Лабораторная работа 1. Качественные реакции на витамины

⇐ ПредыдущаяСтр 41 из 52Следующая ⇒

Витамины — низкомолекулярные органические соединения разнообразные по химической природе, не синтезирующиеся в организме и необходимые для нормальной жизнедеятельности человека и животных в малых количествах по сравнению с другими составляющими продуктов питания.

Витамины делят на водо- и жирорастворимые. Биологическая роль большинства витаминов заключается в том, что они, являясь составной частью коферментов, участвуют в ферментативных процессах. К коферментным витаминам относятся водорастворимые витамины: группы В, РР, биотин. Жирорастворимые витамины (А, Е, D, F, К) участвуют в антиоксидантных реакциях и регуляции обмена веществ. Отсутствие или недостаток витаминов в пище приводит к развитию заболеваний витаминной недостаточности — авитаминозов или гиповитаминозов. Гипервитаминозы также приводят к ряду нарушений биохимических процессов и физиологических функций.

Для обнаружения витаминов в пищевых продуктах или других биологических объектах обычно пользуются цветными качественными реакциями. Особенности структуры и функций некоторых витаминов вместе с результатами работ занести в таблицу:

Витамин, название	Структура	Функции	Качественная реакция
Реактивы	Цвет, вид	Чем обусловлена
В₁(тиамин)
В₂(рибофлавин) и т.д.

Работа 1. Диазореакция на витамин В₁ (тиамин)

Тиамин в виде тиаминпирофосфата выполняет коферментные функции в реакциях декарбоксилирования a-кетокислот и в транскетолазной реакции. В основе качественной реакции на витамин В₁ лежит его способность в щелочной среде с диазореактивом образовывать сложное комплексное соединение оранжевого или красного цвета.

Ход работы. К 5 каплям 1% раствора сульфаниловой кислоты добавить 5 капель 5% раствора NaNO₂. К полученному таким образом диазореактиву прибавить несколько капель раствора витамина и 5-7 капель 10% раствора Na₂CO₃. Жидкость окрашивается в оранжево-красный цвет.

Работа 2. Восстановление витамина В₂ (рибофлавина)

Рибофлавин входит в состав коферментов ФАД и ФМН, которые являются простетической группой ряда оксидоредуктаз.

При добавлении металлического цинка к концентрированной соляной кислоте образуется водород, который восстанавливает желтый рибофлавин сначала до родофлавина (промежуточное соединение) красного цвета, а затем в бесцветный лейкофлавин.

Ход работы. В пробирку налить 10 капель рибофлавина и добавить 5 капель концентрированной НСl. Опустить зернышко металлического цинка. Начинается бурное выделение водорода. При этом раствор окрашивается в розово-желтый цвет (образовался родофлавин), а затем обесцвечивается (образовался лейкофлавин).

Работа 3. Феррихлоридная проба на витамин В₆ (пиридоксин)

Витамин В₆ в виде пиридоксальфосфата выполняет коферментные функции в реакциях трансаминирования и декарбоксилирования аминокислот.

При взаимодействии пиридоксина с раствором хлорида железа образуется комплексная соль типа фенолята железа красного цвета.

Ход работы. К 5 каплям 1% водного раствора витамина прибавить 5 капель 1% раствора хлористого железа. Встряхнуть. Жидкость приобретает красную окраску вследствие образования комплексного соединения.

Работа 4. Обнаружение кобальта в витамине В₁₂(цианкобаламин)

Витамин В₁₂ в качестве кофермента участвует в реакциях двух типов: трансметилирования и изомеризации.

При сплавлении витамина В₁₂ с гидросульфитом калия или при действии сильного окислителя происходит его разрушение и высвобождение кобальта. Кобальт с a-нитрозо-b-нафтолом образует комплексное соединение оранжево-красного цвета.

Ход работы. Внести в пробирку 2 капли раствора витамина В₁₂, добавить 2 капли концентрированной азотной кислоты и нагреть до кипения. Охладив пробирку, добавить 3 капли 1% раствора нитрозо-Р-соли и несколько капель 10% гидрофосфата натрия. Окраска усиливается при стоянии. Для того чтобы убедиться в том, что окраску в этой реакции дает кобальт, повторяют опыт, взяв вместо витамина раствор хлористого кобальта (2 мг%).

Работа 5. Проба с медью на витамин РР (никотиновую кислоту)

Витамин РР входит в состав коферментов НАД и НАДФ, участвующих в окислительно-восстановительных реакциях.

При нагревании витамина РР с раствором ацетата меди образуется плохо растворимый синий осадок медной соли витамина.

Ход работы. 5-10 мг никотиновой кислоты растворить при нагревании в 15 каплях 10% раствора уксусной кислоты. К нагретому до кипения раствору добавить равный объем уксуснокислой меди. Жидкость окрашивается в голубой цвет и выпадает в осадок медная соль никотиновой кислоты.

Работа 6. Реакции на витамин Р (рутин)

Под термином витамин Р объединяется группа веществ – катехины, флавины, флавононы и др., которые проявляют сходную биологическую активность – повышают резистентность капилляров, участвуют в окислительно-восстановительных реакциях, функционально связаны с витамином С.

1) Реакция с хлоридом железа (III). Хлорид железа образует с рутином комплексные соединения, окрашенные в зеленый цвет.

Ход работы. К 1-2 мл насыщенного водного раствора рутина добавить несколько капель 1% раствора хлорида железа. Развивается окраска вследствие образования комплексного соединения хлорида железа с рутином.

2) Реакция с концентрированной H₂SO₄. Концентрированная серная кислота образует с флавонами и флавонолами соли, растворы которых имеют ярко-желтую окраску.

Ход работы. К 1-2 мл насыщенного водного раствора рутина осторожно по стенке пробирки добавить 1 мл концентрированной H₂SO₄. На границе раздела возникает окрашенное в желтый цвет кольцо.

Работа 7. Реакция на витамин А (ретинол)

Витамин А участвует в процессах фоторецепции (входит в состав простетической группы хромопротеина, родопсина), участвует в регуляции проницаемости биомембран, в окислительно-восстановительных реакциях, обладает антиоксидантными свойствами.

Серная кислота отнимает от витамина А воду с образованием цветных продуктов реакции. Аналогичную реакцию дает провитамин А - каротин.

Ход работы. В сухую пробирку внести 1 каплю рыбьего жира в хлороформе, добавить 1 каплю концентрированной H₂SO₄. Развивается синее окрашивание, переходящее в буро-красное.

Для обнаружения провитамина А взять кусочки мякоти ягод шиповника, добавить хлороформ (1/3 пробирки), встряхивать несколько минут. К нескольким каплям экстракта добавить 1 каплю концентрированной H₂SO₄.

Работа 8. Бромхлороформная проба на витамин D (кальциферолы)

Витамин Д участвует в регуляции транспорта кальция и фосфатов через биологические мембраны.

Ход работы. В сухую пробирку внести 1-2 капли рыбьего жира и 2-4 капли раствора брома в хлороформе. Раствор витамина Д с раствором брома в хлороформе приобретает зелено-голубой цвет.

Работа 9. Реакция на викасол (водорастворимый аналог витамина К)

Витамин К участвует в биосинтезе протромбина и других факторов свертывания крови.

Ход работы. К 5 каплям спиртового раствора викасола добавить 5 капель раствора цистеина и 4 капли NаОН. Раствор викасола в щелочной среде при добавлении цистеина окрашивается в желто-оранжевый цвет..

Работа 10. Качественная реакция на витамин Е (токоферол)

Витамин Е обладает антиоксидатным действием, участвует в окислительно-восстановительных реакциях, входит в состав биомембран, у многих животных является «витамином размножения».

Ход работы. В сухую пробирку внести 5 капель 0,1% спиртового раствора витамина Е и прибавить 10 капель концентрированной HNO₃. При встряхивании образуется эмульсия, которая постепенно окрашивается в красный цвет. При стоянии эмульсия расслаивается и окраска остается в верхнем масляном слое. Реакция обусловлена окислением токоферола до продукта, имеющего хиноидную структуру красного цвета. Цветную реакцию с HNO₃ используют для количественного определения витамина Е.

Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 40; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

⇐ Предыдущая 36 37 38 39 404142 43 44 45 Следующая ⇒

Мы поможем в написании ваших работ!