Список рекомендуемой литературы к главе 10.4

1. Анализ образцов пищевых продуктов на присутствие генетически модифицированных организмов/ Сессия 6/ Полимеразная цепная реакция (ПЦР), М.Сомма, М.Кверчи, ВОЗ, Европейское региональное бюро. http://gmo-rl.jrc.ec. – europa.eu/capacitybuilding/.

2. ГОСТ Р ИСО 16140–2008 «Микробиология продуктов питания и кормов для животных». Протокол валидации альтернативных методов (ISO 16140:2003). – М.: Стандартинформ, 2009.

3. ДНК-полимераза/ http://enc.scilib.com/article0001408.html.

4. 3M Molecular Detection System – Система молекулярного обнаружения патогенов/ www.mibio.ru.

5. Постановление государственного санитарного врача РФ от 19.03.2010 № 21 «О профилактике острых кишечных инфекций» /base.garant.ru/12175294/.

6. Хрянин А.А., Решетников О.В., Кривенчук А.Н., Алексенцев В.А. Принцип метода амплификации ДНК: преимущества и недостатки // Клиническая лабораторная диагностика. 2005. № 4. С. 20, 37–39.

7. David Rodriguez-Lazaro and Marta Hernandez/ Real-time PCR in Food Science: Introduction. http://www.horizonpress.com/pcr- food.

8. Little M. C., Andrews J., Moore R., Bustos S., Jones L., Embres C. et al. Strand displacement amplification and homogeneous real-time detection incorporated in a second-generation DNA probe system, BDProbeTecET // Clinical Chemistry. 1999. V. 45. P. 777–784.

9. MOLECULAR DIAGNOSTICS. Edited by George P. Patrinos & Wilhelm Ansorge. www.sciencedirect.com/science/book/978012 3745378. Norihiro Tomita, Yasuyoshi Mori, Hidetoshi Kanda & Tsugunori Notomi / Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) of gene sequences and simple visual detection of products // Nature Protocols. 2008. V. 3. P. 877–882.

10. Масс-спектрометрия http://ru.wikipedia.org/wiki/

11. Лапыш М. Е., Игнатов С. Г., Брезгунов В. Н., Волошин А. Г., Бунин В. Д., Светогоров Д. Е., Щепкина А. Н. Использование электрооптического метода для оперативного определения жизнеспособности бактериальных клеток.// Микробиол. – 1989. – Т. 58. – № 3. – С. 515–517.

12. Волошин А. Г., Лапыш М. Е., Игнатов С. Г., Бунин В. Д. Использование электрооптического метода для контроля бактериальных препаратов. Прикладная биохим. и микробиол. – 1996. – Т. 32. – № 6. – С. 669–670.

13. Игнатов С. Г., Волошин А. Г., Бунин В. Д., Дятлов И. А. Электрооптический анализ в микробиологии.// Монография – Оболенск, ГУП МО «Серпуховская типография» – 2007. – С. 1–161.

14. Dubrovin E. V., Voloshin A. G., Kraevsky S. V., Ignatyuk T. E., Abramchuk S. S., Yaminsky I. V., Ignatov S. G. Atomic Force Microscopy Investigation of Phage Infection of Bacteria.// Langmuir. – 2008. – V. 24. – № 22. – P. 13068–13074.

15. Ignatov S. G., Voloshin A. G., Filippovich S. Yu, Walt R. D. Bacteria detection – biosensors.// In book: Sensors for Environment, Health and Security. M.-I. Baraton (ed.), © Springer Science + Business Media B. V. – 2009. – P. 267–276.

16. Волошин А.Г., Филиппович С.Ю., Бачурина Г.П., Бесаева С.Г., Игнатов С.Г. Спектрометрический анализ летучих компонентов микроорганизмов // Приклад. биохим. и микробиол. – 2010. – Т. 46. – №3. – С. 331–335.

17. Игнатов С.Г., Волошин А.Г., Федюкина Г.Н., Баранова Е.В., Ганина Е.А., Мочалов В.В., Перовская О.Н., Дубровин Е.В., Краевский С.В., Игнатюк Т.Е. Специфическая АСМ визуализация бактериальных нанофрагментов.// Международный форум по нанотехнологиям. Сб. тезисов докладов научно-технологических секций, т. 2. Москва. – 2008. – С. 150–151.

Глава 11. РАЗВИТИЕ УЧЕНИЯ О ПАТОГЕНАХ

На ранних этапах развития науки врачи и естествоиспытатели стремились выяснить причины инфекционных болезней, В трудах Гиппократа (460–377 гг. до н. э.), Варрона (116–27 гг. до н. э.), Лукреция (95–55 гг. до н. э.), Плиния (23–75 гг. н. э.), Галена (131–211 гг. н. э.) и других крупнейших ученых того периода уже была высказана гипотеза о живой природе (contagium vivum) возбудителей заразных заболеваний.

Народы Азии имели определенные представления о заразно­сти лепры (проказа) и проводили изоляцию больных этой инфекцией. Авиценна (980–1037 гг. н. э.) считал, что причиной возникновения заразных болезней являются невидимые простым глазом мельчайшие живые существа, передающиеся через воду и воздух.

Эпоха феодализма характеризовалась тем, что в продолжение всего Средневековья в Европе свирепствовали эпидемические болезни – оспа, чума, сыпной тиф и др. Инфекционные заболевания получили особенно широкое распространение в странах Европы и Малой Азии во времена крестовых походов. О причинах инфекционных болезней, путях их передачи и средствах борьбы с ними люди имели превратные представления. Лишь с колоссальными трудностями, подвергаясь гонениям со стороны церкви, передовые умы того времени шаг за шагом пробивали дорогу науке, основанной на опыте.

Природа инфекционных болезней и борьба с ними. Исследования Д. С. Самойловича, Э. Дженнера.Уже на первых этапах развития микробиологии былисделаны попытки связать ее с практическими задачами борьбы с эпидемическими заболеваниями. Русский врач Д. С. Самойлович вопреки идеалистическим взглядам, господствовавшим в ту эпоху, смело высказал мысль о том, что “чу­ма вызывается особливым и совсем отменным существом”. Опираясь на свой богатый опыт борьбы с чумой, он пришел к заключению, что для предупреждения этого заболевания следует вводить в организм ослабленное заразное начало. Чтобы доказать правильность своего предложения, он самоотверженно произвел опаснейший опыт, привив себе в 1771 г. заразный материал, взятый от человека, выздоравливающего от бубонной формы чумы. За глубокое изучение чумы Д. С. Самойлович был избран почетным членом многих западноевропейских академий.

Высказанные Д. С. Самойловичем положения относительно причины инфекционных болезней сыграли большую роль в дальнейшей разработке теоретических и практических вопросов профилактики чумы и многих других заразных болезней.

Английский врач Э. Дженнер (1749–1823) в 1796 г. показал, что прививки людям возбудителя коровьей оспы предохраняют их от заражения натуральной оспой. Предложенный Э. Дженнером метод вакцинации вооружил медицину могущественным средством для успешной борьбы с этой болезнью. Однако открытие Э. Дженнера носило чисто эмпирический характер, и сущность его оставалась неясной до работ Л. Пастера.

Расцвет микробиологической науки во второй половине XIX века.Развитие промышленного капитала обусловило бурный рост естествознания и технических наук, в том числе микробиологии. Уже в первой половине ХIХ века были открыты некоторые микроорганизмы – возбудители инфекционных заболеваний. В 1839 г. И. Шенлейн установил, что фавус (парша) вызывается болезнетворным грибом, в 1843 г. Д Груби обнаружил возбудителя трихофитии (стригущий лишай), в 1849–1854 гг. А. Поллендером, К. Давеном и Ф.А. Брауэллем был открыт микроб сибирской язвы. Во второй половине XIX века появились более усовершен­ствованные микроскопы, намного улучшилась техника микроскопирования. В изучении микроорганизмов стали уделять внимание биохимическим процессам – способности микробов ферментировать органические вещества.

Л. Пастер блестяще под­твердил предсказание физика и химика XVII века Р. Бойля о том, что природу заразных болезней поймет тот, кто объяснит природу брожения. Л. Пастер доказал ферментативную приро­ду спиртового (1860), молочнокислого и маслянокислого (1861) брожения, у некоторых микробов обнаружил новый (анаэроб­ный) тип дыхания. Он установил, что и гниение вызывается деятельностью определенных видов микроорганизмов.

Большое значение имеют работы Л. Пастера о болезнях вина, пива, шелковичных червей (пебрина) и мерах борьбы с ними. Полученные им данные легли в основу развития промышленной микробиологии. Исследования Л. Пастера положили начало применению предохранительных прививок. Он получил вакцины против куриной холеры, сибирской язвы и бешенства.

Благодаря усовершенствованию техники и методики микробиологических исследований Р. Кох оконча­тельно установил этиологию сибирской язвы (1876), открыл возбудителей туберкулеза (1882) и холеры (1883), получил из туберкулезных микобактерий туберкулин.

Р. Кох произвел подробное исследование раневых инфекций, разработал способ выделения в чистой культуре патогенных бактерий. Он создал крупную школу микробиологов. Его учениками были К. Эберт, г. Гаффки, Э. Клебс, Ф. Леффлер, С. Китазато и многие другие.

В развитии медицинской микробиологии большие заслуги принадлежат ученым, открывшим возбудителей многих инфек­ционных заболеваний (см. табл. 5).

В XX веке сделаны весьма важные открытия в обла­сти специфической профилактики заразных болезней. В 1924–1925 гг. г. Район разработал метод изготовления анатоксинов (обезвреженных формалином токсинов), с по­мощью которых стали успешно проводиться прививки против дифтерии и столбняка. Были получены вакцинные препараты из живых, но ослабленных возбудителей против туберкулеза (Кальметт А., Герен Ш., 1919), чумы (Жирар Г., Робик К., 1931), желтой лихо­радки (Тейлер М., 1936), ту­ляремии (Н. А. Гайский, Эльберт Б.Я., 1942), поли­омиелита (Себин А., 1955) и ряда других инфекционных заболеваний.

Высокой оценки заслужи­вают работы, позволившие открыть сальварсан (П. Эрлих), бактериофаги (Ф. д’Эррель), сульфаниламиды (Г. Домагк и др.), пеницил­лин (А. Флеминг, Э. Чейн, г. Флори), стрептомицин (З. Ваксман, А. Шатц, Э. Буги) и другие препараты, благодаря применению кото­рых, современная медицина достигла больших успехов.

Таблица 5. Даты открытий возбудителей важнейших инфекционных заболеваний.

Годы	Авторы	Микроорганизмы
1839	И. Шенлейн	Возбудитель фавуса
1843	Д. Груби	Возбудитель трихофитии
1849–1854	А. Поллендер, К. Давен, Ф.А. Брауэлл	Бациллы сибирской язвы
1868–1873	О. Обермейер	Боррелии возвратного тифа
1873–1874	Г. Ганзен	Микобактерии лепры
1874–1885	Т. Бильрот, Л. Пастер, А. Огстон, Ф. Фелейзен, Ф. Розенбах, Ш. Шамберлан, А. Вейксельбаум	Патогенныестрептококки
1875	Ф.А. Леш, Ф. Шаудин	Возбудитель амебиаза
1877–1916	Л. Пастер, К. Жубер, Р. Кох, г. Неттал, Ф. Нови, М.Вейнберг, К. Сеген	Клостридии анаэробнойинфекции
1878–1884	Р. Кох, Л. Пастер, А. Огстон, Ф. Розенбах	Патогенные стафилококки
1879	А. Нейссер	Гонококки
1880	К. Эберт, г. Гаффки	Сальмонеллы брюшного тифа
1882	Р. Кох	Микобактерии туберкулеза
1882	С. Фриш, Н. Волкович	Возбудитель риносклеромы
1882	Ф. Леффлер, Х. Шютц	Возбудитель сапа
1883	Р. Кох	Холерный вибрион
1883–1884	Э. Клебс, Ф. Леффлер	Коринебактерии дифтерии
1884	Ф. Розенбах	Возбудитель эризипелоида
1884–1889	А. Николайер, С.Китазато	Клостридии столбняка
1885	Т. Эшерих	Кишечная палочка
1885–1898	Л. Сальмон, А. Гертнер, К. Кенше, Ж. Нобель	Возбудители сальмонеллезов – пищевых токсико-инфекций
1885	К. Френкель	Возбудители крупозной пневмонии
1885–1899	П. Феррари, О. Петерсен, А. Люкрей, П. Унна	Палочка мягкого шанкра
1886–1914	Д. Брюс, Б. Банг, Д. Траум	Бруцеллы
1887	А. Вейксельбаум	Менингококк
1887	К. Гарц	Возбудитель актиномикоза
1888	К. Фридлендер	Клебсиелла пневмонии
1888	В. Картер	Возбудитель содоку (болезниукуса крыс)
1891–1892	М.И. Афанасьев	Гемофильная бактерия
1891–1898	А. Шантемес, Ф. Видаль, К. Шига, С. Флекснер, К. Зонне	Бактерии дизентерии
1900–1917	К. Шмитц, М.И. Штуцер	Бактерии дизентерии
1892	Д.И. Ивановский	Вирус мозаичной болезни табака
1892–1906	Г. Гуарниери, Э. Пашен	Вирус натуральной оспы
1893	Р. Абель	Клебсиелла озены
1894	А. Иерсен	Возбудитель чумы
1896	Ш. Ашар, Р. Бансод, г. Шоттмюллер, А. Брион	Сальмонеллы паратифов А и В
1896	Э. Ван Эрменгем	Клостридии ботулизма
1897	Ф. Леффлер, П. Фрош	Вирус ящура
1898–1903	В. Бабиш, А. Негри	Внутриклеточные включения при бешенстве (тельца Бабеша-Негри)
1901	У. Рид	Лейшмании
1902	Дж. Даттон, Ж. Стивенс	Возбудитель сонной болезни
1904–1913	Р. Росс, Е. Джунковский	Боррелии клещевоговозвратного тифа
1905	Ф. Шаудин, Э. Гофман	Трепонема сифилиса
1906	Ф. Готшлих	Холерный вибрион Эль-Тор
1906	Ж. Борде, О. Жангу	Палочка коклюша
1908–1909	К. Ландштейнер, Э. Поппер	Вирус полиомилита
1911–-1917	Х. Арагао, Э. Паше	Вирус ветряной оспы
1912	А. Уайтмор, К. Кришнасвами	Возбудитель мелиоидоза
1914–1915	Р. Инадо и др.	Возбудитель лептоспироза
1933	У. Смит, К. Эндрюс и П. Ледлоу	Вирус гриппа
1926	Э. Маррей	Листерии
1933	К. Майер	Возбудитель орнитоза

Глава 12. ПАТОГЕННЫЕ КОККИ

Общая характеристика. Патогенные кокки (k о kk о s (греч.) – зерно) относятся к отделу Firmicutes, к классу Schysomicetales, к семействам Microcоcacceae, Diplococcaceae и родам Staphylococcus u Streptococcus.

Кокки широко распространены в природе. Они обитают на слизистых и кожных покровах, на растениях, в молочной железе, высокоустойчивы к неблагоприятным факторам и чувствительны к анилиновым красителям. Кокки обладают токсичностью. Некоторые из них, особенно стафилококки, являются условно патогенными. Они обладают органотропностью.

По классификации Берджи (1974) кокки относятся к трем семействам: Micrococcaceae (микрококки, стафилококки, тетракокки, сардины), Streptococcaceae (стрептококки, пептострептококки) и Neisseriaceae (нейссерии, вейлонеллы). В этой обширной группе микроорганизмов встречаются как сапрофиты, обитающие во внешней среде, в организме человека и животных, так и патогенные виды, вызывающие различные гнойные заболевания. Полагают, что патогенные свойства были приобретены кокками в процессе эволюции, в результате которой они приспособились к паразитическому существованию в организме человека и животных. К патогенным коккам относятся стафилококки (Staphylococcus), стрептококки (Streptococcus), пневмококки (Diplococcus pneumoniae), менингококки (Neisseria meningitidis) и гонококки (Neisseria gonorrhoeae). Все они могут вызывать гнойно-воспалительные процессы, поэтому их называют гноеродными кокками. Однако гноеродные свойства у отдельных представителей выражены неодинаково. Все патогенные кокки неподвижны, спор не образуют. По тинкториальным свойствам различают грамположительные (стафилококки, стрептококки, пневмококки) и грамотрицательные (менингококки и гонококки) кокки. Отличаются они по степени паразитирования. Менее всего выражены паразитические свойства у стафилококков, которые существуют как сапрофиты на коже и слизистых оболочках или вызывают гнойно-воспалительные процессы любых органов и тканей. Стрептококки также встречаются на коже и слизистых оболочках человека, но у них уже намечается способность существовать в тех или иных тканях и вызывать, помимо различных гнойных процессов, специфические заболевания (рожа, скарлатина, ревматизм). Еще больше такая органотропность выражена у пневмококков, которые встречаются на слизистых оболочках верхних дыхательных путей и являются возбудителями крупозной пневмонии и других патологических процессов легких, реже среднего уха и мозговых оболочек. Наиболее резко выражена специфичность локализации у менингококков и гонококков, которые вызывают заболевания только у человека. Менингококки обитают на слизистой оболочке носоглотки. Проникая в мозговые оболочки, они вызывают менингит. Гонококки поражают слизистую оболочку мочеполовых путей (гонорея) и конъюнктиву глаза (бленнорея).

Таким образом, приспособление к отдельным тканям и органам у патогенных кокков служит проявлением степени паразитизма: по мере его возрастания обнаруживается резко выраженная органотропность. Это отражается на возможности культивирования и на их ферментативной активности. Стафилококки хорошо растут на простых питательных средах и обладают большой биохимической активностью. Стрептококки плохо растут на простых питательных средах и менее биохимически активны. Пневмококки, менингококки и гонококки не растут на простых питательных средах – для их культивирования необходимы среды, содержащие нативный белок. Ферментативная активность их незначительна, особенно у менингококка и гонококка. С увеличением паразитических свойств кокков снижается их устойчивость во внешней среде. Стафилококки и стрептококки довольно устойчивы к высушиванию, низким температурам, действию химических веществ. Менее резистентны пневмококки, а гонококки и менингококки быстро погибают во внешней среде.

Биологические особенности патогенных кокков весьма разнообразны:

1) кокки различных видов вызывают аналогичные инфекционные процессы, сопровождающихся нагноением;

2) кокки одинакового вида часто являются причиной различных инфекционных процессов от местного воспаления до множественных абсцессов и сепсиса;

3) части видов значительно выражена органотропность (диплококки чаще других видов вызывают пневмонию, мытный стрептококк – воспаление шейных лимфоузлов и протоков; менингококки – воспаление оболочек спинного и головного мозга у человека);

4) кокки нередко обуславливают кормовые и пищевые токсикоинфекции;

5) все патогенные кокки в большей или меньшей степени токсичны.

Патогенные кокки вызывают множество заболеваний (см. табл. 6).

Патогенные кокки участвуют в проявлении ассоциативных инфекций, вызванных E.coli, клотридиями, Р. vuldaris.

Морфология. Кокки грамположительные (кроме менингококков и возбудителя гонореи) шаровидной формы, не образующие спор, неподвижные бактерии размером от 0,2–0,4мкм до 4,0–4,5 мкм.

Культивирование. Для роста на питательных средах кокки нуждаются в добавлении крови (плазмы крови) или асцитной жидкости, глюкозы.

Кокки анаэробы, факультативные анаэробы, растут на обычных питательных средах (МПА, МПБ.) при температуре 35–40 °С, при pН от 7,0 до 7,5.

Большинство кокков отличаются высокой биохимической активностью как по отношению к сахарам, так и белкам.

Таблица 6. Перечень болезней, вызванных кокками.

Стафилококки	Стрептококки	Диплококки	Энтерококки
Стафилококкоз кроликов	Стрептококковая сентицемия новорожденных	Диплококковая пневмония	Заболевания желудочно-кишечного тракта
Стафилококкоз птиц	Стрептококкоз свиней	Диплококковая сентицемия
Гнойные заболевания: карбункул, фурункул, флегмона, абсцесс, артрит, эндометрит	стрептококковая пиемия жеребят, стрептококкоз птиц, стрептококкоз кроликов, стрептококковый полиатрит ягнят.	Диплококковый энтерит
	Мыт лошадей, Инфекционный мастит коров
	Гнойные заболевания
Токсиноинфекции

Антигенная структура. У стафилококков антигенностью обладает клеточная стенка, содержащая пептидогликан, тейховые кислоты и белок А.

Белок А представлен низкомолекулярным белком, способным соединяться с Fс – фрагментом Jg G млекопитающих. Количество белка А у штаммов коррелирует с резистентностью к фагоцитозу.

По аналогичной структуре все стрептококки подразделяются на 17 серологических групп. В основу антигенной классификации положены свойства полисахарида (С – вещество) клеточной стенки стрептококков и белковые антигены (группы А). Практический интерес представляют серогруппы А, В, С, Д, Е, F.

Токсигенность Патогенные кокки продуцируют гемотоксин различного действия: альфа-, бета-, гамма-, дельта- гемолизины. Лейкоцидин вызывает дегрануляцию и разрушение лейкоцитов и угнетает их фагоцитарные свойства. Стафилококки образуют энтеротоксины – термостабильные пептиды, которые вызывают кормовые и пищевые токсикозы.

Кроме экзотоксинов кокки продуцируют ферменты патогенности: гиалуронидазу, фибринолизин, дезоксикарбоксилазу и др.

Патогенез. Основная роль в патологии животных и человека принадлежит S. aureus, реже S. epidermidis, S. equi, S. pyogenes, S. agalactiae, S. pneumoniae.

Патогенные кокки проявляют свое патогенетическое действие чаще всего в ослабленном организме и при иммунодефицитных состояниях. Характер патогенетического процесса зависит как от вирулентности возбудителей, так и от уровня неспецифических факторов защиты организма.

Кокки проникают в организм через поврежденную кожу, слизистые оболочки, алиментарно, у коров – черeз сосковый канал. Возбудители за счет высокой токсичности и действия ферментов патогенности вызывают местную воспалительную реакцию, чаще гнойного типа, а также септический процесс.

11.

12.

Стафилококки

Стафилококк впервые выделен из гноя фурункула человека Л. Пастером в 1880 г., изучен и описан Розенбахом в 1884 г.

В настоящее время различают S. aureus, S. epidermidis и S. saprophyticus. Из трех видов патогенным является Staphilococcus aureus.

Патогенность. В патологии животных этиологическая роль стафилококков за пос­леднее время значительно возросла. Эти микробы часто вызывают мастит, послеродовой эндометрит у коров, пневмонию, септицемию, энтерит у молодняка, абсцессы, флегмоны, артриты, гнойное воспале­ние ран. У кур данный микроб является возбудителем септического за­болевания – стафилококкоза, сопровождающегося массовой гибелью птицы. У лошадей, свиней и реже у крупного рогатого скота стафило­кокки обусловливают развитие ботриомикоза, характеризующегося формированием в семенном канатике после кастрации гнойных очагов, окруженных плотной капсулой.

Устойчивость стафилококков к неблагоприятным факторам внеш­ней среды высокая. Они превосходно переносят высыхание, оставаясь жизнеспособными в гнойном экссудате до 200 дней, длительно сохра­няются в навозе, замораживание их консервирует. На питательных средах, в частности на полужидком агаре, сохраняются без пересевов более шести месяцев. При нагревании, например в молоке, погибают при температуре 70° С через 1 ч., при 85° С – через 30 мин, кипячение убивает их мгновенно. Из дезинфицирующих веществ 1 %-ный раствор формалина и 2 %-ный раствор едкого натра убивает этих микробов в течение 1 ч., а 1 %-ный раствор хлорамина – в течение 2–5 мин. Наибо­лее чувствительны стафилококки к кристаллвиолету, пиоктанину, малахитовой зелени, которые в концентрации 1 : 300 000 обладают выраженным бактериостатическим действием, что позволяет с успехом использовать эти краски при стафилококковых поражениях кожи, фурункулезе, нагноении ран. Весьма устойчивы стафилококки к анти­биотикам, особенно пенициллину, стрептомицину, а также сульфани­ламидным препаратам. Учитывая высокую устойчивость стафилокок­ков, их используют в качестве тест-объекта при испытании различных бактерицидных веществ – новых антибиотиков или дезинфицирующих веществ.

Иммунитет при стафилококках носит преимущественно антитокси­ческий характер. Подтверждением этого является выраженный эффект от применения противостафилококковой антитоксической сыворотки. В естественных условиях в организме животных, перенесших стафилококковую инфекцию, накапливаются антитоксины, что обусловливает их повышенную устойчивость к повторным заболеваниям.

Диагностика. Для определения этиологической роли стафилококков в различных патологических процессах при жизни животных исследу­ют раневой экссудат, гной абсцессов, ран, молоко при маститах, выде­ления из половых органов при эндометрите, кровь из яремной вены при септицемии. Из патологического материала готовят мазки, окрашива­ют фуксином Пфейфера, по Граму и микроскопируют. Одновременно делают посевы на кровяной и молочно-солевой агар в чашки Петри. Из выросших колоний производят отсев на МПА в пробирках для выделе­ния чистой культуры и ее идентификации, ставят реакцию плазмокоагуляции с чистой культурой, для чего кровь кролика смешивают с 5 %-ным раствором лимоннокислого натра. Полученную плазму разво­дят 1 : 4 физраствором, разливают по 0,5 мл в стерильные пробирки, засевают исследуемой культурой и ставят в термостат (37 °С) на 3 ч. Реакцию учитывают через 1–2–3–18 ч. Свойство свертывать цитратную плазму крови кролика является характерной особенностью пато­генных стафилококков.

Наличие гемолитического токсина стафилококков определяют по следующей методике: выделенную культуру выращивают на казеино­вом бульоне в течение 5 суток в эксикаторе с содержанием в атмосфе­ре выращивания 20 % СО₂. Затем культуру центрифугируют, верхний слой отсасывают, разводят физраствором 1 : 10, 1 : 20, 1 : 40, 1 : 80, 1 : 160, 1 : 320, разливают в пробирки по 1 мл и добавляют по одной капле эритроцитов кролика, трижды отмытых физраствором и разведен­ных 1 : 2. Пробирки выдерживают в термостате при 37° С 1 ч. и такое же время при комнатной температуре и учитывают наличие гемолиза.

Потенциальную гемолитическую способность стафилококков вы­являют на кровяном агаре подобно КАМП-тесту.

Дермонекротические свойства определяют на кроликах, для чего готовят взвесь стафилококков в физрастворе с содержанием в 1 мл 2 и 4 млрд. микробов и вводят внутрикожно кролику в выбритую кожу в дозе 0,1 мл. Наличие некроза в местах инъекции учитывают на четвер­тые сутки.

Фаготипирование стафилококков проводят набором 22 типовых стафилококковых бактериофагов, которые по литическому родству составляют четыре группы. Размножают каждый тип фага на соответствующем штамме стафилококка. Для типирования выделенной культу­ры ее выращивают на глюкозном бульоне, затем высевают на глюкозный агар в чашку Петри, разделенную на четыре квадрата, в каждый из них наносят петлю бактериофага, принадлежащего к одной из указан­ных выше групп. С помощью фаготипирования можно идентифициро­вать стафилококки, выделенные из различных источников.

Стрептококки

---

Дата добавления: 2019-09-13; просмотров: 255; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

---

---

Мы поможем в написании ваших работ!