Опыт 2. Определение концентрации глюкозы в биологических жидкостях ортотолуидиновым методом.
Для определения глюкозы в биологических жидкостях по данному методу в настоящее время различными фирмами выпускаются наборы реактивов. Поэтому суть работы сводится только к правильному использованию набора реактивов согласно инструкции по применению.
Глюкоза с ортотолуидином в кислой среде при повышенной температуре образует комплексное соединение сине-зеленого цвета. Интенсивность окраски раствора пропорциональна концентрации глюкозы в исследуемой пробе.
Определение без депротеинирования.
Без осаждения белков анализируют сыворотку и плазму крови, мочу. Мочу перед анализом разбавляют дистиллированной водой в соотношении от 1:10 до 1:500 и в последующем результат умножают на степень разведения.
1. Приготовьте опытную, калибровочную и контрольную пробы по схеме:
| Объем компонента (мл) | |||
| опытная проба | калибровочная проба | контрольная проба | |
| Рабочий раствор реактивов (ортотолуидиновый реактив) | 2,7 | 2,7 | 2,7 |
| Исследуемый образец | 0,3 | - | - |
| Калибровочный раствор глюкозы | - | 0,3 | - |
| Дистиллированная вода | - | - | 0,3 |
2. Перемешайте. Закройте пробирки фольгой или крышкой.
3. Поместите пробирки в кипящую водяную баню точно на 8 минут.
4. Охладите пробирку под струей холодной воды.
5. Измерьте оптическую плотность опытной (D1) и калибровочной (D2) проб против холостой пробы при длине волны 620 нм в кювете с толщиной поглощающего слоя 5 мм.
|
|
|
Рассчитайте концентрацию глюкозы по формуле:
где Х - концентрация глюкозы в калибровочном растворе.
Сравните полученные величины с нормальными значениями. Сделайте вывод о состоянии животного. В случае отклонения полученных значений от нормальных величин, предложите возможные причины, объясняющие данный результат.
Назовите факторы, вызывающие гипогликемию и гипергликемию в крови животных.
Дата добавления: 2016-01-05; просмотров: 22; Мы поможем в написании вашей работы! |
Мы поможем в написании ваших работ!