ДИНАМИКА НЕКОТОРЫХ МАРКЕРОВ АПОТОЗА В ПОЧЕЧЕНОЙ ТКАНИ КРЫС ПРИ ОСТРОМ ИММОБИЛИЗАЦИОННОМ СТРЕССЕ И ВЛИЯНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ АЛЛОГЕННЫХ МЕЗЕНХИМАЛЬНЫХ СТВОЛОВЫХ КЛЕТОК
Научный руководитель д-р мед. наук, проф. Бойченко П. К.
Кафедра медицинской химии
ГОСУДАРСТВЕННОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ЛУГАНСКОЙ НАРОДНОЙ ЕСПУБЛИКИ «ЛУГАНСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ МЕДИЦИНСКИЙ УНИВЕРСИТЕТ ИМЕНИ СВЯТИТЕЛЯ ЛУКИ», г. Луганск
Актуальность. Почки, являясь одними из главных компонентов системы адаптации организма человека, крайне чувствительны к действию различных экзогенных факторов. Одним из таких факторов является иммобилизационный стресс. Острая иммобилизация способствует развитию микроциркуляторных нарушений и, как следствие, развитию гипоксии, что вызывает изменения в прооксиданто-антиоксидантном равновесии, количество активных форм кислорода, а также активность нитроксидергической системы, ответсвенной за контроль апоптоза. Одним из вариантов коррекции данных изменений выступает применение аллогенных мезенхимальных стволовых клеток.
Цель: изучить влияние применения аллогенных МСК на ренальных апоптоз по динамике таких биохимических маркёров как оксид азота и уровень фрагментации ДНК после острой иммобилизации.
Материалы и методы. Объектами исследования были 195 самцов беспородных белых крыс массой 200±25 грамм. Стресс моделировали однократной 24-часовой иммобилизацией, помещая животных в индивидуальные фиксирующие камеры. Клетки костного мозга получали путем вымывания питательной средой полостей бедренных костей взрослых крыс. Клетки культивировали в питательной среде «ИГЛА-МЕМ» с L-глутамином, 10% тельчей эмбриональной сывороткой и антибиотиками на протяжении 14 суток в условиях СО2-инкубатора с заменой половины среды каждые 5 дней. Жизнеспособность оценивали по тесту с трипановым синим. Для фенотипирования культуры использовали метод непрямой флюоресценции с помощью маркеров к МСК. Животных разделили на 3 группы: № 1 – интактные крысы (n = 15); № 2 – крысы, подвергшиеся 24-часовой иммобилизации (контроль) (n = 90), № 3 – крысы, которым после иммобилизации вводили по 5 млн МСК (n = 90). Крыс декапитировали под легким эфирным наркозом на 1, 3, 7, 14, 21 и 30 сутки после иммобилизации. Извлекали почки, гомогенизировали в среде выделения. Суммарную концентрацию нитратов и нитритов устанавливали реакциейГрисса на спектрофотометре СФ-46 (длина волны 540 нм). Количество фрагментированной ДНК определяли цветной дифениламиновой реакцией с последующей спектрофотометрией на СФ-46 (длина волны 570 нм).Данные обрабатывали программой «Statistica 10.0» по критерию Манна-Уитни. Результаты расценивались как достоверные при р<0,05.
Результаты и их обсуждения. В ходе исследования установлено, что 24-часовая иммобилизация вызывает резкое увеличение суммарного содержания конечных метаболитов оксида азота (NOx) и уровня фрагментации ДНК в гомогенатах почечной ткани крыс, которые существенно изменяются после применения МСК. Так NOx довольно сильно возрос относительно интактных значений на 1 и 3 сутки как в группе № 2 (на 122,44% и 136,36%, р<0,001), так и в группе № 3 (на 122,73% и 130,86%, р<0,001). В дальнейшем в группе № 2 этот показатель постепенно снижался, но был достоверно выше значений интактной группы на 7 сутки на 109,94%, на 14 – на 84,375%, на 21 – на 60,51% (р<0,001). К 30 суткам эксперимента между показателями интактной и контрольной группы статистическая разница отсутствовала. У крыс, которым произвели введение МСК, уровень NOx на 7 сутки достоверно снижался на 21,38%, на 14 сутки – на 33,59%, на 21 сутки – на 33,27%, на 30 сутки – на 20,8% относительно контрольных значений (р<0,001). С 21 суток исследования показатели группы экспериментальной группы статистически не отличались от интактных цифр. Уровень фрагментации ДНК в 1 и 3 сутки после иммобилизации увеличился в группе № 2 на 225,75% и 329,66% (р<0,001), в группе № 3 на 229,66% и 309,95% (р<0,001) относительно интактных значений. У крыс групп № 2 цифры фДНК превышали интактные на 7 сутки на 289,87%, на 14 сутки – на 260,75%, на 21 сутки – на 160,03% (р<0,001). У крыс группы № 3 на 7 сутки уровень фДНК превышал интактные значения на 184,01% (р<0,001), но был ниже контрольных на 28,13% (р<0,05). На 14 и 21 сутки исследования уровень фДНК у крыс экспериментальной группы достоверно превышал значения группы № 1 на 111,19% и 58,08% (р<0,05), но был ниже контрольных на 41,46% и 39,21% (р<0,001). К концу эксперимента показатели фДНК у крыс групп № 3достигли интактных цифр.
Выводы. В ходе работы установлено, что острая 24-часовая иммобилизация приводит к усилению апоптоза в паренхиме почек крыс, что подтверждается повышением уровня таких его маркеров, как монооксид азота и фрагментированная ДНК. Применение аллогенных МСК способствует более быстрому восстановлению некоторых биохимических показателей ткани, а, следовательно, и функционального состояния почек крыс экспериментальной группы по сравнению с контрольной.
УДК 577.121:611-018.16:616-092.9
Дата добавления: 2019-08-30; просмотров: 163; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!