Лабораторная работа 5. Количественное определение содержания неорганического фосфора в биологических жидкостях
В организме человека содержатся органические и неорганические фосфаты. 85% фосфатов содержится в костях. Фосфорные группы есть в фосфопротеинах, нуклеиновых кислотах, фосфолипидах, нуклеотидных коферментах. Важное биологическое значение имеют макроэргические фосфаты – АТФ, АДФ, креатинфосфат. Моно- и дигидрофосфаты калия или натрия образуют фосфатную буферную систему. Регуляция обмена фосфатов осуществляется вместе с кальцием. Усиливая остеолиз, паратгормон увеличивает содержание фосфатов в крови. Кальцитонин тормозит процесс остеолиза. В почках паратгормон снижает реабсорбцию фосфатов.
Принцип метода: неорганический фосфат образует с молибденовой кислотой, в сильно кислой среде фосфомолибденовую кислоту, восстанавливающуюся в присутствии железа (ІІ) в молибденовую синь. Осаждаемые индикаторным реагентом белки растворяются при добавлении стабилизатора – триэтаноламина. Оптическая плотность реакционного раствора пропорциональна концентрации неорганического фосфора в пробе.
Материалы и реактивы:
1. Индикаторный реагент:
- молибдат аммония (40±2) мМ
- серная кислота (5±0,25) М
- стабилизаторы, активаторы.
2.Раствор стабилизатора: триэтаноламин (3,42±0,17) М
3.Калибровочный раствор фосфора (1,615±0,08) мМ или 50 мкг/л
Ход работы:
Анализ проводится в соответствии со схемой, приведенной в таблице.
| Отмерить в кювету, мл | Опытная проба | Калибр. проба | Холостая проба |
| Образец | 0,10 | - | - |
| Калибровочный раствор | - | 0,10 | - |
| Дистиллированная вода | - | - | 0,10 |
| Индикаторный реагент | 2,00 | 2,00 | 2,00 |
| Перемешать, выдержать 5-6 мин. при комнатной температуре (от + 20 0С до +25 0С) и измерить оптическую плотность опытной пробы (Еопыт.), и калибровочной пробы (Екалиб.) против холостой пробы (окраска устойчивая в течение 30 мин) при длине волны 570-660 нм в кюветах толщиной 10 мм. Если после добавления раствора стабилизатора раствор не очистился – необходимо добавить в каждую пробирку по одной капле 1 М NaOH. |
Расчет концентрации фосфора:
|
|
|
,где
где 1,615(50) – концентрация фосфора в калибровочном растворе, мМ (мкг/л);
Еопыт. – оптическая плотность исследуемой пробы, ед. опт. плотности;
Екалиб. – оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. плотности;
С – концентрация фосфора в исследуемой пробе, мМ (мкг/л).
Полученную концентрацию фосфора в моче необходимо умножить на коэффициент разведения – 20.
Нормальное содержание фосфора:
| Сыворотка | мМ | мкг/л |
| Взрослые 12-60 лет | 0,87-1,45 | 27-45 |
| Мужчины старше 60 лет | 0,74-1,20 | 23-37 |
| Женщины старше 60 лет | 0,90-1,32 | 28-41 |
| Новорожденные | 1,45-2,91 | 45-90 |
| Ребенок | 1,45-2,16 | 45-67 |
| Дети | 1,45-1,78 | 4,5-5,5 |
| Моча | 29-48 ммоль/сут. | 0,9-1,5 г/сут. |
Контрольные вопросы по теме ”Молекулярные механизмы действия гормонов на клетки-мишени”:
|
|
|
1. Гормоны: общая характеристика; роль гормонов и других биорегуляторов в системе межклеточной интеграции функций организма человека.
2. Классификация гормонов и биорегуляторов: соответствие структуры и механизмов действия гормонов.
3. Реакция клеток-мишеней на действие гормонов. Мембранные (ионотропные, метаботропные) и цитозольные рецепторы.
4. Биохимические системы внутриклеточной передачи гормональных сигналов: G-белки, вторичные посредники (цАМФ, Са2+, кальмодулин, ИФ3, ДАГ).
5. Молекулярно-клеточные механизмы действия стероидных и тиреоидных гормонов.
Контрольные вопросы по теме ”Биохимия гормональной регуляции метаболизма”:
1. Гормоны гипоталамуса – либерины и статины.
2. Гормоны передней части гипофиза: соматотропин (СТГ), пролактин, патологические процессы, связанные с нарушением функции этих гормонов.
3. Гормоны задней части гипофиза. Вазопрессин и окситоцин: строение, биологические функции.
4. Инсулин: строение, биосинтез и секреция; влияние на обмен углеводов, липидов, аминокислот и белков. Ростстимулирующие эффекты инсулина.
5. Глюкагон: регуляция обмена углеводов и липидов.
|
|
|
6. Тиреоидные гормоны: структура, биологические эффекты Т4 и Т3. Нарушение метаболических процессов при гипо- и гипертиреозе.
7. Катехоламины (адреналин, норадреналин, дофамин): строение, биосинтез, физиологические эффекты, биохимические механизмы действия.
8. Стероидные гормоны коры надпочечников (С21-стероиды) – глюкокортикоиды и минералокортикоиды; строение, свойства.
9. Женские половые гормоны: эстрогены, прогестерон. Физиологические и биохимические эффекты, связь с фазами овуляционного цикла.
10. Мужские половые гормоны (С19-стероиды). Физиологические и биохимические эффекты андрогенов; регуляция синтеза и секреции.
11. Гормональная регуляция гомеостаза кальция в организме. Паратгормон, кальцитонин, кальцитриол.
12. Эйкозаноиды: строение, биологические и фармакологические свойства. Аспирин и другие нестероидные противовоспалительные средства как ингибиторы синтеза простагландинов.
Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 42; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!