Лабораторная работа 9. Количественное определение креатинина в сыворотке крови и моче
Креатинин – один из конечных продуктов азотистого обмена позвоночных животных и человека, выделяемый с мочой. Креатинин образуется из креатинфосфата путём неферментативного дефосфорилирования.
В печени и поджелудочной железе из аргинина, глицина и метионина синтезируется креатин. В скелетных мышцах, миокарде и нервной ткани в реультате обратимой реакции переноса фосфорной группы с АТФ на креатин образуется креатинфосфат – макроэргическое соединение, которое выполняет роль донора энергии для сокращения мускулатуры и активного транспорта ионов в нервной ткани.
При нарушении обмена креатина (например, при мышечных дистрофиях) большая его часть выводится вом виде креатинина.
Креатинин не абсорбируется в почечных канальцах, потому его содержание в моче может служить также показателем состояния почек.
Принцип метода: пикриновая кислота в щелочной среде образует с креатинином продукт оранжевого цвета (производное 2,4,6-три- нитроциклогексадиена) Интенсивность окраски опытного раствора прямо пропорциональна концентрации креатинина в пробе. В сыворотке крови креатинин исследуется после депротеинирования раствором ТХУ, в моче – после разведения.
Материалы и реактивы:
1. Раствор пикриновой кислоты (0,04±0,002) М
2. Раствор трехлоруксусной кислоты (1,22±0,061) М
3. Гидроокись натрия: раствор 2,3 Н или сухой NaOH
4. Лиофилизированный креатинин для приготовления 8 мл калибровочного раствора (442,5±22) мкМ или 8 мл готового раствора креатинина (422,5±22) мкМ
|
|
|
Ход работы:
Анализ биологических жидкостей проводится в соответствии с таблицей.
| Отмеряемый раствор, мл | Опытная проба | Калибровочная проба | Холостая проба |
| Сыворотка или моча, разведенная в 100 раз | 1,0 | - - | - - |
| Дистиллированная вода | 2,0 | 2,0 | 3,0 |
| Калибровочный раствор | - | 1,0 | - - |
| Перемешать, центрифугировать 5 мин. при 3000 об./мин. | |||
| Надосадочная жидкость | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
| Раствор гидроокиси натрия | 1,0 | 1,0 | 1,0 |
| Раствор пикриновой кислоты | 1,0 | 1,0 | 1,0 |
| Перемешать, выдержать 20 минут при комнатной температуре, фотометрировать против холостой пробы. Окраска стабильна в течение (20±2) мин. Оптическую плотность растворов измеряют при длине волны 490-520 нм в кювете с длиной оптического пути 10 или 5 мм. |
Нормальные значения концентрации креатинина в сыворотке:
Подростки: – (44-88) мкМ;
18-60 лет: М – (80-115) мкМ;
Ж – (53-97) мкМ;
60-90 лет: М – (71-115) мкМ;
Ж – (53-106) мкМ.
Расчет концентрации креатинина в пробе проводят по формуле:
,
где С – концентрация креатинина в пробе, г/л (мкМ);
0,05 (442) – калибровочная концентрация креатинина, г/л (мкМ);
Е опыт. – оптическая плотность опытной пробы, ед. опт. плотности;
|
|
|
Екал. – оптическая плотность калибровочной пробы, ед. опт. плотности.
Количество креатинина в суточной моче определяют по формуле
,
где КК – количество креатинина в суточной моче, мг;
С – концентрация креатинина в моче, мг %;
А – суточное количество мочи, мл;
В – количество мочи, взятой для анализа, мл.
Нормальные значения содержания креатинина в моче:
Подростки – (8-30) мг/кг/сут. (71-265) мкмоль/кг/сут.;
Взрослые М:– (14-26) мг/кг/сут. (124-230) мкмоль/кг/сут.;
Ж:– (11-20) мг/кг/сут. (97-177) мкмоль/кг/сут.
За сутки с мочой у здорового человека – (4,4-17,7) мМ.
Контрольные вопросы по теме ”Функциональная и клиническая биохимия органов и тканей”:
1. Биохимические функции печени: углеводная, белоксинтезирующая, мочевинообразовательная, желчеобразовательная, регуляция липидного состава крови.
2. Детоксикационная функция печени; типы реакций биотрансформации ксенобиотиков и эндогенных токсинов.
3. Реакции микросомального окисления. Цитохром Р-450; цепи транспорта электронов в мембранах эндоплазматического ретикулума гепатоцитов.
4. Реакции конъюгации в гепатоцитах: биохимические механизмы, функциональные значения.
5. Катаболизм гемоглобина и гема; образование и структура желчных пигментов.
|
|
|
6. Роль печени в обмене желчных пигментов. Патобиохимия желтух; типы желтух; наследственные (ферментные) желтухи, биохимическая диагностика желтухи.
7. Водно-солевой обмен в организме. Внутриклеточная и внеклеточная вода; обмен воды, натрия, калия.
8. Роль почек в регуляции объема, электролитного состава и рН жидкостей организма. Биохимические механизмы мочеобразовательной функции почек.
9. Ренин-ангиотензиновая система почек. Гипотензивные лекарственные средства – ингибиторы ангиотензинпреобразующего фермента.
10. Биохимический состав мочи человека в норме и при развитии патологических процессов. Клинико-диагностическое значение анализа состава мочи.
11. Биохимический состав мышц. Белки миофибрилл: миозин, актин, тропомиозин, тропонин.
12. Молекулярные механизмы мышечного сокращения. Роль ионов Са2+ в регулировании сокращения и расслабления мышц.
13. Биоэнергетика мышечной ткани; источники АТФ; роль креатинфосфата в обеспечении энергии мышечного сокращения.
14. Биохимия нервной системы: особенности биохимического состава и метаболизма головного мозга.
15. Энергетический обмен в головном мозге человека. Значение аэробного окисления глюкозы; изменения в условиях физиологического сна и наркоза.
|
|
|
16. Биохимия нейромедиаторов; рецепторы нейромедиаторов и физиологически активных соединений.
17. Пептидергическая система головного мозга: опиоидные пептиды, рецепторы опиоидных пептидов.
18. Нарушение обмена медиаторов и модуляторов головного мозга при психических расстройствах. Нейрохимические механизмы действия психотропных средств.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Березов Т.Т., Коровкин Б.Ф. Биологическая химия.– М.: Медицина, 1998.– 704 с.
2. Марри Р., Греннер Д., Мейес П., Родуэл В. Биохимия человека.– М.: Мир, 1993 (1 и 2 тт.)
3. Гонський Я.І., Максимчук Т.П. Біохімія людини: Підручник. – Тернопіль: Укрмедкнига, 2001. – 736 с.
4. Кольман Я., Рём К.-Г. Наглядная биохимия. – Москва: Мир, 2000. – 469 с.
5. Практикум з біологічної хімії/За ред. О.Я. Склярова. – К.: Здоров’я, 2002. – 298 с.
6. Руководство к лабораторным и семинарским занятиям по биологической химии /Под ред. В.Ф. Десенко. Х.: Основа, 1996. – 432 с.
7. Б.Уильямс, К. Уилсон Методы практической биохимии. Пер.с англ.– М.: Мир, 1978.– 268 с.
8. Биологическая химия. Практикум/ Под общ.ред.Ю.В.Хмелевского.–К.: Вища шк. Головное изд-во, 1985.– 207 с.
9. Строев Е.А., Макарова В.Г. Практикум по биологической химии.– М.:Высшая школа.– 1986.
10. Біохімія (загальний курс). Методичны вказівки до лабораторного практикуму для студентів біологічного факультету/ Упоряд. Буланкіна Н.І., Нікітченко І.В., Бараннік Т.В. – Харків: Вид-во Харків.нац.ун-та, 2003. – 95 с.
11. Довідник із застосування міжнародної системи одиниць (SI) у медицині/ Укладачі М.І.Пилипенко, Є.М.Мамотюк/ – Харків, інститут медичної радіології ім.С.П.Григор’єва АМНУ, Харківський державний медичний університет, 2001.– 106 с.
Содержание
Введение 3
Правила работы в биохимической лаборатории 4
Материал для диагностических исследований. Принципы
забора материала для исследования 8
Методы биохимических исследований 16
МОДУЛЬ 1. ОБЩИЕ ЗАКОНОМЕРНОСТИ МЕТАБОЛИЗМА 27
Тема 1. Введение в биохимию. Биохимические компоненты клеток 27
Лабораторная работа 1. Разделение аминокислот методом
распределительной хроматографии 27
Лабораторная работа 2. Качественные реакции на белки
и аминокислоты 30
Лабораторная работа 3. Осаждение белков 35
Лабораторная работа 4. Высаливание как метод разделения
белков сыворотки крови 37
Тема 2. Ферменты и коферменты 39
Лабораторная работа 5. Свойства ферментов 39
Лабораторная работа 6. Действия некоторых ферментов (уреаза) 43
Лабораторная работа 7. Определение амилазной активности
по Вольгемуту 43
Тема 3. Основные закономерности метаболизма. Цикл Кребса 47
Тема 4. Молекулярные основы биоэнергетики 47
Лабораторная работа 8. Исследование сукцинатдегидрогеназы
мышц 50
Лабораторная работа 9. Исследование цитохромооксидазы мышц 51
МОДУЛЬ 2. МЕТАБОЛИЗМ УГЛЕВОДОВ, ЛИПИДОВ,
АМИНОКИСЛОТ И ЕГО РЕГУЛЯЦИЯ 53
Тема 1. Метаболизм углеводов и его регуляция 53
Лабораторная работа 1. Химические свойства углеводов 53
Лабораторная работа 2. Определение концентрации глюкозы в
сыворотке крови глюкозооксидазным методом 59
Лабораторная работа 3. Выявление сиаловых кислот
в сыворотке крови 63
Лабораторная работа 4. Количественное определение
концентрации молочной кислоты в сыворотке крови
по методу Бюхнера 64
Лабораторная работа 5. Количественное определение
концентрации пировиноградной кислоты в моче
колориметрическим методом 66
Тема 2. Метаболизм липидов и его регуляция 69
Лабораторная работа 6. Определение содержания общих липидов
в сыворотке крови 69
Лабораторная работа 7. Определение содержания холестерола
в сыворотке крови 72
Лабораторная работа 8. Проба на кетоновые тела 74
Лабораторная работа 9. Фурфуроловая проба на желчные
кислоты 75
Тема 3. Метаболизм аминокислот. Энзимопатии
аминокислотного обмена 76
Лабораторная работа 10. Определение активности
аминотрансфераз 76
Лабораторная работа 11. Определение концентрации мочевины
в сыворотке крови и моче 82
МОДУЛЬ 3. МОЛЕКУЛЯРНАЯ БИОЛОГИЯ. БИОХИМИЯ МЕЖКЛЕТОЧНЫХ КОММУНИКАЦИЙ 85
Тема 1. Основы молекулярной биологии 85
Лабораторная работа 1. Определение состава нуклеопротеинов 85
Лабораторная работа 2. Определение концентрации
мочевой кислоты 88
Тема 2. Основы молекулярной генетики 93
Тема 3. Молекулярные механизмы действия гормонов
на клетки-мишени 93
Тема 4. Биохимия гормональной регуляции метаболизма 93
Лабораторная работа 3. Качественные реакции на гормоны.
Определение концентрации адреналина 93
Лабораторная работа 4. Количественное определение общего
кальция в биологических жидкостях 98
Лабораторная работа 5. Определение содержания
неорганического фосфора в биологических жидкостях 100
МОДУЛЬ 4. БИОХИМИЯ ОРГАНОВ И ТКАНЕЙ 104
Тема1. Биохимия питания человека 104
Лабораторная работа 1. Качественные реакции на витамины 104
Лабораторная работа 2. Количественное определение витаминов 108
Тема 2. Биохимия и патобиохимия крови 113
Лабораторная работа 3. Определение концентрации
гемоглобина в крови 113
Лабораторная работа 4. Определение концентрации билирубина
в сыворотке крови 115
Лабораторная работа 5. Количественное определение белка
в сыворотке крови методом Кирка 118
Лабораторная работа 6. Определение концентрации фибриногена
в плазме крови 121
Тема 3. Функциональная и клеточная биохимия органов и тканей 127
Лабораторная работа 7. Определение содержания креатинина
в сыворотке крови и моче 127
Лабораторная работа 8. Биохимия мочи. Выявление нормальных
и патологических компонентов мочи 129
Литература 138
Навчальне видання
Біохімія
(загальний курс)
Методичні вказівки
до лабораторного практикуму
для студентів медицинського факультету
Упорядники:
Ганусова Галина Володимирівна
Сєдова Крістіна Володимирівна
Князєва Марина Владиславівна
Відповідальний за випуск Є.Е.Перський
Комп’ютерний набір і верстка К.В.Сєдової
Друк
Підп.до друку..2011. Формат 84´60 1 /16. Папір тип. Друк офсетний. Умов.друк.аркуш.. Обл.-вид.аркуш. Наклад прим.
| 61007, Харків, пл.Свободи, 4, Харківський національний університет ім.В.Н.Каразіна |
Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 51; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!