Тема: Измерение величины микробов.
Определение бактериального загрязнения воздуха.
Цель работы: Освоить методы определения размеров бактерий. Изучить методы определения бактериального загрязнения воздуха.
Материал и оборудование: Объект-микрометр, окуляр-микрометр, микроскоп с осветителем, предметные стекла, бактериологическая петля, спиртовка, набор красителей, капельница со спиртом, водой, иммерсионным маслом, набор чистых культур микроорганизмов на косяках; чашки Петри со стерильным мясопептонным агаром.
Задание:
1. Определить величину, размеры бактерий (палочек, кокков).
2. Сделать анализ микрофлоры воздуха по методу Коха.
Методические указания.
Определение размеров клеток проводят под микроскопом с помощью окулярной линейки (микрометра) или окулярного винтового микрометра, используя чаще всего 24-часовые культуры микроорганизмов. Размеры клеток особенно удобно определять, пользуясь фазово-контрастным устройством.
Окулярный микрометр представляет собой круглую стеклянную пластинку, в центре которой выгравирована линейка длиною 5 мм. Линейка разделена на 50 частей. Окулярный микрометр вставляют в окуляр, ввинчивая глазную линзу окуляра. Однако делениями окуляр-микрометра нельзя непосредственно измерять величину клетки, т. к. последние рассматриваются через объектив и окуляр, а деления линейки - только через верхнюю линзу окуляра. Поэтому, прежде чем приступить к измерению величины клеток, необходимо определить цену деления окулярного микрометра для данного микроскопа. Определение цены деления проводят с помощью объективного микрометра.
|
|
|
Объективный микрометр - пластинка с отверстием в центре. В отверстие вставлено стекло, на котором нанесена линейка длиною в 1 мм. Эта линейка разделена на 100 частей, так что одно деление объективного микрометра соответствует 0,01 мм. Для определения цены деления окулярного микрометра объективный микрометр помещают на столик микроскопа и фокусируют при малом увеличении. Изображение линейки перемещают в центр поля зрения и только после этого меняют объектив на тот, при котором будут определять размер клеток. Перемещая столик микроскопа и поворачивая окуляр, устанавливают микрометры так; чтобы их шкалы были параллельны и одна перекрывала другую. Определение цены деления окулярного микрометра проводят по принципу нониуса, т. е, совмещают одну из черточек шкалы окулярного и объективного микрометров и находят следующие совмещения. Устанавливают, скольким делениям объективного микрометра соответствует одно деление окулярного микрометра. Например, два деления объект-микрометра (20 мк) соответствуют пяти делениям окуляр-микрометра, следовательно, одно деление окуляр-микрометра равняется 4 мк (20 : 5). Если теперь на столик микроскопа положить препарат с клетками микроорганизмов и рассмотреть его при этом же увеличении, то можно измерить величину клетки. Для этого определяют, какому числу делений окулярной линейки соответствует величина измеряемого объекта и умножают это число на цену деления окулярного микрометра. Очень удобно измерять размеры клеток с помощью винтового микрометра MOB-l-15-x, правила работы с которым подробно изложены в инструкции, прилагаемой к прибору.
|
|
|
Контрольные вопросы:
1. Каковы размеры бактериальных клеток?
2. Способы измерения микроорганизмов?
3. Как определить цену окуляр-микрометра?
4. Заполните форму 6, назвав некоторые виды микроорганизмов и их средние размеры.
Форма 6.
| Виды микроорганизмов | Размеры | Способы измерения | ||
| Ширина | Длина | Бактерий, грибов | вирусов | |
Лабораторная работа № 16
Тема: Определение бактериального загрязнения воздуха (продолжение) .
Цель работы: Определение бактериального загрязнения воздуха лабораторий химико-биологического факультета СыктГУ.
|
|
|
Материал и оборудование: микроскоп, набор красителей, спиртовка, капельница с иммерсией, микробиологические петли, х/б салфетки, спирт 96º, высеянные культуры микроорганизмов в различных лабораториях и аудиториях корпуса.
Задание:
1. Определить бактериальную загрязненность воздуха учебной комнаты методом седиментации (по Коху).
2. Приготовить мазки из выросших колоний, окрасить, исследовать под микроскопом, микроскопическую картину зарисовать в тетрадь.
Методические указания
Микрофлора воздуха, бактериальное загрязнение закрытых помещений. Воздух является средой, неблагоприятной для развития микроорганизмов. Источником микрофлоры воздуха является почва, растительность, животные и люди. Наиболее загрязненными микробами являются приземные слои атмосферы. Наибольшее количество микробов содержится а воздухе над городами. При удалении от земли воздух содержит меньше микробов. Так над Москвой на высоте 500 м в каждом кубическом метре воздуха содержится 2000-3000 микробов, а на высоте 2000 м - только 500 микробов. Однако даже в очень высоких слоях атмосферы (2000-3000 м) встречаются споры бацилл и плесневых грибов.
Бактериальная зараженность закрытых помещений (жилых комнат, производственных и общественных помещений) всегда большая. Большинство микробов, содержащихся в воздухе, относятся к сапрофитам. Однако, в нем могут находиться и патогенные для людей, животных и растений, виды.
|
|
|
Для обнаружения микробов в воздухе предложено большое количество методов и приборов, позволяющих определить как общее количество, так и видовой состав микрофлоры. Определение количественного состава микрофлоры и ее качественного состава в воздухе проводится методами, в основу которых положены два принципа: оседания (седиментация) и засасывание (аспирация).
Метод оседания (по Коху) - самый простейший метод. Он основан на оседании микроорганизмов, капелек жидкости и пылинок под влиянием силы тяжести на поверхность агара открытой чашки Петри. Для определения микроорганизмов в воздухе по методу Коха на определенной высоте от поверхности пола каждый студент устанавливает чашку Петри с МПА. Чашки открывают полностью и выдерживают в течение 5 мин. Затем чашки закрывают и переносят в термостат с температурой 37°С на 24 часа, а затем оставляют на 48 часов при комнатной температуре. Через трое суток производят подсчет выросших колоний бактерий и грибов. По количеству колоний, выросших в чашках Петри, определяют бактериальную загрязненность воздуха.
Установлено, что за 5 мин. при спокойном состоянии воздуха на площадь 100 см2 оседает столько микроорганизмов, сколько их содержится в 10 л воздуха. Рассчитав площадь питательной среды в чашке и зная количество выросших колоний микробов на ней, определяют количество микроорганизмов, содержащихся в 1 м3 воздуха. Например, в чашке Петри диаметром 10 см выросло 25 колоний бактерий. Тогда площадь питательной среды равна S = πR2 = 3,14 x 52 = 78,5 см2. Если на площадь 78,5 за 5 мин. осело 25 микробов, то за это время на площади 100 см2 осело бы микробов:
78,5 - 25,
100 - x x = 25 х 100/ 78,5 = 32
Таким образом за 5 мин. на площадь 100 см2 осело бы 32 микробных клетки из 10 л воздуха. Чтобы узнать количество бактерий, содержащихся в 1 м3 воздуха, составим пропорцию: 10 л - 32 микроба
1000 л - х х = 32 x 100 / 10 = 3200
Следовательно, в 1 м3 воздуха содержится 3200 бактерий.
Контрольные вопросы:
Дата добавления: 2018-10-26; просмотров: 1259; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!