Тема: Методы микробиологического исследования воды и почвы.
Цель работы: Ознакомиться с правилами взятия и пересылки проб воды и почвы для исследования. Определить общее количество живых микроорганизмов в 1 г почвы или 1 мл. воды.
Оборудование и материалы. Стерильные колбы с пробкой, пробирки с 9 мл стерильной воды в каждой, стерильных чашки Петри, завернутые в бумагу, стерильные пипетки (на 2 мл каждая), пробирки с расплавленным МПА, по 12 мл в каждой, микробиологические петли, предметные и покровные стекла, раствор Люголя, кедровое масло, спиртовки.
Задания:
- Провести микробиологическое исследование воды из под крана.
- Сделать посевы воды для определения состава микрофлоры.
- Провести микробиологическое исследование почвы.
- Сделать разведения с почвенной суспензии.
- Сделать посевы разведения на различные питательные среды.
Методические указания.
МИКРОБИОЛОГИЧЕСКОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ ВОДЫ
Исследование воды проводят с целью выявления общей микробной загрязненности, обнаружения в ней патогенных микробов и установления наличия кишечной палочки (определение коли-титра). Воду для исследования берут из открытых водоемов и из водопровода. Взять воду из крана просто, труднее брать пробы воды на больших глубинах. Для этого существуют специальные приборы (батометры), которые опускают на тросах на определенную глубину. Там, на глубине, прибор открывается и в него набирается вода, после чего его поднимают на поверхность.
|
|
|
Взятие проб из открытых водоемов. При взятии проб воды необходимо соблюдать определенные правила.
1. Если имеется источник загрязнения, то из таких водоемов берут три пробы воды: выше источника загрязнения, против него и ниже по течению.
2. Пробы воды из колодцев берут 2 раза: утром до начала разбора воды и вечером после разбора.
3. Из рек, озер и прудов воду берут на глубине 0,5-1 м от поверхности и на расстоянии 1-2 м от берега.
Пробы воды берут в хорошо вымытые (желательно стерильные) стеклянные бутыли с притертыми пробками. Для анализа необходимо два и более литров воды. К каждой пробе воды прилагают сопроводительную ведомость, в которой отмечают:
1. Наименование источника и место его нахождения.
2. Год, месяц, число и час взятия пробы.
3. Место взятия пробы (расстояние от берега и глубина).
4. Температура воздуха, сведения об осадках в день взятия пробы и за последние десять дней.
5. Температура воды при отборе пробы.
6. Краткое описание водоема.
7. Для какой цели направляется.
8. Должность и место службы лица, взявшего пробу, и его подпись.
Пробы воды в лабораторию доставляют немедленно, зимой их предохраняют от замерзания, летом - от перегревания.
Исследование водопроводной воды. В течение 10-15 мин воду спускают из водопроводной трубы, после чего пламенем горелки (спиртовки) обжигают кран. Воду набирают в стерильную колбу. Заранее готовят две пробирки со стерильной водой, три стерильные чашки Петри и три пипетки.
|
|
|
Из колбы, в которую отобрана вода для исследования, пипеткой берут 2 мл; 1 мл вносят в первую стерильную чашку и 1 мл - в первую пробирку с 9 мл стерильной воды. Второй пипеткой воду перемешивают в первой пробирке. Получается разведение 1 : 10. Затем этой же пипеткой 1 мл разведения переносят но вторую стерильную чашку и 1 мл - во вторую пробирку с 9 мл стерильной воды, но не перемешивают. Третьей пипеткой перемешивают воду во второй пробирке (разведение 1:100) и 1 мл переносят в третью чашку.
После внесения в каждую чашку по 1 мл воды в разведениях 1:100, 1:10 и не разведенной выливают по 10-12 мл расплавленного и охлажденного до 45ºС МПА. Чашку быстро закрывают и вращательными движениями перемешивают расплавленный МПА с водой. На чашке (крышке) карандашом или специальными чернилами делают надписи с указанием даты посева, разведения, фамилии студента, под группы. Чашки переворачивают вверх дном и ставят в термостат при температуре 35—37ºС. По количеству выросших колоний, с учетом разведения, судят о содержании микробов к засеянном объеме воды.
|
|
|
КОЛИЧЕСТВЕННЫЙ УЧЕТ МИКРОБОВ В ПОЧВЕ
Микроорганизмы в почве распределены неравномерно. Поэтому для их учета в этой среде взятые образцы смешивают в стерильной банке. Из средней пробы 1 г почвы переносят в колбу с 99 мл стерильной водопроводной воды (получается разведение 10-2, его готовят заранее). Из разведения 10-2 1 мл переносят в пробирку с 9 мл стерильной водопроводной воды (получается разведение 10 -3 ) и т. д. Схема приготовления разведении:
1. 1 г почвы + 99 мл стерильной воды — 10 -2.
2. 1 мл разведения 10 -2 -|- 9 мл стерильной воды - 10 -3
3. 1 мл разведения 10 -3 + 9 мл стерильной воды - 10 -4.
4. 1 мл разведения 10 - 4 + 9 мл стерильной воды - 10 -5
Из последних разведении по 1 мл вносят в стерильные чашки, после чего заливают по 10-12 мл расплавленного и охлажденного до 45°С МПА, содержимое равномерно распределяют и оставляют на ровной поверхности. Чашки с застывшей средой переворачивают вверх дном и ставят в термостат. Через 3-4 дня подсчитывают выросшие колонии, умножают на разведение и определяют количество живых микроорганизмов в 1 г сырой почвы.
Для пересчета на 1 г абсолютно сухой почвы ее высушивают до постоянной массы, устанавливают влажность и вносят поправку.
Контрольные вопросы:
- Как отбирают пробы воды из открытых водоемов?
- Как отбирают пробы воды из водопровода?
- Как готовить разведения для учета почвенной микрофлоры?
- Как проводится посев микроорганизмов для определения микробов в почве?
Лабораторная работа № 18
Дата добавления: 2018-10-26; просмотров: 293; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!