Складний метод фарбування (за Грамом)
Цей метод є однією з диференційних ознак при вивченні видової приналежності бактерій.
Суть|сутність| методу полягає в послідовному фарбуванні|пофарбуванні| двома фарбниками:|барвниками| генціан-віолетом і фуксином.
По методу Грама одні бактерії (коки, бацили, мікобактерії, клостридіальні бактерії) міцно забарвлюються генціанвіолетом| в синьо-фіолетовий колір|цвіт| (грампозитивні бактерії, гр+|). Здатність|здібність| грампозитивних бактерій утримувати генціановий| фіолетовий в комплексі з|із| йодом пов'язана з властивістю багатошарового| пептидоглікану| (основного компоненту клітинної стінки бактерій) взаємодіяти з|із| фарбником|барвником|. Окрім|крім| цього, подальша|наступна| обробка мазка бактерій спиртом викликає|спричиняє| звуження пір в пептидоглікані| і тим самим затримку фарбника|барвника| в клітинній|клітковій| стінці. Грамнегативні бактерії (гр.-|) (спірили, сальмонели, вібріони, псевдомонади, азотбактер, кишкова паличка), стінки яких містять|утримують| меншу кількість пептидоглікану|, після|потім| дії спиртом втрачають фарбник|барвник|, обезбарвлюються|знебарвлюють| і при обробці фуксином забарвлюються в червоний колір|цвіт|.
Етапи фарбування за Грамом:
1. Приготувати препарат і зафіксувати його (див. розділ 1.3).
2. Фіксований мазок накрити фільтрувальним папером і налити на нього невелику кількість генціан-віолету. | |барвника|
3. Через 2 хв|мінути| фільтрувальний папір зняти|сіяти| пінцетом, дистильованою водою змити фарбу|барву| і на препарат нанести|завдавати| розчин Люголя на 1-2 хв|мінути|. Залишок розчину злити.
|
|
|
4. Мазок занурити|навантажити| в розчин 96%-го| спирту на 30 сек|мінути|.
5. Промити мазок водою.
6. нанести на препарат водний розчин фуксину і залишити на 1 хв|мінуту|.
7. Промити препарат водою, промокнути фільтрувальним папером, нанести невелику краплю імерсійної олії і розглянути|розглядувати| під мікроскопом при збільшенні 15x90. Грампозитивні бактерії забарвлюються в синій колір|цвіт|, а грамнегативні - в рожевий|трояндовий|.
8. Замалювати грампозитивні і грамнегативні бактерії.
Фарбування спор бактерій
Спора - це клітина|клітина| бактерій, що покоїться, вона володіє високою стійкістю до фізико-хімічних|фізико-хімічних| дій. Спори деяких бактерій чіткіше можна розглянути|розглядувати| тільки|лише| після|потім| спеціального фарбування|пофарбування|.
1. Приготувати препарат і зафіксувати його (див. розділ 1.3).
2. На фіксований мазок, розташований|схильний| на мікробіологічному "містку" нанести|завдавати| лужний розчин метиленового синього (по Леффлеру) і довести його до кипіння, утримуючи препарат над полум'ям пальника 15-20 хв|мінути|.
|
|
|
3. Змити фарбу|барву| водою і дофарбувати мазок 0,5%-вим| розчином нейтрального червоного - 30 хв|мінути|.
4. Промити мазок водою і мікроскопувати| з|із| об'єктивом 90х|. Після|потім| фарбування|пофарбування| спори набувають|придбавають| блакитного|голубого| або синього кольору|цвіту|, а цитоплазма вегетативних форм клітин|клітин| - червоного кольору|цвіт|.
5. Замалювати клітини|клітини| з|із| виявленими забарвленими|пофарбованими| спорами.
Завдання:
1. Вивчити техніку приготування препаратів для живих та неживих культур: «роздавлена крапля», «висяча крапля», фіксованого офарбованого препарату.
2. Приготувати препарат «роздавлена крапля» з хлібопекарських дріжджів, провести мікроскопію, замалювати, зазначити загальне збільшення мікроскопу.
3. Вивчити методи фарбування мікроорганізмів: простий і складний.
4. Приготувати фіксований препарат зубного нальоту, пофарбувати його по Граму, розглянути під мікроскопом, замалювати.
5. Приготувати фіксований препарат настою ґрунту, пофарбувати спори, розглянути під мікроскопом, замалювати.
Питання для самоконтролю:
1. Який препарат готують для живих мікроорганізмів, а який для неживих?
|
|
|
2. Як підготувати мазок для фарбування|пофарбування|?
3. З|із| якою метою|ціллю| фіксують мазок?
4. Які існують методи фарбування|пофарбування| бактерій?
5. Чому одні бактерії забарвлюються по Граму позитивно, а інші - негативно|заперечний|?
6. Як виявити наявність спор в клітині|клітині|?
ЛАБОРАТОРНА РОБОТА № 3
Морфологія бактерій
Зміст роботи:
1. Будова бактеріальної клітини.
2. основні форми бактеріальних клітин.
3. Рухливість бактерій.
Будова бактеріальної клітини
|
|
Дата добавления: 2018-04-05; просмотров: 1098; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!