Техника окраски капсул по методу Антони.
1. Высушенную на воздухе пленку бактериальной культуры окрашивают в течение 2 минут 1% водным раствором кристаллического фиолетового.
2. Краситель отмывают 20% водным раствором сульфата меди, удаляют избыток последнего и подсушивают с помощью фильтровальной бумаги.
Капсулы выглядят светло-голубыми, а микроорганизмы – темно-фиолетовыми.
Капсулы образуют Azotobacter chroococcum, Leuconostoc mesenteroides и некоторые другие бактерии. При просмотре препаратов под микроскопом обращают внимание на место расположения в клетках включений, спор, их форму, величину и отношение к окраске. Наблюдаемую картину микроструктуры бактерий зарисовать в альбоме.
Контрольные вопросы:
- Каково строение и химический состав клетки?
- При каких условиях образуется капсула?
- За счет какого структурного элемента клетки образуется капсула?
- Является ли каспула самостоятельным слоем?
- Химический состав капсулы.
- Назовите причины образования спор.
- В какой форме могут быть споры и каково их расположение?
Лабораторная работа № 8
Тема: Методы и техника культивирования микроорганизмов на питательных средах.
Цель занятия. Изучить способы посевов и пересевов микроорганизмов на питательные среды. Произвести посев культур микробов на МПБ и МПА (в пробирки), а также посев смеси микробных культур методом рассева на чашки Петри с МПА.
Оборудование и материалы. Штативы, пробирки со средами, микробиологические петли, шпатели, пипетки, чашки Петри с МПА. Культуры микроорганизмов, жидкие и твердые питательные среды
|
|
|
Задания:
- Подготовить к посеву микроорганизмов чашки Петри и пробирки.
- Произвести посев микроорганизмов на твердые питательные среды.
- Произвести посев микроорганизмов на жидкие питательные среды.
Методические указания:
ТЕХНИКА ПОСЕВА МИКРООРГАНИЗМОВ
Бактериологический метод - выделение чистых культур микробов и их последующая идентификация - имеет большое значение в микробиологических исследованиях диагностике инфекционных заболеваний, при изучении санитарно-гигиенического состояния объектов внешней среды (вода, воздух, почва, продукты питания).
Первым этапом этой методики является посев или пересев бактериальной культуры на различные типы питательной среды. Материалом для посева могут быть пересеваемые культуры бактерий, различные выделения животных и человека, ткани трупа, вода, почва, продукты питания. Жидкий материал для посева берут петлей или пипеткой. При взятии петлей жидкость должна образовать в кольце петли тонкую прозрачную пленку - “зеркало”. Пипетками пользуются в том случае, когда материал засевают в большом или точно отмеряемом объеме. Способ взятия плотного материала определяется его консистенцией. При посевах чаще всего пользуются бактериальной петлей. Все манипуляции, связанные с посевом и выделением микробных культур, производят над пламенем горелки. Бактериальную петлю прокаливают над пламенем непосредственно перед взятием материала, затем петлю остужают. Для этого при пересеве микробной культуры с пробирки горячую петлю погружают в конденсационную жидкость, а при пересеве с чашек Петри прикасаются к поверхности питательной среды, свободной от микробного роста.
|
|
|
Достаточно остуженная петля не вызывает шипения конденсационной жидкости и не растапливает агар при соприкосновении со средой. После окончания посева петлю прожигают повторно для уничтожения находящейся на ней микробной культуры или инфицированного микроорганизмами материала. Пипетки и шпатели, используемые для посевов и опускают в дезинфицирующий раствор. После посева на чашках Петри со стороны дна, на пробирках в верхней трети надписывают название засеянного материала, ставят номер анализа и дату посева.
Техника посевов на плотные и жидкие питательные среды:
1. При посеве в жидкую питательную среду петлю с находящимся на ней материалом погружают в среду. Если материал вязкий и с петли не снимается, его растирают на стенке сосуда, а затем смывают жидкой средой. Жидкий материал, набираемый в пастеровскую или градуированную пипетку, вливают в питательную среду.
|
|
|
2. При посеве на скошенный мясопептонный агар пробирку берут в левую руку между 1 и II пальцами, чтобы основание пробирки находилось на поверхности кисти руки и посев осуществлялся под контролем глаза. Пробку из пробирки вынимают правой рукой V и IV пальцами, не прикасаясь к той части пробки, которая входит внутрь пробирки. Остальные 3 пальца правой руки остаются свободными для взятия бактериальной петли, посредством которой производится посев. Петлю держат, как писчее перо. После вынимания пробки пробирку с питательной средой держат в наклонном положении во избежание попадания в нее посторонних микроорганизмов из воздуха. Петлю с находящимся на ней пересеваемым материалом вводят в пробирку до дна, опускают плашмя на поверхность питательной среды и скользящими движениями наносят штрих снизу вверх, от одной стенки пробирки к другой.
3. При посеве на поверхность плотной питательной среды в чашки Петри чашку держат в левой руке. Дно ее с одной стороны придерживают 1 и II пальцами, а с другой —IV и V пальцами. Крышку, приоткрытую настолько, чтобы в образовавшуюся щель свободно проходили петля или шпатель, фиксируют 1 и III или 1 и II пальцами. Небольшое количество исследуемого материала втирают бактериальной петлей в поверхность питательной среды у края чашки. Затем петлю прожигают, чтобы уничтожить избыток находящегося на ней материала. Линию посева начинают с того места, в котором находится материал. Бактериальную петлю кладут плашмя на питательную среду, чтобы не поцарапать ее поверхности, и проводят штрихи по всей среде или по секторам, разграфив предварительно дно чашки (при условии, что среда прозрачна) на несколько равных частей. Нужно стараться, чтобы штрихи, наносимые петлей, располагались как можно ближе друг к другу, так как это удлиняет общую линию посева и дает возможность для равномерного распределения засеваемого материала по поверхности плотной питательной среды, можно пользоваться вместо петли тампоном или шпателем. При обилии в засеваемом материале микробов они растут в виде пленки, покрывающей всю поверхность питательной среды. Такой характер микробного роста получил название сплошного, или газонного. Посев газоном производят, когда нужно получить большие количества микробной культуры одного вида.
|
|
|
4. Из материала, подлежащего посеву в толщу плотной питательной среды, готовят взвесь в стерильной водопроводной воде или в изотоническом растворе. Набирают 0,1-1 мл взвеси в пипетку (в зависимости от степени предполагаемого микробного загрязнения) и выливают в пустую стерильную чашку Петри. Вслед за этим чашку заливают 15 - 20 мл мясопептонного агара, расплавленного и остуженного до температуры 40 - 45 °С (при такой температуре пробирка со средой, приложенная к щеке, не должна вызывать ощущения ожога). Для равномерного распределения исследуемого материала в питательной среде закрытую чашку с содержимым слегка вращают по поверхности стола.
5. Посев уколом в столбик питательной среды производят в пробирку со средой, застывшей в виде столбика. Пробирку берут в левую руку, как обычно, и в центре столбика до дна пробирки вкалывают петлю с находящимся на ней материалом.
Контрольные вопросы:
- Для какой цели проводят посев и пересев микроорганизмов?
- Как производится посев на плотные питательные среды?
- Как произвести посев на жидкие питательные среды?
- Заполните форму 3, перечислив известные вам способы посева и применяемые при этом инструменты.
Форма 3
| Методы посева на среды | ||||
| плотные | жидкие | |||
| В чашках Петри | Со скошенным агаром | С агаром столбиком | В пробирках | В колбах |
Лабораторная работа № 9
Дата добавления: 2018-10-26; просмотров: 561; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!