Культуральные признаки дрожжей
Определение культуральных признаков производят на плотных и жидких средах.
Техника определения. При росте на плотных питательных средах описывают гигантскую колонию. Для получения гигантской колонии сусло с 20 %-ой желатиной или сусло-агар стерилизуют в небольших конических колбочках слоем толщиной 2-3 см. В центр поверхности застывшей среды уколом иглы производят посев маленькой капли молодой культуры. Выращивают колонии в течение 30 сут при комнатной температуре. Для предупреждения высыхания среды колбочки обвязывают полиэтиленовыми колпачками. Дрожжи разных видов образуют гигантские колонии, отличающиеся по размерам, форме, цвету, структуре поверхности, характеру края. Обращают внимание также на разжижение желатины.
Характер роста дрожжей в жидких средах определяют в колбочках или пробирках с солодовым суслом концентрацией 15 % СВ или глюкозопептонной средой с дрожжевым экстрактом. Время инкубации составляет 4 недели при комнатной температуре. Дрожжи вызывают помутнение, осадок, образование кольца или пленки. Дрожжи-аскомицеты образуют осадок. Рост в виде пленки характерен для дрожжей, образующих мицелиальные структуры (р. Candida, Trichosporon и др.).
Для дрожжей с окислительным типом энергетического метаболизма характерно ранее, через 1-2 дня, образование тонкой пленки, всползающей по стенкам пробирки.
Физиолого-биохимические признаки дрожжей
|
|
|
Сбраживание сахаров. Сахара (глюкозу, галактозу, сахарозу, мальтозу, треголазу, мелибиозу, лактозу, целлобиозу), инулин, растворимый крахмал и a-метил-D-глюкозид в концентрации 2 %, рафинозу в концентрации 4-6 % готовят на разведенном в соотношении 1:10 дрожжевом автолизате, 0,5 %-ом растворе дрожжевого экстракта или на полной синтетической среде Ридер.
Техника определения. Растворы сахаров разливают в пробирки с поплавками и стерилизуют 15 мин при 0,05 мПа либо 3 сут дробно. Посев культуры производят с сусло-агара, и засеянные пробирки помещают в термостат. Инкубирование длится до 24 сут. В поплавке пробирки накапливается газ.
Ассимиляция источников углерода. В качестве источников углерода кроме указанных выше проверяют способность к ассимиляции других гексоз (рамнозы, сорбозы), пентоз (ксилозы, арабинозы, рибозы), гликозидов (арбутина и салицина), спиртов (этанола, глицерина, i-эритрита, рибита, дульцита, D-маннита, D-сорбита, i-инозита), органических кислот (молочной, янтарной, лимонной). В отдельных случаях проверяют ассимиляцию метанола, углеводородов (декана, гексадекана) и расширяют набор органических кислот за счет винной, яблочной, уксусной, пировиноградной, глюкуроновой и др. Исследования можно проводить как на жидких, так и на агаризованных средах. Азотную синтетическую основу с источником углерода приготавливают в 10 раз более концентрированную и стерилизуют через фильтр Зейтца. Асептически среды добавляют до 0,5 мл в пробирки с 4,5 мл дистиллированной воды или 2 %-ого водного расплавленного агара, простерилизованных в автоклаве при 0,1 мПа 15 мин. Конечная концентрация источника углерода в среде составляет 0,5 %, в случае раффинозу - 1 %, углеводородов - 2 %. При использовании органических кислот регулируют рН (5,6-6,0). Растворимый крахмал, инулин и углеводороды стерилизуют в автоклаве 15 мин при 0,05 мПа. Этанол и метанол добавляют по объему без стерилизации.
|
|
|
Техника определения. Жидкую среду или скошенный агар засевают 0,1 мл суспензии трехсуточной культуры, выращенной на сусло-агаре и приготовленной в стерильной воде с концентрацией клеток примерно 106-107 в 1 мл. При использовании плотных сред, разлитых в чашки Петри, производят засев 6-8 исследуемых дрожжевых культур прямыми радиальными штрихами. С помощью специального многоточечного инокулятора в чашку можно вносить сразу 12-36 культур. Засеянные чашки (пробирки) с плотной средой помещают в термостат пробирки с жидкими средами - на качалки в наклонном положении и инкубируют 3-4 недели при оптимальной температуре. Рост клеток в жидкой среде учитывают количественно с помощью нефелометра, на твердой среде - визуально. Первые показания в жидких средах снимают через 7 сут, сравнивая с положительным (рост на среде с глюкозой) и отрицательным контролем (среда без какого-либо источника углерода).
|
|
|
Ассимиляция источников азота. Азот дрожжи потребляют преимущественно в форме солей аммония и практически не ассимилируют азот в форме нитратов и нитритов.
Техника определения. В синтетическую среду, аналогичную исследованию источников углерода, но без сульфата аммония, вносят нитрат калия в концентрации 0,78 г/л и засеивают исследуемыми дрожжами. В качестве контроля используют эту же среду без источника азота (отрицательный контроль) и с сульфатом аммония (положительный контроль). Инкубирование и учет результатов аналогичны предыдущему анализу.
Рост на средах с повышенным осмотическим давлением. Способность дрожжей расти на средах с концентрацией 50-60 мас. % глюкозы используют для идентификации разных видов сахаромицетов.
Техника определения. Скошенный агар в пробирке засевают штрихом и инкубируют до 4 недель. Для определения солеустойчивости дрожжей используют среды с хлорамидом натрия от 0 до 27 % с интервалами в 1 %. Стерильную жидкую среду засевают исследуемой культурой дрожжей и культивируют на качалке 8 сут.
|
|
|
Рост при повышенных температурах. Оптимальные значения температуры для роста дрожжей находятся в интервале 20-28 оС, но есть виды, которые лучше развиваются в температурах интервалах ниже или выше указанных. Поэтому определяют способность к росту при значениях температуры 20-25, 28-34, 37-39 и 40-45 оС.
Техника определения. Дрожжи культивируют на сусло-агаре, азотной основе с 5 % глюкозы или глюкозопептонной среде с дрожжевым экстрактом.
Устойчивость к актидиону. Техника определения. Тест находит применение при дифференциации р. Saccharomyces и Candida. В синтетическую среду с 0,5 % глюкозы добавляют 100 мкг/мл актидиона и инкубируют на качалке до 4 недель. Несовершенные дрожжи к антибиотику более устойчивы.
Контрольные вопросы
1. На какие классы классифицируют дрожжи?
2. Для всех ли дрожжей характерен половой способ размножения?
3. Присутствуют ли постоянно в клетке гликоген, жир, волютин?
4. При каких условиях накапливается гликоген в дрожжах? В какой цвет он окрашивается?
5. В какой цвет будут окрашиваться метахроматиновые зерна при окраске карболовым фуксином Циля, метиленовой синью?
6. Во всех ли клетках присутствует жир? Как его можно определить?
7. По каким признакам можно определить возраст клеток?
8. Какие вегетативные способы размножения характерны для дрожжей?
9. В каких условиях происходит спорообразование у дрожжей?
10. Какие сахара способны сбраживать дрожжи?
11. Какие соединения дрожжи используют в качестве источников углерода, азота?
12. Способны ли дрожжи к росту на средах с высоким осмотическим давлением?
13. Каков температурный оптимум роста дрожжей?
14. С какой целью в питательные среды добавляют актидион?
2. ТЕХНОЛОГИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ ДРОЖЖЕЙ
Технологические показатели дрожжей являются наиболее важными с точки зрения промышленного производства, так как характеризуют качество хлебобулочных изделий.
Дата добавления: 2018-02-28; просмотров: 1552; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!