Тема: Бактериологические краски. Простой метод окрашивания.
Цель занятия. Овладеть методикой приготовления мазка-препарата для микроскопии из микробной взвеси и агаризованной среды. Ознакомиться с методами приготовления красящих растворов. Отработать методику простого метода окраски приготовленных препаратов.
Материалы и оборудование. Набор красок, спирт 96%, дистиллированная вода, фильтровальная бумага, предметные стекла, бактериологические петли, пинцеты, пробирки культурами микроорганизмов, микроскопы.
Задания:
- Обработать и приготовить предметные и покровные стекла.
- Приготовить мазок из культуры микроорганизмов.
- Окрасить препарат, просмотреть под микроскопом в сухой и иммерсионной системе и зарисовать в тетради.
Методические указания.
Микроскопия бактерий в окрашенном виде.
На предметном стекле делают мазок, высушивают, фиксируют его и после этого окрашивают.
Приготовление мазков. Исследуемый материал распределяют тонким слоем по поверхности предметного хорошо обезжиренного стекла.
Мазки можно готовить из культур микробов, патологического материала (мокрота, гной, моча, кровь и др.) и из органов трупов. Можно использовать вытяжки с почвы, воду, накопительные среды, чистые культуры с жидких или агаризованных питательных сред. Приготовление препарата для микроскопии складывается из следующих этапов:
1. Приготовление мазка на обезжиренном предметном стекле.
2. Высушивание препарата.
|
|
|
3. Фиксация мазка.
4. Окраска мазка.
В правильно приготовленном препарате микробные клетки должны быть расположены в один слой.
Техника приготовления мазков определяется характером исследуемого материала.
1. Приготовление мазков из микробных культур с жидкой питательной среды и из жидкого материала. Маленькую каплю исследуемой жидкости наносят бактериальной петлей на предметное стекло и круговыми движениями петли распределяют равномерным слоем в виде кружка диаметром в копеечную монету.
2. Приготовление мазка из культур с плотных питательных сред. На середину чистого, хорошо обезжиренного стекла наносят каплю водопроводной воды, в нее вносят бактериальную петлю с небольшим количеством исследуемой микробной культуры так, чтобы капля жидкости стала слегка мутноватой. После этого излишек микробного материала на петле сжигают в пламени горелки и приступают к приготовлению мазка по описанному выше способу.
Высушивание и фиксирование мазков. Приготовленный на предметном стекле мазок высушивают и после высыхания фиксируют. При фиксировании мазок закрепляется на поверхности предметного стекла, и поэтому при последующей окраске препарата микробные клетки не смываются. Кроме того, убитые микробные клетки окрашиваются лучше, чем живые. Различают физический способ фиксации, в основу которого положено воздействие высокой температуры на микробную клетку, и химические способы, предусматривающие применение средств, вызывающих коагуляцию белков
|
|
|
Физический способ фиксации. Предметное стекло с препаратом берут пинцетом или 1 и II пальцами правой руки за ребра мазком кверху и плавным движением проводят 2-3 раза над верхней частью пламени горелки. Весь процесс фиксации должен занимать не более 2 с. Надежность фиксации проверяют следующим простым приемом: свободную от мазка поверхность предметного стекла прикладывают к тыльной поверхности левой кисти. При правильном фиксировании мазка стекло должно быть горячим, но не вызывать ощущения ожога.
Химический способ фиксации. Для фиксации мазков применяют химические вещества такие как: Безводный метиловый спирт. Этиловый спирт 96%. Жидкость Никифорова (смесь спирта и наркозного эфира в соотношении 1:1). Жидкость Карнуа (спирта 96% - 60 мл, хлороформа - 30 мл, уксусной кислоты ледяной - 10 мл)
Предметное стекло с высушенным мазком погружают в склянку с фиксирующим веществом и затем высушивают на воздухе.
|
|
|
Техника окраски мазков. Для окраски мазков пользуются растворами красок или красящей бумагой, что предложено А. И. Синевым. Простота приготовления, удобство применения, а также возможность хранения красящих бумаг в течение долгого времени явились основанием для широкого их использования при различных способах окраски.
Окраска мазков красящей бумагой. На высушенный и фиксированный препарат наносят несколько капель воды, кладут окрашенные бумажки величиной 2х2 см. В течение всего времени прокрашивания бумага должна оставаться влажной и плотно прилегать к поверхности стекла. При подсыхании бумагу дополнительно смачивают водой. Продолжительность окрашивания мазка определяется методом окраски. По окончании окраски бумагу осторожно снимают пинцетом, а мазок промывают водопроводной водой и подсушивают на воздухе или фильтровальной бумагой.
Окраска мазков растворами красителей. На высушенный и фиксированный препарат пипеткой наносят краситель в таком количестве, чтобы он покрывал весь мазок. При окраске мазков концентрированными растворами красителей (карболовый фуксин Циля, карболовый генциановый или кристаллический фиолетовый) окрашивание производят через фильтровальную бумагу, задерживающую частицы красителя: на фиксированный мазок кладут полоску фильтровальной бумаги и на нее наливают раствор красителя.
Дата добавления: 2018-10-26; просмотров: 713; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!