Лабораторная работа 4. Количественное определение белка в сыворотке крови методом Кирка
Белки сыворотки крови выполняют различные функции: транспортную, защитную, регуляторную и т.д. Содержание белка в плазме крови является одним из важных показателей белкового обмена. Снижение данного показателя отмечается при голодании, нарушении синтеза белка, ряде заболеваний, прежде всего печени и почек. Значительное повышение содержания белка в плазме крови может свидетельствовать об инфекционных поражениях и является следствием интенсивного синтеза иммуноглобулинов.
Принцип метода: белки реагируют c сернокислой медью в щелочной среде с образованием соединений фиолетовой окраски (биуретовая реакция). Интенсивность окраски реакционного раствора прямо пропорциональна концентрации белков в анализируемой сыворотке.
Материалы и реактивы:
1.Лиофилизованный альбумин для приготовления 5 мл калибровочного раствора (100±2) г/л или 5 мл готового раствора альбумина (100±1) г/л
2.Биуретовый реагент (концентрированный раствор):
- сульфат меди (15,0±0,75) г/л
- гидроокись натрия (40,0±2) г/л
- калий натрий виннокислый (45,0±2,25),г/л
- йодид калия (25,0±1,25) г/л
Ход работы:
Анализ проводится согласно схеме, приведенной в таблице.
| Отмерять в пробирку, мл | Калибровочная или опытная пробы | Холостая проба |
| Калибровочный или опытный раствор | 0,08 | - |
| Физиологический раствор | - | 0,08 |
| Биуретовый реактив | 4,00 | 4,00 |
| Смешать, выдержать 30 мин. при комнатной температуре (от +18 до +25 0С). Измерять оптическую плотность калибровочной и опытной пробы против холостой при длине волны 540 нм в кюветах с длиной оптического пути 5 или 10 мм. |
|
|
|
Количество белка в пробе определяется с помощью калибровочного графика. Для получения калибровочного графика готовят растворы белка известных концентраций из исходного раствора, содержащего 10 мг альбумина в 1 мл, и заполняют таблицу:
| Пробирки | ||||||
| Холостая | ||||||
| Объем раствора белка (мл) | 0,0 | 0,1 | 0,3 | 0,5 | 0,7 | 0,9 |
| Объем воды (мл) | 1,0 | 0,9 | 0,7 | 0,5 | 0,3 | 0,1 |
| Содержание белка в 1 л раствора (г) | 0,0 | |||||
| Оптическая плотность (Е) | – |
Обрабатывая пробы аналогично опытной, определить оптическую плотность полученных растворов и строить калибровочный график. Пример калибровочного графика и расчет по нему показаны на
Пользуясь графиком, по значению экстинкции опытной пробы (y) находят содержание белка (x). Учтя разведение сыворотки в 10 раз получают содержание белка в 1 мл сыворотки. В норме количество белка в сыворотке составляет 60-80 г/л.
Клинико-диагностическое значение. Чаще всего увеличение количества общего белка в сыворотке крови является следствием дегидратации, которая является результатом потери части внутрисосудистой жидкости или её выхода во внесосудистое пространство. Такое состояние развивается при тяжёлых травмах, ожогах, диарее (например, при холере). При острых инфекционных заболеваниях повышение уровня белка может происходить из-за выброса белков острой фазы. При хронических паразитарных или инфекционных заболеваниях гиперпротеинемия может развиваться вследствие интенсивного протекания иммунного процесса и нарастания количества иммуноглобулинов.
|
|
|
Уменьшение белка в плазме крови может быть следствием задержки воды, например, при сердечной декомпенсации или отёках на фоне цирроза печени. Большие потери белка, например, с мочой при нефритах или через ЖКТ, также могут быть причиной гипопротеинемии, как и нарушения синтеза белка при раковой кахексии, хронических поражениях печени, во время голодания.
Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 37; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!