Лабораторная работа 4. Количественное определение общего кальция в биологических жидкостях

Функции кальция в организме разнообразны и обеспечиваются особенностями его распределения и химическими свойствами ионов, в частности способностью специфично и крепко связываться с белками. Соли кальция обеспечивают жёсткую структуру костей и зубов. Органической основой кости, на которую откладываются соли кальция, является коллаген. Кристаллы солей кальция в кости связаны с поверхностью коллагеновых нитей. Ионы минерального компонента костей постоянно обмениваются путём диффузии с ионами межклеточной жидкости и плазмы крови, благодаря чему костная ткань служит депо минеральных солей организма, особенно кальция.

Ионы кальция играют роль вторичного посредника в реализации ответа клеток на внешние сигналы (нервные, гормональные и т.д.). При действии сигналов открываются кальциевые каналы, и содержание ионов кальция в цитоплазме возрастает в тысячи раз. Ионы связываются со специфическими внутриклеточными белками, запускают цепь реакций, что приводит к физиологическому ответу клетки. Такими Са²⁺-связывающими белками являются тропонин С (регуляция сокращения скелетных мышц и миокарда), легкая цепь миозина (регуляция сокращения гладкой мускулатуры), витамин D-зависимый белок (регуляция всасывания кальция в кишечнике), белок S-100 нервной ткани (регуляция фосфорилирования белков), кальмодуллин (образование комплекса с ионами кальция, который активирует многие ферментов). С прекращением действия внешнего сигнала Са²⁺-АТФазы выкачивают ионы кальция из цитоплазмы, активный комплекс диссоциирует и активность ферментов снижается. Ионы кальция принимают участие в процессе свёртывания крови. Ионы кальция влияют на порог возбудимости нервных клеток.

Концентрацию ионов кальция в плазме крови регулируют паратгормон и кальцитонин, а также витамин D. Паратгормон стимулирует процесс резорбции костной ткани и выхода кальция и фосфатов в кровь, а кальцитонин тормозит этот процесс. Синергистом паратгормона в действии на костную ткань является производное витамина D 1,25-диоксихолекальциферол. В почках паратгормон стимулирует реабсорбцию Са²⁺ дистальными канальцами. Таким образом, эффективность регуляции гомеостаза Са²⁺ зависит от функционирования паращитовидных и щитовидной желёз, почек, кишечника и поступления в организм кальция и витамина D.

Принцип метода: ионы кальция в щелочной среде вступают в реакцию с окрезолфталеин-комплексоном, образуя окрашенный комплекс. Интенсивность фиолетовой окраски образующегося комплекса пропорциональна концентрации кальция в анализируемой пробе.

Материалы и реактивы:

1.Хромоген:

a-крезолфталеин комплексон (0,12±0,01) мМ

b-оксихинолин (16,0-0,16)мМ

соляная кислота (60,0±6,00) мМ

2.Буфер: моноэтаноламин (0,8±0,08) мМ

3.Калибровочный раствор кальция (2,5±0,05) мМ или 0,1 г/л

Ход работы:

Анализ проводится в соответствии со схемой, представленной в таблице

Отмерить в кювету, мл	Холостая проба	Калибровочная проба	Опытная проба
Хромоген	2,50	2,50	2,50
Образец	-	-	0,15
Калибровочный раствор	-	0,05	-
Буфер	2,50	2,50	2,50
Н2О дист.	0,05	-	-
Смешать и выдержать (10±1) мин при комнатной температуре (от +20 до +25 0С). Оптическую плотность опытной (Еопыт.) и калибровочной пробы (Екалибр.) измерить против холостой не позднее (30±5) мин при 550-590 нм в кювете с длиной оптического пути 5 или 10 мм.

 

Расчет результатов:

Кальций (мМ) = 2,5 ´ Е_опыт / Е_{калибр.}

или

Кальций (г/л) = 0,1 ´ Е_опыт / Е_{калибр.}

 

Для расчета концентрации кальция в суточной моче полученное выше значение (мМ) умножают на объем суточной мочи, выраженный в л (получают ммоль/сут.), или значение (г/л) умножают на объем суточной мочи, выраженный в л, и коэффициент 10 (получают г/сут.).

Нормальные величины содержания кальция:

Сыворотка	г/л	мМ
- 9-10 дней	0,076-0,104	1,90-2,60
- 10 дней – 24 месяца	0,090-0,110	2,25-2,75
- 24 месяца – 12 лет	0,088-0,108	2,20-2,70
- 12-18 лет	0,040-0,102	2,10-2,55
- 18-60 лет	0,086-10,0	2,15-2,50
- 60-90 лет	0,088-0,102	2,20-2,55
- старше 90 лет	0,082-0,096	2,05-2,40
Моча, суточная норма	г/сут.	ммоль/сут.
- Отсутствие Са в диете	0,005-0,04	0,13-1,00
- Потребление Са ниже среднего уровня	0,05-1,5	1,25-3,75
- Средний уровень потребления Са	0,1-0,3	2,50-7,50

Средний уровень потребления Са – 0,800 г/сут. (20 ммоль/сут.)

---

Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 36; Мы поможем в написании вашей работы!

Поделиться с друзьями:

---

---

Мы поможем в написании ваших работ!