме С. perirendens (в организме). Культивируются на средах с добавлением белкового гидролизата, мышц, печени в анаэробных условиях (среды Китта – Тароцци, глюкозокровяной агар, бульон Хоттингера, агар Цейслера и др.). Они не обладают ферментом каталазой, синтезируют высокоактивные токсины с гемолитическими, некротическими, нейротоксическими, летальным компонентами. Ряд ферментов у клостридий также обладают патогенным действием (поллегеноза, гиалуронидаза и др.).

Клостридии обладают также комплексными токсинами, состоящими из ряда компонентов: альфа-, 2 бета-, гамма-, дельта-, эпсилон-, каппа-, тетта-токсины. У С. perfrindens обнаружено 15 токсических веществ.

Биохимические свойства у клостридий оценивают по сбраживанию моносахаридов, многоатомных спиртов, степени расщепления белков (см. табл. 8).

Таблица 8. Общая характеристика основных видов патогенных анаэробов.

Название микроба	Клинические проявления	Подвижность	Форма колоний на кровяном пластинчатом агаре	Рост в молоке	Рост в желатине	Изменение мозговой среды	Ферментация углеводов
Cl. tetani	Столбняк	Перитрих	Две формы: 1. нежный кружевной рост в виде мелких пучков; 2. гладкие прозрачные колонии в виде росинок	Очень слабое свертывание	Разжижение медленное	Заметное почернение	Отрицательная
C. perfrindens	Газовая гангрена	Неподвижен	Круглые сочные колонии, вначале сероватые, затем оливковые и зеленые с зоной гемолиза	Бурное свертывание	То же	Не чернеет	Значительная
C. novyi	Студенисто- серозный отек	Перитрих	Шероховатые (серые), выпуклые в центре, с изрезанными краями, с зоной Гемолиза, отростки колоний двухконтурные	Свертывание	То же	То же	Слабая
C. septicum	Серозно-кровяной отек	Перитрих	Нежные кружевные извитые нити, завитки с зоной гемолиза	Свертывание	Разжижение медленное	Не чернеет	Слабая
C. histolyticum	Расплавление ткани	Перитрих	Мелкие, гладкие, похожие на росинки, без гемолиза	Полная пептонизация	Сильное помутнение	Медленное почернение	Отрицательная
С.botulinum	Ботулизм	Перитрих	Как у C. novyi	То же	Разжижение	То же	Очень слабая
C. sordellii	Стекловидно-студенистый отек	Перитрих	Круглые, неправильной формы с зоной гемолиза	То же	То же	То же	Слабая

По биохимическим свойствам клостридин делят на 3 группы:

1) с высокими сахаролитическими свойствами;

2) с высокой протеолитической способностью;

3) с умеренными сахаролитической и протеолитической активностью.

Патогенные клостридии вызывают болезни, называемые клостридиозами: эмфизематозный карбункул, столбняк, ботулизм, злокачественный отек, брадзот овец, анаэробная дизентерия ягнят, инфекционная энтеротоксемия овец, энтеротоксимия крупного рогатого скота, энтеротоксемия собак.

Антигенная структура Клостридии обладают О- и Н-антигенами. Каждый вид имеет несколько сероваров. Термостабильные н-антигены определяют типовую принадлежность возбудителей.

Экологические особенности. Клостеридии, в т. ч. патогенные обитают на всех континентах, чаще в низменных, увлажненных почвах. Загрязнение открытых ран почвой нередко приводит к развитию клостидиозов. Чем более удобрена почва, тем чаще в ней обнаруживаются клостиридии. Возбудителей клостридиозов с полным основанием называют случайными паразитами, т.к. их основная среда обитания почва, откуда они попадают в желудочно-кишечный тракт. В почве патогенные клостридии размножается и неограниченно долгое время существуют. В состоянии споры клостридии обладают высокой устойчивостью, как и физическим (УФА, температура, влажность), так и химическим (дезинфицирующие вещества) факторам. Например, С. perfringens выдерживают кипячение в течение 1–3 часов.

Патогенность. К возбудителю столбняка восприимчивы все виды сельскохозяйственных животных; болеют также собаки, кошки, дикие млекопитающие, куры, гуси, индюки. Восприимчив и человек. Из лабораторных животных наиболее восприимчивы белые мыши. К ботулизму восприимчивы лошади, крупный рогатый скот, овцы и козы. Свиньи, собаки, кошки, хищники – более резистентны. Высокой чувствительностью обладают норки. К возбудителю ботулизма восприимчивы более 36 видов птиц: куры, индюки, утки, гуси и др. Болеет человек. Белые мыши, морские свинки, кролики восприимчивы.

В естественных условиях эмфизематозным карбункулом болеют крупный рогатый скот, в возрасте от 3 месяцев до 4 лет – наиболее восприимчив.

Злокачественный отек поражает животных и человека.

Возбудитель столбняка

Столбняк – это остропротекающая токсико-инфекционная болезнь животных и человека, характеризующаяся выраженной рефлекторной возбудимостью и судорожным сокращением мускулатуры.

Возбудитель столбняка – C. tetani.

Токсигенность. Возбудитель столбняка вырабатывает сильный токсин, который состоит из двух компонентов: тетаноспазмина и тетаногемолизина. Тетаноспазмин является главным летальным фактором, который действует на нервную систему животных и человека и вызывает тоническое сокращение поперечнополосатых мышц, характерное для столбняка.

Этот токсин появляется в культуральной жидкости на вторые сутки выращивания и достигает максимума активности к пятому – седьмому дню роста. Затем начинается постепенное разрушение и снижение активности под воздействием окислителей и тепла. Синтез этого токсина происходит внутри бактериальных клеток и из них поступает в среду путем диффузии через оболочку или же высвобождается при лизисе клеток.

В отличие от тетаноспазмина тетанолизин секретируется микробной клеткой в процессе активного роста, обычно его максимальное накопление в культуральной жидкости среды отмечается через 20–30 ч. роста. Биологическое действие тетаногемолизина заключается в разрушении эритроцитов крови.

Иммунитет. Многочисленными исследованиями установлено, что человек, лошадь, свинья, обезьяна, морская свинка не способны вырабатывать естественный противостолбнячный антитоксический иммунитет, тогда как жвачные животные могут приобретать такой иммунитет, и кровь их, особенно крупного рогатого скота и овец, содержит более или менее обильное количество столбнячного антитоксина.

Приобретение естественного иммунитета против столбняка жвачными животными объясняется явлением иммунизирующей субинфекции, которому способствует размножение в рубце возбудителя болезни с продукцией токсина, всасывание которого в небольших количествах вызывает накопление в крови антитоксинов.

Противостолбнячный иммунитет может быть плацентарного и колострального происхождения. Иммунитет новорожденных имеет особо важное значение: они исключительно чувствительны к заболеванию и могут заражаться через пуповину, загрязненную спорами клостридий столбняка.

Патогенез. Столбняк возникает в результате повреждения целостности кожи и слизистых оболочек и проникновения спор возбудителя в организм. Наиболее благоприятной средой для прорастания спор и возникновения болезни являются рваные размозженные раны.

Возбудитель столбняка не обладает инвазивными свойствами и не распространяется по всему организму. Споры возбудителя, попавшие в рану, могут находиться в тканях организма продолжительно долгое время, не оказывая вредного действия, или же подвергаются фагоцитозу. При наличии анаэробных условий и омертвевших субстратов они прорастают и размножаются с выделением токсина.

В патогенезе болезни ведущая роль принадлежит тетаноспазмину. Всасываясь с места локализации процесса, токсин достигает двигательных ганглиев спинного мозга, либо по осевым цилиндрам, либо по периневральным путям вдоль лимфатических щелей. Часть токсина может поступать в спинной мозг и через кровь. Поражение токсином клеток спинного мозга служит причиной повышенной рефлекторной возбудимости больных столбняком, что обуславливает чрезмерное судорожное сокращение мышц.

Смерть животного при столбняке наступает в результате паралича дыхательного центра, остановки сердца, асфиксии, вызванной спазмом глотки и бронхов во время приступа судорог.

Клинические признаки. При диагностике столбняка особое внимание обращают на клинические признаки. Инкубационный период в среднем при естественном заболевании животных длится от 6–8 до 20 дней, иногда он бывает значительно короче или затягивается на несколько недель и даже месяцев.

Первыми признаками заболевания животного столбняком являются напряженность движений. Осторожное жевание и глотание. С развитием процесса появляются судорожные сокращения отдельных групп мышц, начиная с головы (жевательных), шеи, туловища, хвоста и конечностей.

Больное животное стоит на одном месте с напряженными, широко расставленными ногами, с вытянутой вперед головой. Уши стоят, глазные щели сужены и частично прикрыты выпавшим третьим веком. Ноздри расширены, рот судорожно сжат. Хвост неподвижен, слегка приподнят и чаще загнут в одну сторону, живот подтянут.

Характерным признаком столбняка считают тризм, при котором в результате тонических сокращений жевательных мышц, рот судорожно сжат, а углы губ оттянуты и приподняты вверх, и животное не в состоянии отжимать челюсти.

Больные животные очень чувствительны ко всяким внешним воздействиям (шум, стук, окрик, яркий свет, прикосновение), которые вызывают у них усиление приступов судорог, во время которых отмечается обильное потоотделение.

У крупного рогатого скота рефлекторная возбудимость проявляется в меньшей степени, чем у лошадей и ослов, и, как правило, у них отмечается вздутие рубца.

У овец и коз отмечают ригидность мускулатуры тела, скованность движений. С развитием болезни они полностью теряют способность двигаться, наступает искривление позвоночника и опистотонус, при котором голова откидывается назад.

У свиней наиболее характерными являются резко выраженный тризм и искривление позвоночник вверх или вниз.

Диагностика. При диагностике если клинические признаки столбняка типичные, то необходимости в микробиологическом исследовании патматериала нет. В сомнительных случаях в лабораторию направляют раневой экссудат. Основное в диагностике столбняка – обнаружение специфического токсина. Раневой воспалительный экссудат засевают пастеровской пипеткой в среду Китта – Тароцци, посевы инкубируют в термостате 5–7 дней. Полученную культуру фильтруют через асбестовые фильтровальные пластинки Зейтца. Фильтрат вводят подкожно белым мышам или морским свинкам, последние гибнут с выраженной клинической картиной столбняка. Параллельно исследуемый материал микроскопируют, высевают на глюкозно-кровяной агар.

При исследовании проб почвы взвесь пробы прогревают при 80 °С 30 мин, затем засевают в среду Китта – Тароцци, культивируют в термостате, далее культуру фильтруют и ставят биопробу.

Способ изготовления столбнячного анатоксина, нашедший широкое практическое применение в качестве вакцины, разработали Рамон и Декомбей в 1925–1927 гг. Обезвреживание токсина проводилось по методу Района, разработанного для дифтерийного токсина, путем добавления 0,2–0,5 % формалина с последующим выдерживанием при температуре +37 °С в течение 3–4 недель.

Возбудитель ботулизма

Ботулизм – кормовая токсико-инфекционная болезнь, характеризующаяся поражением центральной нервной системы и парезами двигательной мускулатуры, прежде всего глотки, языка и нижней челюсти.

Возбудитель ботулизма – C . botulinum .

Токсигенность. Ботулизм у животных возникает в результате поступлении в желудочно-кишечный тракт с кормом токсина C. botulinum.

Токсины C. botulinum состоят из нескольких токсических факторов: нейротоксина, гемолизина, липазы и протеазы. Из них основным токсином для всех типов возбудителя, который имеет решающее значение в интоксикации организма, является нейротоксин. Протеолитические ферменты желудочно-кишечного тракта не разрушают токсины типа A, B, C, F, G и усиливают активность токсина типа Е. Усиление токсина типа Е под действием протеолитических ферментов объясняется тем, что он в основном вырабатывается микробной клеткой в виде протоксина.

Все шесть серологических типов экзотоксина обладают иммунологической специфичностью, выявляемой в реакции нейтрализации. Специфичность токсинов типов А, В и Е очень высока, С и D несколько ограничена. Токсины этих двух типов не нейтрализуются антитоксинами А, В и Е, но небольшие дозы токсинов С и D перекрестно нейтрализуются большими количествами антитоксинов D и С. известен также факт перекрестной нейтрализации специфическими антисыворотками ботулинических токсинов типов E и F.

В пределах типов А и В в реакциях агглютинации, преципитации и связывания комплемента по антигенам бактериальных клеток выявлены отдельные серологические группы; у типа Е обнаружено три серологические группы, у типов С, D F такого разделения не установлено.

Иммунитет. Иммунитет при ботулизме антитоксический, однако, гуморальные факторы у разных видов животных не всегда соответствуют их устойчивости к токсинам, особенно к токсину типа Е. Высказывается предположение, что естественная резистентность животных к ботулиническому токсину генетически обусловлена и связана с особенностями протоплазматических элементов клеток.

У переболевших ботулизмом людей и животных невосприимчивость к повторному заболеванию не возникает, и перенесенное заболевание неоставляет антитоксического иммунитета. Однако при вакцинации анатоксином или анакультурой животные приобретают типоспецифическую невосприимчивость к болезни, которая является результатом накопления в крови и тканях организма соответствующих антитоксинов.

Патогенез. Ботулинический токсин передается животным не только через корма, но и через воду. Водный путь передачи ботулинического токсина характерен для птиц. Известны многочисленные случаи массового заболевания и гибели водоплавающих птиц в природных условиях во всех частях света от ботулинического токсина типа С, который образуется в стоячей воде, где имеются гниющие растительные остатки или трупы павших животных.

При наличии соответствующих условий анаэробиоза, влажности и тепла Cl. botulinum активно размножается в органических субстратах с продукцией токсина. Отравление животных возникает вследствие попадания с кормом или водой в пищеварительный тракт образовавшегося во внешней среде токсина или же он продуцируется в желудочно-кишечном тракте инфицированного животного. В последнем случае очень важным является поступление в организм вместе с возбудителем небольших доз токсина, которые ослабляют защитные приспособления организма.

В патогенезе ботулизма большое значение имеет феномен Беринга, который заключается в многократном повышении чувствительности животных к повторному поступлению в организм ботулинического токсина в небольших дозах. При этом животные погибают от небольших доз токсина.

Попавший в желудочно-кишечный тракт токсин при кислой реакции среды сохраняется в его верхних отделах 18–20 ч, не снижая своей активности. Из пищеварительного тракта он поступает в кровь, где его обнаруживают на второй-третий день и позже после проявления болезни, что указывает на образование его в организме. Циркуляция токсина в крови длится 24–48 ч. При этом поражается эндотелий капилляров и токсин проникает в клетки организма, прежде всего, вызывая повреждение моторных центров передних рогов спинного и продолговатого мозга, что является причиной развития паралитического синдрома.

Клинические признаки. Инкубационный период при ботулизме длится от нескольких часов до 2–3 недель и зависит от первоначальной дозы токсина, поступившего в организм с кормом, и сопротивляемости организма, но обычно он составляет 12–48 ч. Чем больше токсина имелось в корме, тем короче инкубационный период и острее течение болезни.

Характерными признаками заболевания всех видов животных ботулизмом являются прогрессирующая слабость, нарушение иннервации мышечной системы, особенно бульбарной (относящийся к продолговатому мозгу) паралич: паралич жевательного и глотательного аппарата. Аппетит и жажда у больных сохраняются. Животные захватывают корм, долго его пережевывают, но проглотить не могут. Пытаются пить, но вода выливается из ротовой полости ичерез носовые ходы. Нередко отмечается паралич языка и нижней челюсти, Животные быстро худеют. Наблюдаются расстройство зрения, слюнотечение, нарушение секреторной и моторной функций желудочно-кишечного тракта. Температура тела больных животных обычно нормальная или субнормальная. При остром течении болезни летальность достигает 90 %.

В зависимости от вида животных и количества токсина, попавшего в организм животного, болезнь протекает молниеносно, остро и хронически. Молниеносное течение болезни чаще отмечается у лошадей, при этом животное погибает в течение нескольких часов. Больное животное лежит на боку, делает попытки встать, поднимает голову, но опять валится на бок и погибает. Иногда совершенно здоровых с вечера животных утром находят мертвыми. Диагностировать молниеносную форму болезни очень трудно – ввиду отсутствия характерных признаков болезни. Синдром бульварного паралича при этой форме болезни наблюдается редко.

Острое течение болезни длится у лошадей 2–3 суток. При этом наиболее четко выражен симптомокомплекс болезни, особенно паралич языка, который торчит изо рта или свободно висит при опущенной парализованной нижней челюсти. Хроническое течение болезни, которое нередко отмечается у лошадей, длится 10 и более дней и характеризуется параличом языка и глотки. Основные признаки болезни – затрудненность движений и неуверенность походки.

При хроническом течении болезни животные постепенно выздоравливают.

У крупного рогатого скота болезнь чаще протекает и острой форме и длится до 3–6 дней. У больных отмечают одышку, общую мышечную слабость, паралич задних конечностей, языка, глотки, гортани, слюнотечение, затруднение жвачки, зловонную отрыжку. Надои резко сокращаются или совсем прекращаются. При хроническом течении болезни нередко поражаются легкие. У крупного рогатого скота иногда отмечается самовыздоровление.

У пушных зверей наблюдают слюнотечение, паралич задних конечностей, языка, глотки, общее расслабление скелетной мускулатуры.

Патологоанатомические изменения. Патологоанатомические изменения при ботулизме не специфичны. Кровь плохо свернувшаяся, лаковая. Внутренние органы и лимфатические узлы увеличены в объеме и полнокровны. Иногда легкие отечны, в осложненных случаях отмечают изменения, характерные для пневмонии. В желудочно-кишечном тракте находят изменения, характерные для катарального воспаления. На слизистой тонких кишок встречаются кровоизлияния.

Наиболее характерными патологоанатомическими изменениями у павших от ботулизма лошадей являются выпадение из ротовой полоски припухшего языка и изменение гортанных хрящей и зева с множеством больших и малых кровоизлияний.

Диагноз. Диагноз ставят на основании симптомокомплекса болезни с учетом эпизоотологических данных и подтверждают лабораторными исследованиями. Наличие характерных признаков болезни позволяет легко установить диагноз, особенно при одновременном заболевании большого количества животных. Однако каждый случай заболевания необходимо подтвердить обнаружением токсина или выделением возбудителя.

Для лабораторного анализа направляют остатки корма, вызвавшего отравление (у крупных животных), рвотные массы (у собак, кошек). После гибели животного исследуют содержимое желудка, кишечника, лимфоузлы, головной мозг, селезенку. Чтобы избежать инактивации токсина, каждый вид материала помещают в отдельную банку темного стекла (или обертывают банку черной бумагой), герметично закрывают. Поступивший материал в лабораторию исследуют бактериологически с целью выделения культуры, биологически для обнаружения токсина возбудителя. Также для серологического диагноза используют реакцию нейтрализации токсинов гомологичными антитоксическими сыворотками.

Профилактика. В странах, где ботулизм распространен среди лошадей, крупного рогатого скота или других видов животных, практикуется их иммунизация ботулиническими анатоксинами типов А, В, С, D. В нашей стране ботулизм регистрируется в основном среди пушных зверей (норок), ихиммунизируют квасцовым концентрированным анатоксином (анакультурой) типа С, предложенным И. А. Бузиновым и Л. С. Новиковой в 1965 г. и усовершенствованным Л. В. Кирилловым и С. М. Тимошенко в 1971–1972 гг.

Для медицинских целей выпускают антитоксическую сыворотку.

Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 1148; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 28 29 30 31 323334 35 36 37 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!