Лабораторная работа 11. Определение концентрации мочевины в сыворотке крови и моче
Мочевина – основной конечный продукт азотистого катаболизма в организме млекопитающих. Содержание ее в плазме крови – важный показатель состояния печени, где она образуется при обезвреживании аммиака, и почек, регулирующих ее поступление в мочу (при этом некоторая часть ее может реабсорбироваться). Кроме того, концентрация мочевины отражает соотношение между азотистым катаболизмом и анаболизмом в организме. Определение содержания мочевины широко используется в диагностических целях.
Принцип метода: Мочевина образует с диацетилмонооксимом при наличии тиосемикарбазида и солей Fе в кислой среде комплекс красного цвета.
Материалы и реактивы:
1) Рабочий раствор: содержимое 1 ампулы с реактивом № 1 (раствор диацетилмонооксима и солей железа) и 1 ампулы с реактивом № 2 (раствор тиосемикарбазида) количественно перенести в мерную колбу на 100 мл, довести до метки дистиллированной водой, перемешать, хранить при 0—+5°С.
2) Эталон мочевины – 16,65 мМ
3) Раствор трихлоруксусной кислоты 5%
4) Раствор серной кислоты 15%
Ход работы: работу проводят согласно таблице.
| Опытная проба | Эталон | Холостая | |
| Сыворотка или развед. моча | 0,01 | – | – |
| Эталон мочевины (раствор) | – | 0,01 | – |
| Дист.вода | – | – | 0,01 |
| Рабочий раствор | 2,0 | 2,0 | 2,0 |
| Оптическая плотность (Е) | – |
В химическую пробирку отмерить 1 мл рабочего раствора и прибавить 1 мл 15% раствора серной кислоты. К полученной смеси прибавить 0,01 мл сыворотки крови или разведенной (в 50 или 100 раз) мочи, перемешать.
|
|
|
Пробирку закрыть алюминиевой фольгой и поставить в кипящую воду на 10 мин. Охладить пробирку и измерить на ФЭКе оптическую плотность пробы (Еопыт) и эталона (Еэталон) против холостой пробы.
РАСЧЕТ концентрации мочевины в опытной пробе
С опыт = С эталон ´ Е опыт /Е эталон (ммоль/л),
где С эталон – концентрация мочевины в эталоне (равная 16,65 мМ
В норме содержание мочевины в крови составляет 200-500 г/л или 3,33-8,32 мМ.
Расчет мочевины в суточной моче:
С г/сутки =Сопыт 
,
где А – суточное количество мочи, мл
В – количество мочи, взятое для анализа, мл
К – коэффициент разведения мочи
1000 – коэффициент перевода величины экскреции мочевины из мг в г
Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 32; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!