Лабораторная работа 3. Определение концентрации гемоглобина в крови
В состав гемоглобина эритроцитов входят простой белок глобин и простетическая группа гем. Гем – это хелатный комплекс иона железа и порфирина – циклического соединения, которое содержит 4 пиррольных кольца, соединённых метиленовыми мостиками. Глобин состоит из 4 полипептидных цепей, каждая из которых связана с гемом. Один гем способен связывать 4 молекулы кислорода, который переносится от лёгких к тканям. В плазме крови О2 мало растворим.
В тканях образуется СО2 (основной источник – окислительное декарбоксилирование α-кетокислот в митохондриях). Гемоглобин связывает 4 молекулы СО2 N-концевой аминогруппой каждой полипептидной цепи.
Таким образом, гемоглобин в организме выполняет функцию газообмена.
Принцип метода: в присутствии окислителя и цианид-ионов гемоглобин образует в водном растворе циангемоглобин, окраска которого пропорциональна содержанию гемоглобина в крови.
Материалы и реактивы:
1. Окислительный реагент
2. Калибровочный раствор гемоглобинцианида (соответствует пробе крови с концентрацией гемоглобина 150 г/л)
3. Ацетонциангидрин
Ход работы:
Приготовление трансформирующего раствора: Содержимое флакона с окислительным реагентом и ампулы с ацетонциангидрином перенести в мерную колбу объёмом 2 л, долить до метки дистиллированной водой и перемешать.
Опытная проба: 0,02 мл крови осторожно перемешать, предотвращая образование пены, с 5 мл трансформирующего раствора, выдержать 15 минут, фотометрировать против трансформирующего раствора при длине волны 540 нм в кюветах толщиной 10 мм.
|
|
|
Калибровочная проба: оптическую плотность калибровочного гемоглобинцианида измерить против трансформирующего раствора.
Концентрацию гемоглобина рассчитать по формуле:
, где
С – концентрация гемоглобина в пробе, г/л;
150 – калибровочная концентрация гемоглобина, г/л;
Е опыт. – оптическая плотность опытной пробы, ед. опт. плотности;
Екал. – оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. плотности.
Нормальные величины содержания гемоглобина:
0,5-5 лет 110-140 г/л
5-9 лет 115-145 г/л
12-14 лет, М 120-150 г/л; Ж 115-150 г/л
15-17 лет, М 117-166 г/л; Ж 117-153 г/л
18-44 года,М 132-173 г/л; Ж 117-155 г/л
45-64 года,М 131-172 г/л; Ж 117-160 г/л
67-74 года,М 126-174 г/л; Ж 117-161 г/л.
Клинико-диагностическое значение. Уменьшение концентрации гемоглобина является основным лабораторным симптомом анемии. Степень снижения уровня гемоглобина в крови зависит от вида анемии.
Повышение концентрации гемоглобина наблюдают при миелопролиферативных нарушениях, симптоматическом эритроцитозе.
Для диагностики сахарного диабета определяют уровень гликозилированного гемоглобина. В норме его содержание составляет 5-7 % от общего количества гемоглобина.
Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 33; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!