Тема: Морфологические особенности дрожжей.
Цель работы: Изучить морфологические особенности дрожжей. Познакомиться с распространением и ролью дрожжей в природе и применением в народном хозяйстве.
Материал и оборудование: микроскоп, бактериологическая петля, препаровальные иглы, пинцет, предметные и покровные стекла, стерильные пипетки на 1-2 мл., кристаллизатор, капельница с водой, метиленовой синькой, водным фуксином, генциан-виолетовым, иммерсионным маслом и бензином, х|б салфетка, фильтровальная бумага, дезинфицирующий раствор, чистые культуры дрожжей родов Rhodotorula, Candida, Cryptococcus, Aureobasidium, Saccharomyces cerevisiae в жидкой культуре.
Задания:
1. Приготовить прижизненный препарат и мазок Saccharomyces cerevisiae и изучить: почкующиеся клетки, аски со спорами; зарисовать и обозначить их на рисунке.
2. Дать характеристику колоний и приготовить прижизненный препарат Rhodotorula, рассмотреть клетки, определить тип почкования; картину зарисовать и обозначить на рисунке.
3. Дать характеристику колоний и приготовить прижизненный препарат Candida, рассмотреть клетки, определить тип почкования; картину зарисовать и обозначить на рисунке.
4. Дать характеристику колоний и приготовить прижизненный препарат Cryptococcus, рассмотреть клетки, определить тип почкования; картину зарисовать и обозначить на рисунке.
5. Дать характеристику колоний и приготовить прижизненный препарат Aureobasidium, рассмотреть клетки, определить тип почкования; картину зарисовать и обозначить на рисунке.
|
|
|
Методические указания.
Дрожжи. Дрожжевые клетки морфологически довольно разнообразны. Они бывают округлыми, овальными, удлиненными или лимоновидными. Клетки дрожжей значительно крупнее бактериальных. Диаметр округлых форм колеблется в среднем от 4 до 12 микрон. Оболочка дрожжевых клеток в отличие от бактериальной легко различима в обычном световом микроскопе. Особенно четко видна оболочка при исследовании дрожжей с помощью фазово-контрастного устройства. В цитоплазме хорошо видны вакуоли. При специальной окраске в цитоплазме обнаруживается дифференцированное ядро, митохондрии (хондриосомы), гликоген, крахмал, капельки жира, волютин, основным компонентом которого являются полифосфаты. Клетки дрожжей грамположительны. На плотных питательных средах дрожжи растут в виде различных выпуклых, округлых или лопастных, гладких или складчатых, бесцветных, желтовато-оранжевых или ярко-розовых колоний мягкой консистенции. Форма и цвет колоний имеют значение для диагностики дрожжей. Размножение дрожжей осуществляется почкованием (Saccharomyces – сахаромицеты), делением - виды рода шизомицеты (Shizosaccharomyces). Кроме того, у многих делящихся и почкующихся дрожжей наблюдается половой процесс, связанный со спорообразованием. Дрожжи, способные к половому процессу, называется истинными дрожжами и относятся к классу сумчатых грибов (аскомицеты). В каждой клетке или аске образуются от двух до восьми иногда до 12 спор.
|
|
|
При характеристике морфологии дрожжевых грибов обычно различают макро- (изучают визуально) и микроморфологические (изучают с помощью микроскопа) признаки. Макроморфология включает культуральные признаки, характеризующие рост культуры на жидких или на плотных средах. Дрожжевые культуры, растущие на плотных средах, по консистенции бывают чаще всего пастообразными, а также слизистыми, иногда полностью стекающими на дно пробирки, вязкими, клейкими, кожистыми или крошащимися. Слизистый рост характерен для многих анаморфных базидиомицетовых дрожжей родов Rhodotorula, Cryptococcus. У большинства аскомицетовых дрожжей колонии пастообразные, сухие, культура при росте на скошенном агаре не стекает на дно пробирки. Для дрожжеподобных грибов, образующих как одиночные клетки, так и мицелий, характерны колонии с ворсинчатым краем, который хорошо просматривается при просвечивании.
У большинства дрожжей колонии белые, часто приобретающие при старении кремовый или слегка коричневый оттенок. Многие дрожжи образуют пигменты, окрашивающие их колонии в различные цвета из-за наличия каротиноидных пигментов.
|
|
|
При росте на жидких средах дрожжи вызывают помутнение, образуют осадок, кольцо на стенках пробирки, разного характера пленки.
Микроморфология дрожжей включает признаки, характеризующие отдельные клетки (форма, размеры), а также способы вегетативного и бесполого размножения и образуемые при этом структуры. Морфогенез дрожжевой клетки тесно связан со способом вегетативного размножения. У дрожжей различают два способа образования вегетативных клеток: артрический (талломный) и бластический (зародышевый). При артрическом способе мицелий дрожжеподобных грибов одновременно распадается на отдельные клеточные элементы – артроспоры. Бластический тип вегетативного размножения – это образование почек. По ультраструктурному механизму образования почек различают голобластическое (у аскомицетовых дрожжей) и энтеробластическое (у базидиомицетовых) почкование. По месту заложения почек различают полярное (биполярное) и многостороннее почкование.
У многих видов дрожжей в определенных условиях роста материнские и дочерние клетки после почкования не разъединяются, а продолжают почковаться. В результате возникает ложный мицелий (псевдомицелий).
|
|
|
Среди дрожжей есть виды, осуществляющие спиртовое брожение, виды, вызывающие заболевание растений, животных и человека.
Saccharomyces cerevisiae (аскомицетные дрожжи) имеет клетки овальные или круглые. Почкование истинное, многостороннее. Может формировать псевдомицелий. Диплоидизация происходит в результате слияния двух гаплоидных клеток (хологамия). Вегетативно размножаются в основном диплоидные клетки, которые могут образовывать аски (сумки). Аски круглые или овальные, при созревании спор не вскрываются.
Род Candida (аскомицетные дрожжи) самый крупный из дрожжевых грибов, включает около 200 видов (более 20% всех известных видов дрожжей). Представляет собой искусственную, филогенетически гетерогенную группу дрожжевых и дрожжеподобных организмов без полового размножения и каких либо иных выразительных морфологических признаков. Клетки округлые, овальные или удлиненные, иногда яйцевидные, треугольные или серповидные. Могут формировать псевдомицелий или истинный септированный мицелий. Артроконидии не образуют. Некоторые виды рода вызывают заболевания – кандидозы.
Виды рода Rhodotorula (базидиомицетные дрожжи)имеют красные, розовые, оранжевые или белые и кремовые колонии. Клетки круглые, овальные или удлиненные, у некоторых видов веретеновидные, сигаровидные. Вегетативное размножение многосторонним или полярным почкованием. Могут формировать псевдомицелий или истинный мицелий.
Видырода Cryptococcus (базидиомицетные дрожжи) имеют белые или кремовые, некоторые красные, желтые, оранжевые или бледно-розовые, у большинства видов слизистые колонии. Клетки преимущественно круглые, овальные или удлиненные, обычно капсулированные. Вегетативное размножение полярным или многосторонним почкованием. Могут формировать псевдомицелий или истинный мицелий.
Среди настоящих мицелиальных аскомицетовых грибов встречаются роды, которые в культуре растут в виде дрожжевых колоний в результате вегетативного размножения одиночных клеток, обильной фрагментации мицелия, или массового отпочковывания конидий. К ним относятся так называемые «черные дрожжи» из родов Aureobasidium, Hormonema, Botryomyces, Phaeotheca, Sarcinomyces и другие, образующие черные колонии при росте на питательных средах. Образование аскоспор у этих грибов в культуре наблюдается редко, в связи с чем их систематика строится в основном на способах образования конидий.
Морфологию дрожжей лучше изучать в прижизненных препаратах в раздавленной капле или микрокамере. Изготавливают препарат следующим способом:
На середину чистого предметного стекла наносят каплю дистиллированной воды или физиологического раствора. Стерильной бактериологической петлей или препаровальной иглой снимают воздушный мицелий гриба с поверхности питательной среды, переносят захваченный мицелий на предметное стекло в каплю воды. Мицелий разрывают на отдельные куски, препарат накрывают покровным стеклом, помещают на столик микроскопа и просматривают вначале, при малом, а затем при среднем увеличении микроскопа при опушенном конденсоре. Для лучшей видимости строения мицелия в каплю под предметное стекло добавить небольшое количество краски (одну каплю фуксина).
Для изучения морфологии дрожжей каждый студент готовит мазок из культуры дрожжей. Мазки фиксируют над пламенем, окрашивают фуксином или метиленовой синькой и просматривают под иммерсией. При изучении мазков обращают внимание на форму дрожжевых клеток, наличие в их протоплазме включений, отыскивают делящиеся клетки с почками.
Контрольные вопросы:
1. Назвать особенности морфологии дрожжей.
2. Способы размножения дрожжей.
3. Назвать основные классы дрожжей, по каким признакам они выделяются.
4. Распространение дрожжей в природе и их значение в народном хозяйстве.
Лабораторная работа № 14
Дата добавления: 2018-10-26; просмотров: 548; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!