Возрастные особенности дрожжевых клеток

⇐ ПредыдущаяСтр 3 из 11Следующая ⇒

Внутреннее содержимое клеток зависит от их возраста. Молодые дрожжи, находящиеся в экспоненциальной фазе роста, имеют тонкую оболочку, гомогенную однородную цитоплазму, вакуоли и запасные вещества отсутствуют или только намечаются. Дрожжи интенсивно размножаются, количество почкующихся клеток достигает 70-80 %. Мертвые клетки отсутствуют.

У зрелых дрожжей, находящихся в стационарной фазе роста, в цитоплазме появляется зернистость, вакуоли увеличиваются, процесс размножения замедляется (не более 5-10 %), обнаруживаются мертвые клетки. Признаком зрелости дрожжей является наличие в них гликогена и метахроматина, которые откладываются как запасной материал и расходуются клеткой по мере истощения питательной среды. Количество мертвых клеток в популяции не превышает 1-2 %.

Старые дрожжи (72-часового культивирования и более) имеют утолщенную оболочку, хорошо видимую при микроскопировании. Цитоплазма у них – гетерогенная, а вакуоли – крупные, иногда по несколько вакуолей в клетке. Гликоген и метахроматин отсутствуют. Культура дрожжей состоит из большого количества клеток с жировыми включениями. Характерным признаком возраста является наличие большого числа мертвых клеток.

Определение количества мертвых клеток дрожжей

При нормальных условиях технологического процесса зрелые дрожжи могут содержать 0,5-1,0 % мертвых клеток. При наличии большого их количества необходимо немедленно проверить температуру и кислотность дрожжей.

Техника определения. Для определения количества мертвых клеток на предметное стекло наносят по 1 капле суспензии дрожжей и раствора метиленовой сини (1:5000), закрывают покровным стеклом, излишек жидкости отбирают листком фильтровальной бумаги и через 2 мин микроскопируют. В поле зрения микроскопа считают все дрожжевые клетки, затем только окрашенные в синий цвет. Количество дрожжевых клеток считают в 5 полях зрения. Вычисляют общее количество клеток дрожжей и количество мертвых клеток (синего цвета). После подсчета вычисляют процентное содержание мертвых клеток:

х = м_∙100/о,

где х - количество мертвых клеток, %; м - количество мертвых клеток; о - общее количество клеток.

Способы вегетативного размножения

При микроскопировании препаратов, приготовленных из 5-7-суточных культур дрожжей, выращенных на сусло-агаре, устанавливают характер вегетативного размножения микроорганизмов – почкование, деления, наличия мицелия, псевдомицелия, бластоспор, артроспор и хламидоспор.

Почкование может быть монополярным, биполярным, мультиполярным. Почки отделяются или не отделяются от материнской клетки. Дрожжи одиночные, ветвистые или образуют микроколонии.

При почковании на поверхности клетки образуется маленький бугорок – почка, который постепенно увеличивается почти до размеров материнской клетки. При одновременно или последовательно формирующихся почках на разных сторонах материнской клетки происходит множественное или многостороннее почкование.

Размножение делением происходит за счет образования поперечной перегородки – септы. Полярное образование почки, заканчивающееся появлением четко заметной септы в области перетяжки, носит название почкующегося деления.

В отличие от мицелиальных грибов, образующих истинный мицелий, разделенный на отдельные клетки поперечными перегородками, дрожжеподобные грибы дают псевдомицелий, образованный из удлиненных клеток, расположенных длинными цепочками.

Псевдомицелий развивается в основном при поверхностном росте на специальных средах или на сусло-агаре.

Техника определения. На предметное стекло нанести петлей каплю дрожжевой суспензии, накрыть ее покровным стеклом, микроскопировать с использованием объектива микроскопа 40 х.

Спорообразование у дрожжей

Для идентификации дрожжей и дрожжеподобных грибов необходимо, прежде всего, установить, способен ли изучаемый вид дрожжей образовывать аскоспоры или он является формой, не образующей спор.

Для спорообразования у диплоидных дрожжей необходимы определенные условия: молодой возраст культуры, предварительное выращивание дрожжей в течение 1-2 сут на богатых средах, высев активно растущих дрожжей на голодные среды или гипсовые блоки. При этом должна быть обеспечена хорошая аэрация и повышенная влажность. На средах для спорообразования дрожжи инкубируют при значениях температуры несколько меньших по сравнению с оптимальным значением (20-25 ^оС) 4-6 недель при ежедневном микроскопировании. В дрожжевой клетке или в аске образуется 1-8 спор.

Споры образуются дрожжами на твердых средах, как правило, обедненных какими-либо питательными веществами, или при старении культуры.

Существует ряд питательных сред для выявления аскоспор. Наиболее распространенными являются среда Городковой или ацетатная среда.

Среда Городковой: пептон – 10 г, NaCl – 5 г, глюкоза – 1 г, агар-агар – 20 г, вода (водопроводная) - 1 л, рН 7,3. Условия стерилизации – автоклавирование 0,5 ати, 30 мин.

Ацетатная среда: CH₃COONa – 10 г, KCl – 5 г, агар-агар – 20 г, вода (водопроводная) – 1 л. Условия стерилизации – автоклавирование 0,5 ати, 30 мин.

Окраска спор дрожжей.Наличие спор можно установить при рассматривании неокрашенного препарата. Споры представляют собой сильно преломляющие свет однообразные по величине и форме, круглые или овальные тельца внутри дрожжевых клеток. При обычной окраске эти тельца остаются неокрашенными, в то время как протоплазма окрашивается. Для окраски применяют метод контрастного окрашивания.

Техника определения. Готовят препарат дрожжевых клеток, фиксируют его в пламени спиртовки, заливают карболовым фуксином Циля и нагревают 2-3 мин до появления паров. Затем препарат обесцвечивают, погружая в 2 %-ый раствор молочной кислоты (или 5 %-ный раствор серной кислоты) или 95 %-ый этанол, содержащий 1 мл концентрированной молочной кислоты в 100 мл этилового спирта. Препарат промывают водой и докрашивают 3-5 мин 1 %-ым раствором метиленового синего, после чего промывают водой. Зрелые аскоспоры окрашиваются в красный цвет, вегетативные клетки – в синий. Аскоспоры дрожжей р. Schizosaccharomyces не обладают кислотоустойчивостью и окрашиваются в синий цвет.

Если споры плохо окрашиваются, то препарат предварительно обрабатывают сначала хлороформом (102 мин) и в течение 10 мин 5 %-ым раствором хромовой кислоты, после чего окрашивают, или высушенный препарат обрабатывают в течение 3-4 мин горячим 0,5 %-ным раствором соляной кислоты, промывают, высушивают, фиксируют на пламени горелки и окрашивают.

Дата добавления: 2018-02-28; просмотров: 820; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 1 234 5 6 7 8 9 10 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!