Б. Спектрофотометрический метод определения содержания фибриногена по Белицеру
Принцип метода. В случае добавления тромбина в плазму крови образуется сгусток, который высушивают на фильтровальной бумаге и растворяют в ацетатной кислоте. Содержание фибриногена определяют спектрофотометрически.
Материалы и реактивы: плазма, фосфатный буфер (0,06 М) с рН 7; 0,15 М раствор хлорида натрия, 0,04 М раствор моноиодуксусной кислоты, 1,5% раствор уксусной кислоты, тромбин.
Ход работы. В пробирку диаметром 9-10 мм и высотой 85-90 мм поместить 0,2 мл плазмы крови, добавить 1,6 мл 0,06 М фосфатного буфера. Смесь поместить в водяной термостат (37 0С). Спустя несколько минут добавить 0,1 мл 0,04 М раствора моноиодуксусной кислоты; через 3 минуты добавить 0,1 мл тромбина. Так как тромбин содержит ионы кальция, то в его добавлении нет необходимости. В случае использования препаратов тромбина, не содержащих кальций, в пробу перед добавлением тромбина добавить 0,1 мл 0,02 М раствора хлорида кальция. После добавления каждого компонента содержание пробирки тщательно перемешать стеклянной палочкой с шершавой поверхностью. Палочку оставить в пробирке. Раствор слить и окончательно выделить сгусток, прижимая палочку к стенкам пробирки и медленно помешивая. Сгусток промыть два раза в 0,15 М раствора хлорида натрия, опуская палочку несколько раз в каждую из двух склянок с раствором (приблизительно по 50 мл). Затем один раз промыть в охлажденной дистиллированной воде. Жидкость для промывания с поверхности сгустка удалить прикосновением фильтровальной бумаги. Полученный сгусток растворить, помешивая, в 5 мл 1,5% раствора уксусной кислоты. Растворение заканчивается через 5 минут. Содержание белка в растворе определить спектрофотометрически, измеряя экстинкцию при длине волны 280 и 320 нм. Содержание фибриногена (Х) в опыте рассчитывают по формуле:
|
|
|
г/л,
где Е (280-320) – разница между значениями экстинкции при длине волны 280 и 320 нм;
255 – коэффициент для выражения в граммах на литр количества фибриногена во время анализа 0,2 мл плазмы;
15,067 – коэффициент экстинкции (Е1 %, 1 см) для фибрина в ацетатной кислоте при длине волны 280 нм.
Клинико-диагностическое значение. Гиперфибриногенемия наблюдается при различных воспалительных процессах из-за ускоренного биосинтеза белков острой фазы и иммуноглобулинов, а также при злокачественных опухолях, лейкозе, острой (инфаркт миокарда) и хронической ишемической болезни сердца.
Гипофибриногенемия развивается при врожденных афибриногенемиях, приобретенных нарушениях синтеза фибриногена (проявляющиеся у больных хроническим гепатитом, циррозом печени, эритремии, при травматическом и посттрансфузионном шоке), тромбогеморагическом синдроме.
|
|
|
К снижению уровня фибриногена может приводить усиленный фибринолиз и фибриногенолиз, а также рост потребности в фибрине при сосудистом сворачивании крови.
Снижение содержания фибриногена плазмы (фибриногена А) до уровня, ниже, чем 1 г/л, может быть фактором риска появления кровотечения из сосудов внутренних органов.
По мере старения организма возрастает содержание фибриногена и, соответственно, повышается коагуляция.
Контрольные вопросы по теме ”Биохимия и патобиохимия крови”:
1. Биохимические и физиологические функции крови в организме человека. Дыхательная функция эритроцитов.
2. Гемоглобин: механизмы участия в транспортировании кислорода и диоксида углерода. Варианты и патологические формы гемоглобинов человека.
3. Метаболизм порфиринов: строение гема; схема реакций биосинтеза протопорфирина IХ и гема.
4. Наследственные нарушения биосинтеза порфиринов, типы порфирий.
5. Буферные системы крови. Нарушение кислотно-основного баланса в организме (метаболический и респираторный ацидоз, алкалоз).
6. Биохимический состав крови человека. Белки плазмы крови и их клинико-биохимическая характеристика.
7. Ферменты плазмы крови; значение в энзимодиагностике заболеваний органов и тканей.
|
|
|
8. Каллекреин-кининовая система крови и тканей. Лекарственные средства – антагонисты кининообразования.
9. Небелковые органические соединения плазмы крови.
10. Неорганические компоненты плазмы крови.
11. Биохимические и функциональные характеристики системы гемостаза.
12. Система свёртывания крови; характеристика отдельных факторов; механизмы функционирования каскадной системы свёртывания крови.
13. Роль витамина К в реакциях коагуляции; лекарственные средства – синергисты и антагонисты витамина К.
14. Антисвёртывающая система крови; характеристика антикоагулянтов. Наследственные нарушения процесса свёртывания крови.
15. Фибринолитическая система крови. Лекарственные средства, влияющие на процессы фибринолиза.
16. Иммуноглобулины; биохимическая характеристика отдельных классов иммуноглобулинов человека.
17. Медиаторы и гормоны иммунной системы: интерлейкины, интерфероны, белково-пептидные факторы регуляции роста и пролиферации клеток.
18. Система комплемента; биохимические компоненты системы комплемента человека; классический и альтернативный пути активации.
19. Биохимические механизмы иммунодефицитных состояний: первичные (наследственные) и вторичные иммунодефициты.
Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 32; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!